不同宫颈病变中HR-HPV及常见病原体感染状况分析论文

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摘要：目的分析不同宫颈病变中高危型人乳头瘤状病毒(HR-HPV)及常见病原体的感染特点，为预防和治疗宫颈病变提供参考依据。方法对2016年9月至2019年3月期间在唐山弘慈医院妇科门诊及住院的492例患者的宫颈细胞标本进行了高危型人乳头瘤病毒分型核酸测定，细菌性、滴虫性、假丝酵母菌性阴道病筛查及液基细胞学(TCT)检测，分析不同宫颈病变中HR-HPV及三种常见病原体的感染状况。结果492例标本中，289例HR-HPV阳性，总感染率为58.74%(289/492)，15种高危型别全部检出，HPV52、16、58位居前三。其中按照美国提出的描述性诊断标准TBS分类：60例为慢性宫颈炎，59例为非典型鳞状上皮、92例为低度鳞状上皮内病变、78例为高度鳞状上皮病变，并且随着宫颈病变严重程度的增加，HR-HPV的感染率增加，除了人乳头瘤状病毒是宫颈感染最常见的病原体之一，霉菌及细菌感染率保持较高水平，而滴虫感染率明显下降，少见不同病原体混合感染。结论HR-HPV的感染是宫颈病变的主要影响因素，通过对女性HR-HPV及常见病原体感染状况的早期筛查，可以及早避免宫颈病变的严重发展。

关键词：人乳头瘤状病毒；宫颈病变；感染

本文引用格式：杨素贤，李淑英.不同宫颈病变中HR-HPV及常见病原体感染状况分析[J].世界最新医学信息文摘,2019,19(93):12-14,16.

Analysis of Infection Status of High-risk Human Papillomavirus and Common Pathogens in Different Cervical Lesions

YANG Su-xian,LI Shu-ying*

(North China University of Science and Technology Hebei Key Laboratory for Chronic Diseases,Tangshan Key Laboratory for Preclinical and Basic Research on Chronic Diseases,Tangshan Hebei)

ABSTRACT:Objective To analyze the infection characteristics of high-risk human papillomavirus(HR-HPV)and common pathogens in different cervical lesions,so as to provide reference for prevention and treatment of cervical lesions.Methods The cervical samples of 492 women who visited Tangshan HongCi Hospital from September 2016 to March 2019 were randomly selected for the HR-HPV genotyping,bacterial,trichomonad and candida vaginal disease screening and Thinprep cytologic test(TCT),analysis of infection status of HR-HPV and the three kinds of common pathogens in different cervical lesions.Results In the 492 samples,289 samples were positive and the total infection rate was 58.74%(289/492).The 15 high-risk types were detected and the most common models were HPV52,16 and 58.According TBS standard to diagnose and type:60 cases were chronic cervicitis,59 cases were atypical squamous epithelium,92 cases were low-grade squamous intraepithelial lesions,78 cases were high-grade squamous intraepithelial lesions,and with the increase of cervical lesion severity,HR-HPV infection rate increased,in addition to the human papillomavirus is one of the most common pathogens of yeast infection,mold and bacteria infection rates remain high level,and trichomonas infection rate decreased obviously,different pathogens mixed infection is rare.Conclusion The infection of HR-HPV is the main influencing factor of cervical lesions.Through early screening of female HR-HPV and common pathogens,the serious development of cervical lesions can be avoided as soon as possible.

