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摘 要：目的 观察并探究 p27kip1 基因转染联合化疗对胃癌细胞生长产生的影响。方法 把 p27kip1 重组腺病毒转染胃癌细胞 SGC-7901，采用免疫细胞化学法检测 p27kip1 的表达情况。整合 5- 氟尿嘧啶（5-FU）与顺铂（DDP）， 检测细胞生长抑制率，加入 3H- 胸腺嘧啶核苷（3H-TdR）并检测 DNA 合成量。
结果 p27kip1 基因转染胃癌细胞中后， 表达明显增强，融合 5-FU 与 DDP 后，细胞生长抑制率有所提升，加入一定 3H-TdR 后细胞生长抑制率明显减少（P< 0.05）。结论 p27kip1 基因转染与化疗方法联合应用，对胃癌细胞生成效率起到明显的抑制作用，对胃癌患者临床治疗方案有所指导。
关键词： 胃癌细胞；细胞生长；p27kip1 基因转染；化疗；影响效果分析
作者：邓永.p27kip1 基因转染联合化疗对胃癌细胞生长的影响分析 [J]. 世界最新医学信息文摘 ,2018,18(67):29+31.
Effect Analysis of p27kip1 Gene Transfection Combined with Chemotherapy on Growth of Gastric Cancer Cells
DENG Yong
(Sheyang County People's Hospital, Yancheng Jiangsu 224300)
ABSTRACT： Objective to observe and explore effect of p27kip1 gene transfection combined with chemotherapy on growth of gastric cancer cells. Methods transfect gastric cancer cell SGC-7901 with p27kip1 recombinant adenovirus, and detect expression of p27kip1 with immunocytochemistry. Integrate 5- fluorouracil (5-FU) and DDP, detect cell growth inhibition rate, and DNA synthesis after adding 3H-TdR. Results after transfection of gastric cancer cells, expression of p27kip1 gene was enhanced obviously. After integration of 5-FU and DDP, cell growth inhibition rate was improved, and significantly reduced after adding some certain 3H-TdR (P< 0.05). Conclusion combined application of p27kip1 gene transfection and chemotherapy can inhibit production efficiency of gastric cancer cell significantly and guide clinical treatment scheme of gastric cancer patients.
KEY WORDS： Gastric cancer cell; Cell growth; P27kip1 gene transfection; Chemotherapy; Effect analysis
0引言
p27kip1 为细胞周期素依赖性激酶抑制剂（CKI）的重要成分之一，在上个世纪末期 Polyak 首次克隆出其基因。相关研究资料显示，在肿瘤细胞中 p27kip1 表达效率较低者其恶性程度较高，临床治疗与预后效果欠佳。最近几年中很多研究显示，p27kip1 不但具有抑制肿瘤细胞生长增殖的功效，同时也助力于肿瘤细胞凋亡、阻断肿瘤细胞转移途径等多种作用 [1]。本次研究的宗旨在解析 p27kip1 基因转染联合化疗对胃癌细胞生长的影响效果，进而阐述 p27kip1 的抑癌机制，为 p27kip1 基因治疗胃癌疾病提供理论支持，现做出如下报道。
1资料与方法
1.1一般资料。
①细胞株：胃癌细胞株 SGC-7901 从武汉大学细胞库采购，293 细胞采购于中国科学院上海细胞库。
②质粒、菌株与腺病毒：1 北京大学第一医院相关人员赠予pCMV5p27kip1 与大肠杆菌 DH5 ，军事医学科学院吴祖泽院士赠予 pACCMVPLPA 与 pIM17，我院自行提供 LacZ 重组腺病毒。③试剂类型：华美生物工程公司提供内切酶KpnI、BamHII 与 T4DNA；赛百盛基因技术有限公司规划与制造 p27kip1 eDNA 和腺病毒聚合酶链反应（PCR）引物； 中国原子能科学研究院、上海旭东海普药业有限公司与山东齐鲁制药有限公司分别提供 3H-TdR、5-FU 与 DDP 等。④ 仪器：超速冷冻离心机、，MR22i 型高速冷冻离心机以及
DB80230 型 PCR 扩增仪等。
1.2方法。
①建设 Ad-p27kip1 载体：采用 KpnI、BamHII分别作用于 pCMV5 p27kip1、pACCMVPLPA 分别以勒 n I,BamH T 双酶切，以获取 p27kip1 cD1VA 与腺病毒片段，采用定向克隆方式用 T4 DNA 连接酶衔接，产物穿过质粒 pAd- p27kip1，Lipnfectamine，以促使 pAd-p27kip1 与 pJM17 共转染293 细胞，以配制 Ad-p27kip1。
② p27kip1 的表达：把胃癌细胞接种在培养皿中，在盖玻片面上的细胞长至 40%-60% 融合时， 依照一定剂量转染细胞，连续培养 2 d 后，拿取带有细胞的盖玻片，4℃丙酮稳固，SP 免疫细胞化学法对 p27kip1 的表达情况进行检查，所有程序均按照试剂盒说明书进行。
③ MTT 法测定细胞生长抑制率：择选双数生长期胃癌细胞，将细胞数目整改为 2×105 个 /mL，接种在培养板上，并设置空白对照组。1 d 后融入浓度是 1/10 血浆峰值的 5-FU（1 μg/mL），继续培养 1 d，将 5 g/L 的 MTT10 μl 加入每一空洞， 37℃培养 4 h，去除上层清液并加入适量 DMSO，有效振荡后， 采用酶标仪在波长 550 nm 位置检测每孔吸光度（A），以计算细胞生长抑制率。
④ H-TdR 掺人法测定细胞DNA 合成率： 择选双数生长期胃癌细胞后设置每孔接种细胞数，细胞周期化，设置空白对照组。1 d 后融入浓度是1/10 血浆峰值的5-FU（1 μg/mL），继续培养 1 d，每孔加入 1 μGi 3H-TdR， 37℃培养 6 h，去除上层清液、漂洗、固定，次日检测 3H 放射强度（cpm）。
1.3统计学处理。采用 SPSS 16.0 软件包对数据进行统计处理，t 对组间数据差异进行检验。P< 0.05 时，差异有统计学意义。
2结果
p27kip1 在空白对照组、Ad-LacZ 组都是胞质表达，但是Ad-p27kip1 细胞核、细胞质都有表达，细胞核占主导（见图 1）。
A ：空白对照组 ；B ：Ad-LacZ 组 ；C:Ad-p27kip1 组图 1 染胃癌细胞后 p27kipl 的表达情况
在本次研究中，Ad-p27kip1 转染对胃癌细胞化疗敏感性产生一定影响。p27kip1 基因转染胃癌细胞中后，表达明显增强， 融合 5-FU 与 DDP 后，细胞生长抑制率有所提升，加入一定3H-TdR 后细胞生长抑制率明显减少（P< 0.05），详见表 1。
3 讨论
胃癌是临床中极为常见的一类恶性肿瘤。我国胃癌发生率位居世界首位，有关调查资料显示，当下我国每年新增胃癌患者数目大于 40 万，胃癌死亡人数高于 30 万 [2]。
因为胃癌细胞对放疗敏感性以及周边组织与脏器对放疗药物耐受性低，普通患者难以完成放射治疗，在这样的情景中化疗成为术后胃癌患者以及不能进行外科手术治疗者的主要方法，但是化疗副作用以及患者耐药性是致使胃癌治疗终止的主要诱因 [3]。在本次研究中，Ad-p27kip1 转染后，两类化疗药物的细胞生长抑制率明显提升，DNA 合成受阻，这间接的说明化疗药物抗癌功效显著提升。
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