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摘要：目的观察并分析在结直肠癌组织中NQO1蛋白的表达和意义。方法选取本院2012年1月至2016年1月收治的结直肠癌患者100例，对NQO1在结直肠癌组织中的表达进行观察。结果siRNAi组与正常组在24 h、48 h、72 h时相比细胞活性显著降低（P<0.05）。结直肠癌组NQO1 mRNA和蛋白的表达量较非肿瘤组织相比明显升高（P<0.05）。结直肠癌患者临近非肿瘤组织NQO1阳性率显著低于肿瘤组织（P<0.05）。NQO1表达与肿瘤直径、淋巴结肿瘤转移分期（TNM）、结直肠癌患者肿瘤转移关系密切（P<0.05）。结论NQO1蛋白在结直肠癌组织中表达上升，同时其与肿瘤恶性状态关系密切，在癌细胞转移和侵袭中均有参与，将其作为预后标志物在结直肠癌患者中。
关键词：NQO1；结直肠癌组织；表达；意义
本文引用格式：李晓燕,张启芳,张海莲,等.NQO1蛋白在结直肠癌组织中的表达及意义[J].世界最新医学信息文摘,2019,19(95):209-210.
0引言
NQO1蛋白存在于结直肠、肺、胃等组织中，诱导防御因子抵御各种损伤[1]。有关报道指出[2]，NQO1在恶性肿瘤中出现表达上调情况，且与转移、侵入、疾病发展关系密切。本次研究观察和分析在结直肠癌组织中NQO1蛋白的表达和意义，取得不错成果，具体如下。
1资料和方法
1.1临床资料。以2012年1月至2016年1月收治的100例结直肠癌患者为研究对象，男性50例，女性50例，最小年龄27岁，最大年龄85岁，平均（59.9±8.9）岁，肿瘤直径为1.8-16.0 cm，平均（6.7±1.8）cm；其中右半结肠癌、直肠癌、左半结肠癌分别为30例、35例、35例。
1.2方法。NQO1 mRNA表达情况采取实时定量PCR进行检测，NQO1蛋白表达情况采取Western blotting和免疫组化方法进行检测，采取siRNA技术来干扰结直肠癌细胞系思维8NQO1表达。所需设备：上海普迪生物技术有限公司生产的ABI 7300荧光定量PCR仪；郑州南北仪器有限公司生产的EL204梅特勒电子天平；NQO1和GAPDH一抗来自Cell Signaling Technology公司；尔康来自碧天公司；选用南京建成生物工程研究所制定的免疫组化检测试剂。
1.3细胞和siRNA试验。从美国模式培养物保藏所选购人结直肠癌细胞SW480，正常培养，将HepG2，2×105cell在干扰前孔铺6孔板，改良培养基使用无血清，干扰时间为细胞汇集度为40%。S干扰W480细胞中NQO1表达使用siRNA技术，在siRNA duplex-Lipofecta mineTM RNAi MAX按照Lipofecta mineTM商品说明书加入培养基内。经过4h孵育后，更换为10%FBS培养基。测定细胞活力在干扰后，选购上海基因治疗有效公司的siRNA细胞和正常组Contactin1靶标。
1.4定量PCR检测。提取组织总RNA用Trizol法，测定RNA纯度和浓度采取紫外分光光度计，后取2μg进行逆转录，生成cDNA。采取SYBRgreen染料法进行定量检测。
1.5Western biot检测。提取总蛋白，二奎琳甲酸测定蛋白质含量后进行凝胶电泳，样本为20μg，电转至聚偏氟乙烯薄膜后，封闭2 h使用3%的脱脂奶，孵育抗人NQO1和GAPDH一抗，4℃孵育过夜，TBST洗膜，孵育二抗后显影。对条带亮度分析。
1.6免疫组化。对5μm石蜡切片染色，在10 mmol/L柠檬盐缓冲液（pH6.0）的热激30 min介导抗原复性，采取抗NQO1单克隆抗体孵育，4℃过夜，洗涤后孵育二抗，曝光使用显色液。
1.7统计学处理。数据应用SPSS 18.0进行分析，其中计数进行χ2（%）检验，计量进行t检测（±s）检验，P<0.05提示有显著差异。
2结果
2.1细胞活力。两组在8 h细胞活力对比无统计学意义（P<0.05），两组在24 h、48 h、72 h时细胞活力对比有统计学意义（P<0.05），见表1。
2.2新鲜样本NQO1mRNA、NQO1蛋白。结直肠癌组与非肿瘤组织相比NQO1mRNA、NQO1蛋白的表达量对比有统计学意义（P<0.05），见表2。
2.3NQO1表达与结直肠癌患者临床病理学特征关系。结直肠癌患者样本为肿瘤组织NQO1阳性率为58.00%（58/100）明显高于临近肿瘤组织NQO1阳性率16.00%（16/100）（P<0.05），见表3。
3讨论
结直肠癌是临床常见恶性疾病，具有较高的发病率。一般情况下，通过外科手术就可治疗，但是当癌细胞出现转移时，手术治疗不可根治，且效果降低[3]。为尽早对疾病作出评估，找到结直肠癌预后生物标志物非常重要，既可提高治疗效果，也可改善生活质量[4]。
NQO1蛋白在很多癌症中出现高表达的情况，如肺癌、乳腺癌、甲状腺癌等，有关研究认为[5]NQO1可作为标志物在肿瘤的检测中。本次研究结果显示，siRNAi组与正常组在24 h、48 h、72 h时相比细胞活性显著降低，说明NQO1会改变结直肠癌细胞的生长和增殖能力改变。结直肠癌组NQO1 mRNA和蛋白的表达量较非肿瘤组织相比明显升高，结直肠癌患者临近非肿瘤组织NQO1阳性率显著低于肿瘤组织。NQO1表达与肿瘤直径、TNM、结直肠癌患者肿瘤转移关系密切。从而说明NQO1可作为结直肠癌患者生物学标志物。
参考文献
[1]马跃,林黎娟,朴俊杰,等.结直肠癌中NQO1蛋白表达的临床病理及预后意义[J].临床与实验病理学杂志,2014(4):366-370.
[2]周娇娇.表观遗传学对调控转移的相关性研究——miR-320a/b及ALDH1a3和NQO1甲基化对转移调控作用研究[D].浙江大学,2015.
[3]谢慧君,袁明明,王伟伟,等.结直肠癌患者NQO1蛋白检测的临床意义及疾病预后价值分析[J].医学理论与实践,2017,30(17):2513-2516.
[4]孙立园,赵杨,刘莎莎,等.结直肠癌组织中IGFBP-3、u-PA蛋白的表达变化及其意义[J].山东医药,2018,58(23):51-53.
[5]马肖,袁伟,唐万燕,等.miR-29b在结直肠癌组织中的表达及其临床意义[J].中华肿瘤杂志,2016,38(6):430-433.
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