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【摘要】目的：比较化学发光免疫分析（CLIA）法与酶联免疫吸附（ELISA）法在乙型病毒性肝炎（乙肝）诊断中的效能。方法：选取2020年5月至2022年5月该院收治的154例疑似乙肝患者为研究对象，均行CLIA法、ELISA法检测乙肝血清标志物[乙型肝炎表面抗原（HBsAg）、乙型肝炎表面抗体（HBsAb）、乙型肝炎e抗原（HBeAg）、乙型肝炎e抗体（HBeAb）、乙型肝炎核心抗体（HBcAb）]水平，以荧光定量聚合酶链反应（PCR）法检测结果为金标准，比较CLIA法与ELISA法在乙肝中的诊断效能及对低水平HBsAg的检出率。结果：154例疑似乙肝患者中，荧光定量PCR法诊断阳性92例，阴性62例；HBsAg水平0.06~0.10 U/mL 5例，0.11~0.50 U/mL 5例，0.51~2.50 U/mL 8例，2.51~3.00 U/mL 2例。CLIA法诊断阳性89例，阴性65例；ELISA法诊断阳性78例，阴性76例。CLIA法诊断乙肝的灵敏度、准确度、阴性预测值均高于ELISA法，漏诊率低于ELISA法，差异有统计学意义（<0.05）。CLIA法对HBsAg水平0.06~0.10 U/mL的检出率高于ELISA法，差异有统计学意义（<0.05）。结论：CLIA法在乙肝中的诊断效能高于ELISA法。
【关键词】化学发光免疫分析法,酶联免疫吸附法,乙型病毒性肝炎,血清学标志物,效能
【Abstract】Objective:To compare efficiencies of chemiluminescence immunoassay(CLIA)and enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA)in diagnosis of viral hepatitis type B(hepatitis B).Methods:A total of 154 patients with suspected hepatitis B admitted to the hospital from May 2020 to May 2022 were selected as the research objects.The levels of hepatitis B serum markers[hepatitis B surface antigen(HBsAg),hepatitis B surface antibody(HBsAb),hepatitis B e antigen(HBeAg),hepatitis B e antibody(HBeAb),hepatitis B core antibody(HBcAb)]were detected by CLIA and ELISA.Using the results offluorescence quantitative polymerase chain reaction(PCR)as the gold standard,the diagnostic efficiencies of CLIA and ELISA for hepatitis B and the detection rate of low-level HBsAg were compared.Results:Among the 154 suspected hepatitis B patients,92 cases were positive and 62 cases were negative byfluorescence quantitative PCR;the HBsAg levels were 0.06-0.10 U/mL in 5 cases,0.11-0.50 U/mL in 5 cases,0.51-2.50 U/mL in 8 cases,and 2.51-3.00 U/mL in 2 cases.There were 89 positive cases and 65 negative cases diagnosed by CLIA.There were 78 cases were positive and 76 cases were negative by ELISA.The sensitivity,the accuracy and the negative predictive value of CLIA in the diagnosis of hepatitis B were higher than those of ELISA,the missed diagnosis rate was lower than that of ELISA,and the differences were statistically significant(<0.05).The detection rate of HBsAg level of 0.06-0.10 U/mL by CLIA method was higher than that by ELISA method,and the difference was statistically significant(<0.05).Conclusions:The diagnostic efficiency of CLIA in hepatitis B is higher than that of ELISA.
【Keywords】Chemiluminescence immunoassay;Enzyme-linked immunosorbent assay;Viral hepatitis type B;Serological marker;Efficiency
