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摘 要：目的 分析二代测序在急性髓系白血病中的应用价值。方法 本文所选 60 例初发急性髓系白血病患者均为我院 2017 年 12 月至 2018 年 5 月所收治，选择二代测序芯片对相关基因突变进行检测。结果 急性髓系白血病患者突变率最高的基因为 TET2，其次则为 CEBPA、DNMT3A、C-KIT、FLT3。除 CEBPA 和 TP53 基因外， 其他基因均存在特定突变位点。7 例急性髓系白血病患者进行复检，结果发现和初发时比较，缓解时CEBPA、C-KIT 和 FLT3基因突变均转阴，伴随的 TET2 基因突变率则无显著变化。结论 急性髓系白血病存在特定突变位点和突变基因，可以将 CEBPA 等基因突变当成监测急性髓系白血病中微小残留白血病的有效指标。
关键词： 二代测序；急性髓系白血病；基因突变
本文引用格式：赵芳. 二代测序在急性髓系白血病中的应用价值 [J]. 世界最新医学信息文摘 ,2018,18(75):141+144.
0引言
急性髓系白血病是一组具有较高异质性的血液肿瘤， 现阶段的治疗失败率较高， 所以对急性髓系白血病患者的分子遗传学信息进行了解， 结合患者的具体情况为其提供个体化的治疗就显得非常关键。分子遗传学研究结果显示，NPM1、CEBPA、FLT3 等与急性髓系白血病患者的预后有直接关系，采用基因突变的危险分层系统能更加准确地判断急性髓系白血病患者的预后，而对于同一危险层内的个体来讲，其生存差异较大，所以应对与急性髓系白血病患者预后相关的基因突变进行深入研究 [1]。本研究主要分析了二代测序在急性髓系白血病中的应用价值，具体情况如下。
1资料与方法
1.1一般资料。本文所选 60 例初发急性髓系白血病患者均为我院2017 年12 月至2018 年5 月所收治，其中男32例，女28 例； 患者年龄为 23-66 岁，平均（41.1±3.5）岁；28 例患者为 M2 型，3 例患者为 M4 型，6 例患者为 M5型，23 例患者未分型。全部患者均经融合基因、染色体、免疫表型、骨髓细胞学检测， 满足急性髓系白血病的相关诊断标准和分型标准。
1.2方法。抽取患者 2-4 mL 髂骨骨髓，进行 EDTA 抗凝， 选择人淋巴细胞分离液对骨髓单个核细胞进行收集， 选择生理盐水对单个核细胞进行洗涤，按照 DNA 提取试剂盒说明书来对 DNA 进行提取。选取 DNA1 μg，选择二代测序芯片突变检测基因，检测基因为 JAK2、ETV6、SETBPI、CBL、NRAS、ZRSR2、U2AF1、SRSF2、SF2B1、TP53、PHF6、ASXL1、AML1、EZH2、TET2、IDH2、IDH1、DNMT3A、CEBPA、C-KIT、NPM1、FLT2。
1.3统计学分析。选择 SPSS 软件来分析和统计本实验相关数据，计数资料选择卡方检验，以P < 0.05 为差异有统计学意义。
2结果
基因突变及其特点分析。全部 60 例急性髓系白血病患者中，有 50 例患者检测到至少 1 个突变基因。阳性率最高的基因为TET2，其次则分别为CEBPA、NRAS、FLT3-ITD、C-KIT、 DNMT3A，ASXL1、CBL、TP53、SRSF2 的 阳 性 率 较 低， NPM1、IDH2、IDH1 基因均存在 1 例突变阳性，其他基因没有出现阳性患者；具体情况如表 1。
在具有较高突变率的基因中，除 CEBPA、TP53 不存在特点突变位点外，其他基因均存在特定突变点位，TET2 的特定突变位点主要为 V218M、I1762V、P29R；DNMT3A 的特点突变点位主要为 F868V。
