外周血异型淋巴计数与 T 细胞亚群指标水平检测在 传染性单核细胞增多症患儿中的应用价值论文

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【 Abstract 】  Objective: To explore application value of peripheral blood atypical lymphocyte count and T cell subset index level detection in children with infectious mononucleosis (IM). Methods: 122 children with infectious mononucleosis were selected as the research objects and set as study group, and another 120 children who underwent physical examinations during the same period were selected as control group. In both groups, flow cytometry was used to detect the levels of T cell subsets and the atypical lymphocyte count in peripheral blood. Spearman correlation analysis was used to compare the correlations among the levels of atypical lymphocytes in peripheral blood, the levels of T cell subsets and IM. Results: The levels of CD3+ and CD8+ in the study group were higher than those in the control group, while the levels of CD4+ and CD4+/CD8+ were lower than those in the control group, and the differences were statistically significant (P<0.05). The levels of CD3+  and CD8+  in the children with atypical lymphocyte count >10% were higher than those in the control group, and the levels of CD4+  and CD4+/CD8+  were lower than those in the control group, and the differences were statistically significant (P<0.05). Spearman correlation analysis showed that the atypical lymphocyte count was positively correlated with the levels of CD3+  and CD8+  (r>0, P<0.05), and negatively correlated with the levels of CD4+  and CD4+/CD8+  (r<0, P<0.05). Conclusions: The abnormal lymphocyte count in the peripheral blood of the children with IM is positively correlated with the levels of CD3+  and CD8+, and negatively correlated with the levels of CD4+  and CD4+/CD8+ . Therefore, the peripheral blood atypical lymphocyte count and T cell subset index levels can be used as the specific indicators to detect the immune function in the children with IM.

【Key words】  Infectious mononucleosis; Peripheral blood; Atypical lymphocytes; T cell subset; Detection; Correlation

传染性单核细胞增多症(IM)属于单核 - 巨噬细胞系统急性增生性传染病，其发病往往与 EB 病毒感染密切相关 [1-2]。近年来 IM 的发病率呈逐年 攀升趋势，我国 3~5 岁儿童 EBV-VCA-IgM 阳性率 已突破 90%，是学龄前儿童最为常见的病原体 [3-4]。 已知 IM 可能会对机体免疫功能产生不利影响，并 形成恶性循环 [5] 。鉴于此，本文探讨外周血异型淋巴计数与 T 细胞亚群指标水平检测在 IM 患儿中的 应用价值。


1  资料与方法

1.1   一般资料   选取 2017 年 1 月至 2020 年 12 月 本院收治的 122 例 IM 患儿设为研究组。纳入标准： 符合《诸福棠实用儿科学(第 7 版)  》中 IM 相关 诊断标准 [6]； 年龄≤ 12 岁；入组前未接受相关治疗； 临床病历资料完整。排除标准：心、肝、肾等脏器 严重病变者；合并其他感染性疾病、全身免疫系统 疾病、恶性肿瘤者。另选取同期健康体检的 120 名儿童作为对照组。入组儿童家长对本研究内容了解 并自愿签署知情同意书，且本研究经本院伦理委员 会审核通过。研究组： 男 72 例， 女 50 例； 年龄 1~11 岁，  平均(5.21±1.32) 岁。对照组：  男 69 名，  女 51 名；  年 龄 1~12 岁，  平 均(5.24±1.31)  岁。  两 组一般资料比较，差异无统计学意义(P>0.05)， 有可比性。

1.2   方 法    (1) T 细 胞 亚 群 指 标 水 平 检 测。  所 有入组对象均实施常规检查，采集晨起空腹静脉 血 6 mL，3 mL 放置于 EDTA-K2 抗凝试管内，  余3 mL 放置于干燥试管内，于 24 h 内予以检测。抽 取 100 μL 的 10% EDTA-K2 血液标本，  滴加经异 硫氰酸荧光素标记的 CD3+ 、CD4+  以及 CD8+  鼠抗 人荧光单克隆抗体各 10 μL，避光孵育 20 min，之 后加入 1 mL 红细胞裂解液，于室温条件下静置10 min，  最后采用 JALIDUR 型流式细胞仪(购自 美国 BD 公司)测定 T 细胞亚群指标水平。(2)  外周血异型淋巴细胞计数检测。分别采集所有入 组对象 2 mL 静脉血，以淋巴细胞分离液提取淋巴 细胞悬液，每管滴加 50 μL 脱氧核糖核酸提取液 进行充分混匀，离心取上清液保存在 -20℃冰箱中 备用，取 5 μL 样品进行荧光聚合酶链反应，  94℃ 60 s，72℃ 60 s，退火 60 min，共 30 个循环。待反 应完成之后自动保存相关数据并读取。(3) IM 患 儿临床干预。给予更昔洛韦(长春海悦药业股份有 限 公 司，   国 药 准 字 H20057692，50 mg)5 mg/kg， 加入 100 mL 的 5% 葡萄糖注射液中静脉滴注， 1 次 /d；   同 时 取 100~300 万 IU 干 扰 素 肌 肉 注 射， 1 次 /d；给予维生素和能量支持。针对高热患儿予 以布洛芬混悬液退热；针对肝功能障碍患儿予以保 肝治疗。

1.3   观察指标   (1)比较两组T细胞亚群指标水平。  (2)  比较不同异型淋巴细胞计数患儿 T 细胞亚群 指标水平。(3)分析异型淋巴细胞计数与 T 细胞 亚群指标水平的相关性。