KEY WORDS:Human papillomavirus;Cervical lesions;Infection

0引言

高危型人乳头瘤状病毒（HR-HPV）的感染是宫颈上皮发生癌变的直接病因[1]，不同型别的HPV致病力不同且有明显的地域、年龄差异[2]。有文献认为[3-4]，HR-HPV的持续感染成为宫颈癌发生的最危险因素，常见病原体在宫颈癌发生过程中起协同作用。为分析HR-HPV及常见病原体的感染在宫颈病变中的意义，本文对492例患者的宫颈细胞标本进行了HR-HPV分型核酸测定，细菌性、滴虫性、假丝酵母菌性阴道病筛查及液基细胞学(TCT)检测。

1资料与方法

1.1一般资料

收集2016年9月至2019年3月，到唐山弘慈医院就诊患者的标本492例，年龄22-68岁(平均42.3岁)。所有患者均为已婚，近3天未曾进行性生活，近1周未曾使用治疗阴道感染疾病的药物，属于非月经期和妊娠期且未合并严重外科及内科疾病的患者。

1.2方法

1.2.1标本采集

先以扩阴器暴露宫颈，用棉拭子擦去宫颈口过多的分泌物。采用无菌阴试子于阴道后穹窿处取出分泌物，一部分涂抹于干燥的载玻片上，用于霉菌性阴道炎(FV)检测；一部分置于滴有生理盐水的载玻片上，用于滴虫性阴道炎(TV)的筛查，一部分用于细菌性阴道病(BV)检测；采用试剂盒中配套的宫颈脱落细胞采集器中的宫颈刷在患者的宫颈口按顺时针方向旋转3-5圈取出，然后将宫颈刷头部放入装有保存液的洗脱管中，一部分标本用于高危型HPV15分型检测，一部分标本用于液基脱落细胞学诊断。

1.2.2阴道分泌物检查

FV的检测，采用革兰氏染色液试(快速法)剂盒（珠海贝索生物技术有限公司）进行染色，油镜下找寻真菌孢子或菌丝；TV的检测，直接用盐水法在高倍镜下找寻滴虫虫体；BV的检测，采用细菌性阴道病联合测定试剂盒（福建泰普生物科学有限公司）中唾液酸酶法与革兰氏染色后镜检线索细胞联合诊断。

1.2.3高危型人乳头瘤病毒分型核酸测定

采用SLAN-96P实时荧光PCR扩增仪（上海宏石医疗科技有限公司）对所提取的样本进行15种HPV高危分型检测（16型、18型、31型、33型、35型、39型、45型、51型、52型、56型、58型、59型、68型、66型、82型）。①样本DNA提取：用HR-HPV分型核酸测定试剂盒中自带的核酸提取液，采取加热快速提取法抽提脱落细胞的基因组DNA。②PCR扩增：PCR反应体系（40l）：在薄壁PCR反应管中放入HPV核酸荧光PCR检测混合液（试剂盒中自带）与Taq酶配制好的混合液36l，处理好的标本DNA 4l，盖好管盖，将反应管置于实时荧光PCR仪上进行反应，程序为：94℃×2 min；再按93℃×10sec到62℃×31sec，循环40次；单点荧光检测在62℃，4℃保存。以自带阳性对照品和双蒸水为阴阳对照，在SLAN全自动医用PCR分析系统，按照试剂盒使用说明书的结果判读方法对结果进行分析。

1.2.4宫颈液基细胞学检测

采用XCL-200膜式离心制片机（湖北欣立达科技责任有限公司）自动制片，结合巴氏染色的特点根据美国提出的描述性诊断标准TBS对每一个样本进行诊断。

1.2.5统计方法

采用SPSS 17.0软件进行统计学分析，采用双侧卡方检验，检验水平α=0.05。

1.3结果

1.3.1HPV基因型别分布特征及感染率

492例标本中，HPV感染阳性289例，总感染率为58.74%（289/492）。15种高危型别全部检出，其型别分布特征及感染状况如下（见图1），HPV感染率最高的是HPV52，占HPV感染病例的29.76%（86/289），其次为HPV16（22.15%），HPV58（21.45%），HPV56（20.42%），HPV51（13.84%），HPV31（7.96%），HPV18（7.61%），HPV33（5.54%），HPV39（5.19%），HPV68（4.15%），HPV66（2.42%），HPV35（2.08%），HPV59（1.73%），HPV82（1.38%），HPV45（1.04%）。

