胃癌患者外周血中髓源性抑制细胞的表达与机体免疫功能关系的分析（附论文PDF版下载）

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摘要：目的 探讨胃癌患者外周血中髓源性抑制细胞（myeloid-derived suppressor cells，MDSCs）的数量变化并分析其与淋巴细胞亚群的关系，研究髓源性抑制细胞在胃癌患者病程中的免疫抑制作用。方法 选取 85 例胃癌患者和 50 例健康体检者 , 术前收集外周血 2ml；选择术后 30d，经门诊复诊，恢复顺利的患者 20 例与术前配对，以 CD11b+/CD33+/HLA-DR- 作为 MDSCs 的细胞表面标志物。用流式细胞术检测外周血中 MDSCs 所占的比例及淋巴细胞亚群，分析 MDSCs 的数量变化情况及与淋巴细胞亚群的相关性。结果 健康对照组外周血 MDSCs占（0.326±0.041）%。胃癌患者术前和术后复诊者外周血 MDSCs 所占比例分别为（1.824±0.275）%、（1.239±0.280）%。胃癌患者与对照组 MDSCs 比例差异有统计学意义（t=2.43,P<0.05）, 手术前后 MDSCs 差异有统计学意义（t=2.04,P<0.05）。胃癌患者术前外周血中 MDSCs 水平与 CD4+T 细胞含量呈负相关（r=-0.46，P<0.05）。与 CD8+T 细胞含量呈正相关（r=0.54，P<0.05）。结论 MDSCs 在胃癌患者免疫功能障碍中发挥重要作用，与淋巴细胞亚群比例发生变化有关系，对机体正常的细胞免疫功能具有免疫抑制作用；肿瘤负荷减轻后机体的免疫功能有一定程度的恢复。


关键词：胃癌；免疫抑制；髓源性抑制细胞；淋巴细胞亚群

本文引用格式：吴志丹，王珂，林江 , 等 . 胃癌患者外周血中髓源性抑制细胞的表达与机体免疫功能关系的分析 [J]. 世界最新医学信息文摘 ,2018,18(64):6-7.


ABSTRACT:
Objective To investigate the changes in the number of myeloid-derived suppressor cells (MDSCs) in peripheral blood of patients with gastric cancer and to analyze the relationship between the number of lymphocyte subsets and the lymphocyte subsets， to study the immunosuppressive effect of myeloid derived suppressor cells in the course of gastric cancer. Methods 85 patients with gastric cancer and 50 healthy persons were selected，the peripheral blood 2ml was collected before operation；After the operation, 30d was selected and the clinic was reviewed，20 patients with good recovery were paired with preoperative，CD11b+/CD33+/HLA-DR- was used as the cell surface marker of MDSCs.The proportion of MDSCs in peripheral blood and lymphocyte subsets were detected    by flow cytometry，the number of MDSCs and the correlation with lymphocyte subsets were analyzed.Results The peripheral blood MDSCs of healthy control group was (0.326 ± 0.041)%.The proportion of peripheral blood MDSCs in patients with gastric cancer before and after surgery was （1.824 ± 0.275）%, (1.239 ± 0.280)%.The difference of MDSCs between gastric cancer patients and control group was statistically significant (t=2.43, P<0.05)，the difference of MDSCs before and after operation was statistically significant (t=2.04, P<0.05).The level of MDSCs in peripheral blood of gastric cancer patients was negatively correlated with that of CD4+T cells (r=-0.46, P<0.05).It was positively correlated with CD8+T cell content (r=0.54, P<0.05). Conclusion MDSCs plays an important role in immune dysfunction of gastric cancer patients，it is related to the change of lymphocyte subpopulation ratio，it has an immunosuppressive effect on the normal cellular immune function of the body；After the tumor load was relieved, the immune function of the body recovered to some extent.

