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摘要：目的探讨儿童患者咽拭子肺炎支原体(MP)-DNA对肺炎支原体肺炎(MPP)的早期诊断价值。方法采用实时荧光定量PCR对2016年3月至2018年2月期间就诊于南京医科大学第二附属医院1031例门诊患儿咽拭子标本进行MP-DNA的定量检测。结果1031例门诊患儿MP-DNA总阳性率33.37%(344/1031);男女患儿MP-DNA阳性率的差异无统计学意义(£=0.467,P>0.05);学龄组患儿阳性率最高42.19%(27/64),婴儿组阳性率27.91%(55/197)最低，幼儿组阳性率33.53%(115/343)、学龄前组阳性率34.43%(147/427);冬季患儿阳性率最高41.18%(168/408)、春季阳性率21.16%(40/189)最低，夏季阳性率27.02%(40/148)、秋季阳性率33.57%(96/286)。结论南京地区MP-DNA阳性率逐年上升、且随着年龄上升阳性率逐渐增高、冬季患儿阳性率最高，实时荧光定量MP-DNA具有快速、简便、敏感性高、特异性强的特点，是目前临床上早期诊断肺炎支原体感染的有效方法。
关键词：肺炎支原体；聚合酶链反应；儿童
本文引用格式：王丽丹.儿童患者咽拭子肺炎支原体-DNA对肺炎支原体肺炎的诊断价值[J].世界最新医学信息文摘,2019,19(35):213-214.
Diagnostic Value of Mycoplasma Pneumoniae-DNA in Children with Pneumonia Mycoplasma Pneumonia
WANG Li-dan
(Department of Clinical Laboratory,Jingjiang People's Hospital,Jingjiang Jiangsu)
ABSTRACT:Objective To investigate the early diagnostic value of Mycoplasma pneumoniae(MP)-DNA in children with pneumonia mycoplasma pneumonia(MPP).Methods Real-time quantitative PCR was used to detect the MP-DNA of 1031 outpatient throat swabs from the Second Affiliated Hospital of Nanjing Medical University from March 2016 to February 2018.Results The total positive rate of MP-DNA in 1031 outpatients was 33.37%(344/1031).There was no significant difference in the positive rate of MP-DNA between male and female children(f=0.467,尸>0.05).The positive rate of children in school age group The highest rate was 42.19%(27/64),the positive rate of infant group was 27.91%(55/197),the positive rate of children group was 33.53%(115/343),the positive rate of preschool group was 34.43%(147/427);children in winter The positive rate was 41.18%(168/408),the spring positive rate was 21.16%(40/189),the summer positive rate was 27.02%(40/148),and the autumn positive rate was 33.57%(96/286).Conclusion The positive rate of MP-DNA in Nanjing is increasing year by year,and the positive rate increases with age,and the positive rate of children in winter is the highest.Real-time quantitative MP-DNA has the characteristics of fast,simple,high sensitivity and specificity.Tt is an effective method for early diagnosis of Mycoplasma pneumoniae infection in the clinic.
KEY WORDS：Mycoplasma pneumoniae;Polymerase chain reaction;Children
0引言
肺炎支原体（mycoplasma pneumoniae,MP）是引起呼吸道感染的重要病原体，尤其是对儿童和青少年的危害⑴。肺炎支原体感染除了有典型的呼吸道症状外，还会引起其他病变，如脑炎、心肌炎、肾炎等危急生命|2]o近年来，MP阳性率呈上升趋势⑶，如果能够早期、准确检测病原对临床诊断、治疗具有重要意义。回顾总结近2年的检测资料，按照不同性别、年龄、季节对1031例门诊患儿MP-DNA检测结果进行分析,现报道如下。