1.3.2不同宫颈病变中高危型HPV感染阳性率比较

492例标本中有289例HPV感染，其脱落细胞学检查结果60例慢性宫颈炎(图2A)，59例非典型鳞状上皮(ASC-US,图2B)、92例低度鳞状上皮内病变(LSIL,图2C)、78例高度鳞状上皮内病变(HSIL,图2D)。不同宫颈病变中HR-HPV感染阳性率比较(表1)。



1.3.3各年龄组HPV感染分布

将HPV感染阳性的患者按年龄进行分组，并进行行×列表的卡方检验，结果表明，≤30岁年龄组HPV感染率最高(28.37%),    与各年龄组比较感染率差异均有统计学意义(P<0.05)，其感染率有显著的年龄差异(表2)。  


1.3.4不同宫颈病变中HR-HPV及常见病原体的感染情况

492例样本中检测到289例感染HPV，84例感染以加德纳菌等厌氧菌(BV,图3A)，91例感染以假丝酵母菌等霉菌(FV,图3B)，28例感染阴道毛滴虫(TV,图3C)(表3)。



1.4讨论

宫颈癌是威胁女性生命健康的常见恶性肿瘤之一，其发病率也不断上升[5]。宫颈癌早期治疗的5年生存率为100%，晚期治疗的5年生存率仅为20%~50%[6]，因此，防治宫颈癌，早发现、早诊断、早治疗是关键。有研究表示，HR-HPV的持续或反复性感染是宫颈癌前病变及宫颈癌进展的危险因素[7]。亚洲女性的主要感染型别除HPV16、18外，HPV58、52、33、31、45也比较常见，而我国女性的感染型别以HPV52、58检出率最高[8]。

本次研究中表明在HR-HPV型别中HPV52、16、58的感染率位居前三，这也正符合亚洲地域和我国的分布特点，而在亚洲范围及我国感染率不高的HPV56，在本次研究中也较为突出，这需要我们不停地关注本地区HPV型别的感染分布情况，为宫颈疾病的预防早做准备。

从表1可以看出，不同宫颈病变感染的HPV阳性率不同，同时和宫颈病变的严重程度有密切关系，宫颈病变越严重，HPV感染的阳性率越高。宫颈炎的发病率在临床上很高，虽然绝大部分宮颈炎病变不会发展为宫颈癌，但是宫颈炎的发生往往也与HR-HPV感染的情况有着很大的关系[9]，加强对HPV感染人群的早期筛查、长期监测、定期随访、按时复查具有很重要的意义。

另外，根据年龄分组显示，HPV感染主要分布在≤30岁、31-40岁这两个年龄组中，可能与性活跃年龄周期、纳入研究的人数较多等有关。其HPV的感染风险也呈现出一种年龄年轻化的趋势[10]。

从表3的结果中体现出，HPV-DNA阳性者，从慢性宫颈炎→ASC-US→LSIL→HSIL，随着细胞学改变的严重程度而显著增加。这预示着HR-HPV感染的情况与宫颈病变程度有着很大的关系。还可以看出在不同的宫颈病变中，常见的三种病原体，如以加德纳球杆菌为主的厌氧菌、以假丝酵母菌为首的霉菌和阴道毛滴虫，它们的感染率及感染分布也不同。当前宫颈感染的流行病学特点中，除了HPV是宫颈感染最常见的病原体之一，霉菌及细菌感染率也保持较高水平[11]。以加德纳球杆菌为主的厌氧菌代谢所产生的亚硝基胺具有致癌作用，因此以加德纳球杆菌为主的厌氧菌感染阳性者，也会增加宫颈癌变的风险[12-13]。以假丝酵母菌为首的霉菌和阴道毛滴虫主要引起细胞反应性改变，而在低度及高度鳞状上皮内病变中检出率很低[14]。而随着人们生活水平的提高及卫生条件的明显改变，滴虫感染率明显下降，少见不同病原体混合感染。

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