KEY WORDS: Gastric cancer; Immunosuppression; Myeloid-derived suppressor cells; Lymphocyte subsets

0引言

人体的免疫系统主要包括固有免疫和适应性免疫，其中包括固有免疫细胞、抗原递呈细胞和适应性免疫细胞等相互作用、相互调节 [1]。在细胞群体中具有独特性的一部分是来自于骨髓，在发挥调节机制作用的同时能够对免疫细胞产生抑制作用，导致机体的免疫功能水平低下，从而可诱发疾病，并促其发展或恶化。这群细胞属于被激活的髓系未成熟细胞（immature myeloid cells，IMCs）的一种异质性的群体，其在病理条件下表达但不能分化为成熟的细胞表面具有CD11b 和 Gr-1 标志 [2，3]。研究发现，肿瘤组织可以诱导产生MDSCs，后者对肿瘤细胞的增殖又有着促进作用，阻止了免疫系统对肿瘤细胞的攻击 [4]。本研究胃癌患者外周血中髓源性抑制细胞及淋巴细胞亚群数量变化，并对这种变化及临床病理因素间的关系进行探究分析。

1对象与方法

1.1对象

收集 2016 年 7 月至 2017 年 8 月于本院住院且具有完整病理资料的胃癌患者 85 例进行研究分析，其中男 47 例，
女 38 例，平均年龄（45±6.4）岁。其中的 48 例患者属于中、高分化腺癌，37 例患者属于低、未分化癌。纳入研究范围的所有患者均未进行术前的放化疗，均接受根治性切除手术。将以上 85 例患者作为研究组。另外，选取同期来院进行体检的 50 例健康人群作为对照组，男性 30 例，女性 20 例，平均年龄（41±3.2）岁。两组研究对象的性别、年龄构成间的差异不显著。

1.2材料和试剂
FACS Calibur 流式细胞仪为美国 BD 公司生产，鼠抗人CD11b-PE，CD33-APC，HLA-DR-PerCP-Cy 单克隆抗体，CD4/CD8 荧光标记单克隆抗体及红细胞裂解液为 D 公司原装配套试剂，PBS 缓冲液由江阴市人民医院中心实验室自行配制。

1.3实验方法

研究组（其中有 20 例术后 30d 经门诊检查已顺利恢复者与术前配对检测血样）和对照组均空腹采集外周血 2
ml,EDTA 抗凝，30min 内，于一支洁净的试管内加入鼠抗人 CD11b-PE，CD33-APC，HLA-DR-PerCP-Cy 三种单克隆抗体，50μl 全血样本，取另外两支洁净的试管，分别加入荧光标记的单克隆抗体 CD4-FITC/CD8-PE 各 10μl，样本 50μl，混匀，室温避光孵育 15 min；加入红细胞裂解液 800 µl，充分溶解红细胞 15min，离心（1 200 r/min，5 min），弃去上清液，PBS 缓冲液洗涤 2 次，最后用 PBS 缓冲液悬浮细胞，采用流式细胞术检测以 CD11b+/CD33+/HLA-DR- 为标志的 MDSCs 数量；并检测 CD4+ 及 CD8+ 的淋巴细胞百分比。

1.4统计学方法
产生的数据使用 SPSS 22.0 软件进行统计学分析，计量资料采用（ ±s）表示 , 组间比较采用均数 t 检验 , 采用
Sperman 相关分析 MDSCs 与 CD4+、CD8+ 淋巴细胞亚群的相关性，P<0.05 为差异有统计学意义。

2结果

2.1胃癌患者外周血中 MDSCs 的表达水平通过检测得出结果，研究组患者术前 MDSCs 的比例为（1.824±0.275）%，高于健康对照组的（0.326±0.041）%，差异有统计学意义（t=2.43,P<0.05）;20 例配对患者术后 30dMDSCs 比例为（1.239±0.280）%，与术前比较差异有统计学意义（t=2.04,P<0.05）。