1.4   统计学方法   采用 SPSS 22.0 统计学软件处理 数据，计量资料以(  ±s )表示，采用 t 检验，计 数资料以率(%) 表示，  采用 χ2 检验，  以 Spearman 相关性分析异型淋巴细胞计数与 IM 患儿细胞免疫 功能指标水平的关系，以 P<0.05 为差异有统计学 意义。

2  结果

2.1   两组 T 细胞亚群指标水平比较   研究组 CD3+、 CD8+ 水平均高于对照组，  CD4+ 、CD4+/CD8+ 水平 均低于对照组，  差异有统计学意义(P<0.05)。见 表 1。

表 1  两组 T 细胞亚群指标水平比较( x— ±s )
组别                           CD3+  (%)                          CD4+  (%)                          CD8+  (%)                           CD4+/CD8+
研究组( n=122) 对照组( n=120) t 值 P 值	76.04±10.94 64.33±5.87 10.351 0.000	23.45±3.31 34.85±5.93 18.505 0.000	47.14±9.22 24.12±4.71 24.397 0.000	0.60±0.22 1.57±0.37 21.836 0.000

2.2   不同异型淋巴细胞计数患儿 T 细胞亚群指标 水平比较   异型淋巴细胞计数 >10% 患儿的 CD3+、 CD8+ 水平均高于异型淋巴细胞计数≤ 10% 患儿， 且 CD4+ 、CD4+/CD8+ 水平均低于异型淋巴细胞计 数≤ 10% 患儿，差异有统计学意义(P<0.05)。 见表 2。

表 2  不同异型淋巴细胞计数患儿 T 细胞亚群指标水平比较( x— ±s )
异型淋巴细胞计数                 CD3+  (%)                          CD4+  (%)                          CD8+  (%)                           CD4+/CD8+
>10%( n=80) ≤ 10%( n=42) t 值 P 值	79.15±11.26 70.20±7.85 4.594 0.000	20.53±8.95 24.78±7.26 2.652 0.005	54.71±12.39 45.79±10.30 3.995 0.000	0.44±0.16 0.91±0.30 11.305 0.000

2.3   异型淋巴细胞计数与 T 细胞亚群指标水平的 相关性分析   经 Spearman 相关性分析显示，异型 淋巴细胞计数与 CD3+、CD8+ 水平均呈正相关( r>0， P<0.05)，   与 CD4+ 、CD4+/CD8+ 水平均呈负相关  ( r<0，  P<0.05)。见表 3。

表 3  异型淋巴细胞计数与 T 细胞亚群指标水平的相关性分析
相关指标	r 值	异型淋巴细胞计数 P 值
CD3+ CD4+ CD8+ CD4+/CD8+	0.581 -0.506 0.523 -0.591	0.000 0.007 0.002 0.000

3  讨论

IM 多见于儿童及青少年人群，是由 EB 病毒感 染引起的一种急性增生性疾病，传播途径以飞沫传 播为主，亦可通过输血等途径传播。该病患儿的白 细胞计数基本无异常，或仅轻微增多，仅少数患儿可出现白细胞计数下降 [7-9] 。近年来，  IM 的发病率 受人类生活方式及生活环境等因素的影响逐年升高。 EB 病毒又称为人类疱疹病毒，仅在 B 淋巴细胞中 增殖，可促使其转化，并长期传导 [10-12] 。IM 患儿 体内 CD4+/CD8+ 比值明显降低，  随后感染淋巴细胞， 并引发全身性感染，最终导致患儿免疫调节功能 紊乱 [13]。


本研究结果显示，研究组 CD3+ 、CD8+ 水平均 高 于 对 照 组，CD4+ 、CD4+/CD8+ 水平均 低于对照 组。分析原因为 EB 病毒感染 B 淋巴细胞后会在 细胞内快速复制，并在 B 淋巴细胞溶解后进入血 液循环再次感染 B 淋巴细胞，待 B 淋巴细胞受累 后会刺激 NK 细胞及 T 细胞的合成并分泌大量的 活化因子，而 B 淋巴细胞会刺激 CD3+ 、CD8+ 细胞 结合并发生凋亡，进一步导致淋巴细胞增殖，伴 随着病情的不断发展，  B 淋巴细胞可通过与 CD8+  结合并凋亡，可见 CD3+ 、CD8+ 在 EB 病毒感染 的 B 淋巴细胞增殖过程发挥重要作用。与此同时， CD4+ 会刺激 T 细胞、B 淋巴细胞以及免疫细胞增 殖、分化，在 EB 病毒的控制过程中，  CD4+ 被大 量消耗，其在外周血中的水平也降低，对 IM 的 发生及发展起到促进作用 [14-15] 。本研究结果还显 示，异型淋巴细胞计数 >10% 患儿的 CD3+ 、CD8+  水平均高于异型淋巴细胞计数≤ 10% 患儿，  CD4+、 CD4+/CD8+ 水平均低于异型淋巴细胞计数≤ 10% 患儿。提示异型淋巴细胞计数 >10% 的 IM 患儿机 体免疫抑制增强，从而导致机体出现暂时性免疫缺陷。本研究 Spearman 相关性分析可见，异型淋 巴细胞计数与 IM 患儿 CD3+ 、CD8+ 水平均呈正相 关，  与 CD4+ 、CD4+/CD8+ 水平均呈负相关。提示 异型淋巴细胞计数在一定程度上可反映患儿免疫缺 陷程度。

综上所述， IM 患儿外周血异型淋巴细胞计数与 CD3+、CD8+ 水平均呈正相关，  与 CD4+、CD4+/CD8+ 水平均呈负相关，  外周血异型淋巴细胞计数与 T 细 胞亚群指标水平可作为检测 IM 患儿免疫功能的特 异性指标。

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