乙型病毒性肝炎（乙肝）可发展为肝硬化、肝癌等，严重威胁患者生命安全[1]。已知乙肝患者可发生特异性免疫应答，乙肝血清标志物发生明显变化，因此检测血清标志物可明确诊断[2-3]。酶联免疫吸附（ELISA）法是目前临床常用的检测方法，但其无法进行定量分析，不利于监测病情变化[4]。化学发光免疫分析（CLIA）法作为新一代标记免疫测定技术，可精确进行定量分析，具有操作简便、灵敏度高等优点[5]。本文比较CLIA法与ELISA法在乙肝诊断中的效能。
1资料与方法
1.1一般资料选取2020年5月至2022年5月本院收治的154例疑似乙肝患者为研究对象。纳入标准：存在恶心呕吐、食欲不振、肝区疼痛等症状；乙肝患者接触史；精神正常，可配合研究。排除标准：合并肝硬化、肝脏肿瘤等其他肝脏疾病；合并心、肺、肾等重要脏器功能障碍；合并自身免疫性疾病；合并感染性疾病。其中男83例，女71例；年龄32~68岁，平均（45.84±5.32）岁；体质量指数20.3~27.3 kg/m2，平均（23.58±1.25）kg/m2。
1.2方法
1.2.1荧光定量聚合酶链反应（PCR）法检测采集患者空腹外周静脉血5 mL，37℃条件下离心（3500 r/min，离心半径8 cm，离心10 min）后，分离血清保存待测。取100μL血清标本和100μL试剂盒对照样本，离心后取上清液，加入100μL血清标本，摇匀后再次离心，弃去上清液，于沉淀物中加入25μL血清标本，沸水浴10 min后离心，取上清液，将37.6μL PCR反应液加入离心管内，并添加0.4μLTaq酶、0.06μL尿苷酶，处理标本，以108、107、106、105、104、103copies/mL为对照样本浓度梯度，混匀后移至检测区，采用核酸扩增仪进行PCR扩增分析。
1.2.2 CLIA法检测采集患者空腹外周静脉血5 mL，37℃条件下离心（3500 r/min，离心半径8 cm，离心10 min）后，分离血清保存待测。将血清标本置于乙型肝炎核心抗原（HBcAg）包被的聚苯乙烯试管中，采用辣根过氧化酶标记，磷酸盐缓冲液清洗，之后分别加入0.1 mol/L、30 mol/L氢氧化钠各100μL，静置10 min后加入3%过氧化氢50μL，采用标本相对光强度（RLU）与标准曲线比较计算浓度，乙型肝炎表面抗原（HBsAg）>0.05 U/mL为阳性，乙型肝炎表面抗体（HBsAb）>10 U/mL为阳性，乙型肝炎e抗原（HBeAg）、乙型肝炎核心抗体（HBcAb）以标本RLU与临界值RLU的比值（S/CO）≥1.00为阳性，e抗体（HBeAb）以S/CO≤1.00为阳性。
1.2.3 ELISA法检测采集患者空腹外周静脉血5 mL，37℃条件下离心（3500 r/min，离心半径8 cm，离心10 min）后，分离血清保存待测。放置ELISA试剂于微孔反应板反应30 min，将血清标本加入反应板中，置于37℃水溶箱中1 h，清除微孔反应板中液体，将反应板倒置于缓冲液中洗涤5次，之后再次加入ELISA试剂，置于37℃水溶箱中30 min，加入ELISA终止液，采用全自动化学发光仪检测其发光强度，以标本OD值与临界OD值的比值（S/CO）≥1.00为阳性，HBeAb、HBcAb以S/CO≤1.00为阳性。
1.3观察指标（1）统计荧光定量PCR法诊断结果。（2）以荧光定量PCR检测结果为金标准，比较CLIA法与ELISA法在乙肝中的诊断效能。（3）比较CLIA法与ELISA法对低水平HBsAg的检出率。
1.4统计学方法采用SPSS 23.0统计学软件处理数据，计数资料以率（%）表示，采用χ2检验，计量资料以（±s）表示，以<0.05为差异有统计意义。
2结果
2.1荧光定量PCR法诊断结果154例疑似乙肝患者中，荧光定量PCR法诊断阳性92例，阴性62例；HBsAg水平0.06~0.10 U/mL 5例，0.11~0.50 U/mL 5例，0.51~2.50 U/mL 8例，2.51~3.00 U/mL 2例。
2.2 CLIA法与ELISA法在乙肝中的诊断效能比较CLIA法诊断阳性89例，阴性65例；ELISA法诊断阳性78例，阴性76例。CLIA法诊断乙肝的灵敏度、准确度、阴性预测值均高于ELISA法，漏诊率低于ELISA法，差异有统计学意义（<0.05）。见表1、2。
2.3 CLIA法与ELISA法对低水平HBsAg的检出率比较CLIA法对HBsAg水平0.06~0.10 U/mL的检出率高于ELISA法，差异有统计学意义（<0.05）。见表3。
3讨论
乙肝是临床常见的传染性疾病，其早期症状较为隐匿，易发生误诊、漏诊，且随病情进展可发展为肝硬化或肝癌，增高患者病死风险[6-7]。乙肝血清标志物检测是目前临床诊断乙肝的常用方案，其中以ELISA法和CLIA法较为常用。本研究结果显示，CLIA法诊断乙肝的灵敏度、准确度、阴性预测值均高于ELISA法，漏诊率低于ELISA法。分析原因为ELISA法虽具有简便快捷、价格低廉等优势，但该方法仅适用于定性分析，当血清标本中相关标志物浓度过高时，受钩状效应影响可导致结果存在部分假阴性，不利于动态监测患者的病情变化，无法呈现乙肝病毒感染情况，存在一定的局限性[8-9]。CLIA法为半定量或定量检测方法，具有反应时间短、可重复性强等特点，且其测量范围更大、灵敏度更高[10-11]。且CLIA法检测通过电磁铁力量控制顺磁性微粒，可根据发光强度对血清相关标志物进行分析，可有效弥补人为操作的不足，最大限度地降低漏诊、误诊情况发生，从而提高血清标志物阳性检出率[12-13]。
本研究结果同时显示，CLIA法对HBsAg水平0.06~0.10 U/mL的检出率高于ELISA法。分析原因为CLIA法以顺磁性微粒作为固相载体，可有效增加反应面积，延长发光时间，提高发光强度，从而提高低水平乙肝血清标志物的检出率[14-15]。
综上所述，CLIA法在乙肝中的诊断效能高于ELISA法。
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