2.2不同组别 T 淋巴细胞亚群分布
CD4+T 细胞亚群在胃癌术前患者中的表达低于健康对照组，而 CD8+T 细胞亚群高于健康对照组（P 均 <0.05），CD4+T细胞及 CD8+T 细胞在胃癌低、未分化组的表达与中、高分化组比较，差异具有统计学意义，见表 1。


2.3胃癌患者外周血 MDSCs 水平淋巴细胞亚群的相关性分析胃癌患者术前外周血中 MDSCs 水平与 CD4+T 细胞含量呈负相关，r=-0.46，P<0.05；与 CD8+T 细胞含量呈正相关，r=0.54，P<0.05。

3讨论

胃癌是消化系统最常见的肿瘤，属于全身性的疾病之一，肿瘤细胞在不断增殖或是转移，导致正常的机体免疫功能受到干扰，使机体的免疫细胞无法有效识别、杀灭肿瘤细胞 [5]。文献报道，与正常人进行比较，胃癌患者外周血 CD3+T 细胞、CD4+T 细胞、CD4+/CD8+T 细胞比值以及 NK 细胞表现出来的值更低，CD8+T 细胞值却显著更高，本研究也得出同样的结果。这就说明了胃癌患者的细胞免疫功能与正常人比起来是较低的。其病理机制可能是肿瘤组织衍生出多个细胞因素，从而产生大量的抑制性细胞，且种类较多，随着疾病的不断进展，大量的免疫抑制因子被分泌出来，抑制了机体正常的免疫功能 [6]。

MDSCs 不是一群单一的细胞，而是属于细胞群体，且具有异质性，细胞表面表达 CD11b+/CD33+/HLA-DR- 分子标志，免疫抑制功能十分强大，能引起肿瘤细胞免疫逃逸 [7，8]。研究显示，MDSCs 在大部分的肿瘤患者体内都存在，它的存在破坏了机体免疫系统的平衡性。

本研究显示，研究组患者术前的外周血中 MDSCs 的表达更高，究其原因可能是癌细胞将大量的细胞因子衍生出来， 导致 MDSCs 前体细胞从骨髓中大量溢入外周血，进行增殖与分化，使得正常的免疫功能遭到破坏，从而无法对肿瘤细胞进行有效的清除 [9]。与本研究结论 MDSCs 水平与 CD4+T 细胞含量呈负相关，与 CD8+T 细胞含量呈正相关相一致。国外有学者认为，通过 STAT3 信号途径，肿瘤源性因子能够促使 MDSCs 的募集、增殖。

胃癌患者术后 30d 外周血 MDSCs 水平与术前相比明显降低，提示肿瘤负荷减轻以后，刺激骨髓中 MDSCs 前体细胞进入外周血的诱因也随之减弱了，MDSCs 数量逐渐减低；但与健康对照组相比仍处于高水平，提示即使肿瘤被切除了，但是机体正常的免疫功能也无法恢复至正常人的水平 [10，11]。

综上所述，胃癌患者机体免疫功能失衡的发生中 MDSCs起着非常关键性的作用，肿瘤负荷在一定程度上得到减轻则使得免疫功能得以恢复 [12]。但是，目前尚无 MDSCs 在胃癌患者体内发挥免疫抑制功能的直接证据，需要做进一步的研究。


参考文献：

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[10]吴志丹，王胜军 . 髓源性抑制细胞在胃癌患者外周血中的变化及临床意义 [J]．江苏大学学报 ( 医学版 ),2013,23(5):414-416.
[11]夏瑞，汪峰，高腾飞，等 . 髓系来源抑制细胞在胃癌患者外周血和肿瘤组织中的数量及其临床意义 [J]．细胞与分子免疫学杂志 ,2014,30(7):740-743.
[12]贾新颜，杨文忠，苏洋，等 . 外周 T 细胞淋巴瘤患者 CD45RO ～ +T 以及 CD45RA ～ +T 在外周血中的分布特点分析 [J]．中国实验血液学杂志 ,2015,23(4):1017-1020.

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