1资料与方法
1.1资料收集
选择20奋年3月至2018年2月期间就诊于南京医科大学第二附属医院具有呼吸道症状的1031例门诊患儿为研究对象，男性563例,女性468例,平均年龄3.58岁；按季节分为4个季度：2016年3月〜2016年5月、2017年3月〜2017年5月为春季；2016年6月〜2016年8月.2017年月6〜2017年8月为夏季;2016年9月-2016年11月、2017年9月〜2017年11月为秋辛;2016年12月-2017年2月、2017年12月〜2018年2月为冬季;按年龄分为4组:v 1岁为婴儿组（197例），1〜3岁为幼儿组343例，3〜7岁为学龄前组（427例）,>7岁为学龄组（64例）。标本类型全部为咽拭子标本。1.2仪器与试剂仪器：7300荧光定量PCR仪（美国ABI公司）；试剂：杭州艾康生物技术有限公司提供。
1.3方法
按照仪器和试剂说明书进行操作：咽拭子样本中加入4倍体积的生理盐水，反复吹打,4。。冰箱过夜，吸取lmL咽拭子稀释液,振荡混匀,12000r/min离心5min,弃上清，加入50卩1核酸提取液，振荡混匀15秒,100°C加10min,12000r/min离心lOmin,取4卩1进行PCR反应测定。按试剂盒标准程序进行扩增。预变性:95°C 3minl个循环;变性：94°C/15s/40个循环;退火、延伸及检测荧光：60°C/30s/40个循环。
1.4结果判读
若Ct值无数值，实验结果为阴性；如Ct<38并曲线为标准S形曲线，则实验结果为阳性。
1.5统计学处理
数据采用SPSS 22.0软件统计分析。以P<0.05作为差异显著性标准。
2结果
2.1 MP-DNA阳性与性别的关系
1031例呼吸道症状患儿，MP-DNA阳性344例，总阳性率33.37%。男性563例，阳性193例，阳性率34.28%；女性468例，阳性151例，阳性率32.26%。两者差异无统计学意义（疽=0.467,P>0.05）（如下表1）。
2.2 MP-DNA阳性与年龄组的关系
1031例呼吸道症状患儿，学龄组患儿阳性率最高42.19%（27/64）,婴儿组阳性率28.93%（57/197）、幼儿组阳性率33.53%（115/343）、学龄前组阳性率34.43%（147/427）。学龄组与婴儿组差异有统计学意（f=4.564,P<0.05）o幼儿组与学龄前组差异无统计学意义（x2=0.068,P>0.05）（如下表2）。
2.3 MP-DNA阳性与季节的关系
冬季患儿阳性率最高41.18%(168/408)、春季阳性率21.16%(40/189)、夏季阳性率27.02%(40/148 k秋季阳性率33.57%(96/286)o冬季与春季差异有极其显著统计学意义(X2=22.787,P<0.001)o且2016至2017年度与2017至2018年度有极其显著统计学意义(疽=14.468,P<0.001)(如下表3)。
3讨论
肺炎支原体(MP)是人类原发性非典型肺炎的主要病原体之一,无细胞壁，能通过除菌滤器,最小原核型微生物。流行病学显示，MP主要通过飞沫传播，主要表现为间质性肺炎、急性细支气管炎、肺炎支原体肺炎等呼吸系统疾病囲。近年来，MP引起的儿童肺炎支原体感染逐年升高，且临床症状不典型，且影像学表现不特异,为诊断带来了难度。易导致误诊漏诊，因此，早期诊断并及时治疗非常重要。目前诊断MP感染主要依赖实验室检查，主要有液体培养、特异性抗体检测及PCR等方法。支原体液体培养易受真菌影响，存在较高的假阳性，不利于疾病的诊断与治疗|5]o支原体特异性抗体在病程周期上存在一定的局限性向。目前，PCR技术应用于病原体检测上有准确性高、重复性好等优点17]o MP感染率呈上升趋势，对具有呼吸道感染的儿童进行MP-DNA检测，有利于早诊断，早治疗。
本研究对1031例患儿咽拭子采用实时荧光定量PCR技术检测MP-DNA结果显示：(1)男女患儿阳性率的差异无统计学意义(疽=0.467,P>0.05),与刘志、刘义庆等冏报道一致，但与崔娟、王佳等⑼报道不一致。考虑可能与研究方法不同及人群、地区差异有关。(2)学龄组患儿阳性率最高42.19%(27/64),婴儿组阳性率最低27.91%(55/197)。考虑到原因是学龄组患儿活动范围大、群居时间长、免疫力低下，导致感染机会增多；婴儿组患儿活动范围小、外界接触少，感染机会少，且来自母体抗体尚未完全消失。本研究中幼儿组与学龄前组差异无统计学意义(疽=0.068,P>0.05)o可能因为幼儿组与学龄前组年龄相差不大，而且都可自由活动，与外界接触机会相等。(3)冬季患儿阳性率最高41.18%(168/408),其次是秋季阳性率33.57%(96/286)o本研究与李锐成、阎林等四报道西安地区不一致。可能与气候、环境、温差等不同有关。南京地区春季多雨、夏季炎热、秋季凉爽、冬季寒冷。MP耐冷，不耐干燥，对热抵抗力弱。MP主要通过飞沫传播且常在人员密集活动的人群容易被感染,冬天天气寒冷，室内通风少，利于MP的传播。
综上所述，应用PCR检测MP-DAN在疾病早期具有敏感性高、特异性强、临床符合率高等优点，提高MPP(肺炎支原体肺炎)诊断率，使患儿及时得到治疗，缩短了病程，减轻了患儿痛苦。我们应该持科学的态度，综合患儿临床表现、影像学资料，以及其他实验室数据，得出正确的诊断，使患儿的及时得到治疗。探索更好诊断MPP的检测方法,仍需要进一步研究。
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