2.2微小残留白血病监测和复发预测。7 例急性髓系白血病患者进行复检，结果发现和初发时比较，缓解时CEBPA、C-KIT 和 FLT3 基因突变均转阴，伴随的 TET2 基因突变率则无显著变化。
3讨论
二代测序也被称之为深度测序或者高通量测序，1 次能分析和测定几十万到几百万条 DNA 片段，其特点主要为高通量性，同时敏感性也更理想，能相对定量 [2]。二代测序在临床中的应用，能让科研快速转化为临床，特别是特定目的基因外显子测序，对于检测急性髓系白血病相关基因突变非常重要。急性髓系白血病的发生为多基因、多步骤的参与过程，应同时检测与急性髓系白血病发生、发展相关的多个基因突变，部分基因需检测多个片段，同时部分突变位点的突变率不高，采用一代测序无法有效完成。有临床研究发现，和一代测序相比较， 二代测序能有效提高基因的阳性率；二代测序具有更高的敏感性，能对 0.1% 的突变进行检测，而且二代测序具有更加广泛的覆盖区域，能对更多的突变位点进行检测。
急性髓系白血病作为血液系统恶性肿瘤，是一种异质性较高的多基因疾病，克隆演变为多基因突变、顺序性的积累过程，就算患者的细胞核型无异常，但是因为患者的突变基因存在差异，所以其预后也存在差异。所以在评估急性髓系白血病患者的预后时，还应分析多基因突变结果，二代测序因为具有高敏感性和高通量特点，所以能更加准确的进行预后分层， 而且能对基因突变类型进行更加准确地了解。在急性髓系白血病的发生、发展过程中，虽然所参与的基因较多，但是不同疾病的各基因突变率却存在差异。本研究中，全部 60 例急性髓系白血病患者中，有 50 例患者检测到至少 1 个突变基因。阳性率最高的基因为 TET2，其次则分别为 CEBPA、NRAS、FLT3-ITD、C-KIT、DNMT3A，ASXL1、CBL、TP53、SRSF2 的阳性率较低，NPM1、IDH2、IDH1 基因均存在 1例突变阳性，其他基因没有出现阳性患者。
现阶段临床在对急性髓系白血病患者的临床治疗效果进行评估时，诱导化疗后骨髓相中幼稚细胞百分率是非常重要的一项指标，然而从形态学上无法对原始细胞增加数进行准确统计，骨髓细胞还可能发生生理性增加。所以在对疾病负荷进行检测时，荧光定量 PCR 和流式细胞术的应用越来越广泛，但是对于急性髓系白血病患者来讲，荧光定量 PCR 检测主要依靠 RNA 水平定量，同时局限于存在特定基因重排的急性髓系白血病患者。采用二代测序能定量检测基因突变，在对肿瘤负荷进行监测时，二代测序具有较高的灵敏度和特异性。所以对于无特定融合基因的急性髓系白血病患者来讲， 可以选择基因突变率来监测微小残留病。本研究中，7 例急性髓系白血病患者进行复检，结果发现和初发时比较，缓解时 CEBPA、C-KIT 和 FLT3 基因突变均转阴；结果显示这些基因与急性髓系白血病的进展密切相关，可以将其突变率当成微小残留白血病的指标，进而来对临床疗效和患者预后进行评估。另外伴随的 TET2 基因突变率则无显著变化，结果选择 TET2 可用于评估患者预后，不合适将其当成监测微小残留白血病的指标。
总之，选择二代测序监测急性髓系白血病患者的异常基因突变，不但能为临床诊断提供科学依据，同时还能对危险度进行分层，进而来对预后进行评估。急性髓系白血病中的基因突变率还能对治疗效果进行评估，进而来对治疗方案进行调整。
参考文献：
[1]黄赛 , 冯聪, 李艳等.t(8;21) 白血病的发病机制及二代测序技术在白血病中的应用进展 [J]. 解放军医学杂志,2017,42(05):472-476.
[2]马亮 , 姜永玮, 王少婷, 等. 高通量测序在 FLT3-ITD 阳性急性髓细胞白血病患者中的应用[J].中国实验血液学杂志,2016,24(02):381-387.
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