SCI论文（www.lunwensci.com）
【摘要】目的 对比分析应用T 细胞斑点试验(T-SPOT.TB )、浆膜腔积液腺苷脱氨酶(ADA )检测对结核性浆膜炎的诊断价值， 以期为 临床诊断该疾病提供参考依据。方法 选取2020 年 10 月至2022 年 10 月包钢集团第三职工医院收治的 160 例浆膜腔积液患者， 进行前瞻性 研究，所有患者均行外周血T-SPOT.TB 检测、浆膜腔积液T-SPOT.TB 检测、浆膜腔积液ADA 检测、痰结核杆菌培养。根据痰结核分歧杆菌培 养结果将其分为非结核性浆膜炎组(87 例)和结核性浆膜炎组(73 例)。比较两组患者外周血、浆膜腔积液T-SPOT.TB 检测的浆膜腔积液斑 点形成细胞数(SFC )及血清ADA 水平;比较两组患者浆膜腔积液、外周血T-SPOT.TB 及浆膜腔积液ADA 对结核性浆膜炎的阳性诊断结果 与诊断效能。结果 结核性浆膜炎组外周血、浆膜腔积液 SFC 及浆膜腔积液ADA 水平均显著高于非结核性浆膜炎组，且两组患者浆膜炎积 液 SFC 均较外周血 SFC 水平更高(均P<0.05 );浆膜腔积液T-SPOT.TB、外周血T-SPOT.TB 诊断结核性浆膜炎的灵敏度、准确度、阳性预测 值、阴性预测值均显著高于浆膜腔积液ADA 检测，且浆膜腔积液T-SPOT.TB 诊断显著高于外周血T-SPOT.TB 检测，浆膜腔积液T-SPOT.TB 诊断结核性浆膜炎的特异度显著高于浆膜腔积液 ADA 检测(均 P<0.05 )。结论 外周血、浆膜腔积液 T-SPOT.TB 检测及浆膜腔积液 ADA 检测均可诊断结核性浆膜炎， 但 T-SPOT.TB 检测的诊断价值高于浆膜腔积液 ADA 检测， 且浆膜腔积液 T-SPOT.TB 检测的诊断价值最高， 可对结核性浆膜炎患者的病情诊断及预后评估起到一定的参考价值。
结核性浆膜炎起病隐匿，多与肝硬化、肺炎等因素所 致的浆膜腔积液混淆，痰结合分歧杆菌培养为诊断结核性 浆膜炎的金标准，但该诊断方式的培养周期相对较长 [1]。 腺苷脱氨酶(ADA)是参与嘌呤核苷代谢的一种酶，在淋 巴细胞内含量最多，其活性增强则表示机体局部细胞出现 免疫活化，发生结核性浆膜炎时因细胞受刺激浆膜腔积 液中淋巴细胞明显增多，但在其他导致免疫功能障碍的 疾病中也可出现升高现象 [2] 。结核感染 T 细胞斑点试验 (T-SPOT.TB)是将酶联免疫斑点技术作为检测原理，主要 检测结核杆菌特异性抗原早期分泌抗原靶 6 和培养滤过蛋 白刺激 T 淋巴细胞产生的 γ - 干扰素，有着简便快捷、检 测效率高等优势 [3] 。基于此，本研究将针对结核性浆膜炎 患者应用 T-SPOT.TB 检测、ADA 检测的诊断价值进行探 讨与分析，现报道如下。
1 资料与方法
1.1一般资料 选取 2020 年 10 月至 2022 年 10 月包钢 集团第三职工医院所收治的 160 例浆膜腔积液患者，进行 前瞻性研究，根据痰结核分歧杆菌培养检查结果分为非结核性浆膜炎组(87 例)和结核性浆膜炎组(73 例)。非 结核性浆膜炎组患者年龄 26~70 岁，平均(41.35±3.20) 岁;男性 48 例，女性 39 例。结核性浆膜炎组患者年 龄 25~70 岁，平均(41.37±3.22 )岁;男性 49 例，女 性 24 例。对比两组患者一般资料，差异无统计学意义 (P>0.05)，组间具有可比性。纳入标准：符合《浆膜积液 细胞图谱新解及病例分析》 [4] 中浆膜腔积液的诊断标准; 影像学检查结果显示浆膜腔有明显积液者;结核性浆膜炎 组患者同时经实验室诊断为胸腔积液结核杆菌培养阳性， 有发热、盗汗、胸痛等相应临床表现;非结核浆膜炎组患 者已确诊为其他疾病，随访 1~3 个月无结核病表现等。排 除标准：近 3个月有胸部手术、创伤史者;病因诊断不明 确者;接受过抗结核治疗者等。本研究已经院内医学伦理 委员会批准，且患者均自愿签署知情同意书。
1.2检测方法
1.2.1 痰结核分歧杆菌培养 采集两组患者痰液样本约 4 mL，放入适合结核杆菌生长的培养基中进行培养，将 培养基呈倾斜状态放置，形成斜面，若无菌落生长则为阴 性，菌落生长于斜面则为阳性。
1.2.2 T-SPOT.TB 检测 ①外周血 T-SPOT.TB 检测：采 集患者空腹外周血大约 3 mL，并将其置于抗凝管中，在 6 h 内送检，利用 RPMI 1640 培养液、Ficoll 淋巴细胞分 离液，以密度梯度离心法提取血液中的单个核细胞，分 离完成后通过 AIM-V 培养液将单个核细胞浓度调整至 2.5 × 105 个 /mL。在 T-SPOT.TB 试剂盒微孔板上各孔分别 注入 50 μL AIM-V 培养液(阴性对照)、50 μL 植物血凝 素(阳性对照)、50 μL 结核分歧杆菌特异抗原 ESAT-6(A 孔)、50 μL 抗原 CEP-10(B 孔)，然后各微孔分别统一注 入 100 μL 标准溶液(浓度为 2.5× 105 个 /mL 的单个核细 胞工作液)，然后将微孔板放置于 37 ℃、5% CO2 培养箱， 16~20 h 后取出，采用磷酸盐缓冲溶液洗板，重复 4 次后， 各微孔中加入由碱性磷酸酶标记的二抗(γ- 干扰素抗体)， 于 2~8 ℃ 的条件下孵育 60 min，再次进行 4 次洗板，注 入底物显色溶液并以正常室温避光孵育 7 min，采用去离 子水重复冲洗直至反应终止，于室温下干燥 2~3 h 后，利 用酶联免疫斑点分析仪 [ 复星诊断科技(长沙)有限公 司，型号：ES-15] 计数斑点形成细胞数(SFC)，一个斑点 代表 1 个效应 T 细胞。②浆膜腔 T-SPOT.TB 检测：抽取 两组患者约 50 mL 浆膜腔积液放置于肝素抗凝管中，其 余操作同外周血 T-SPOT.TB 检测。③阳性判断标准：使 用斑点计数法判断，阴性对照斑点数为 0~5 个，若测试孔 A 或 B 斑点数减去阴性对照孔斑点数≥6 个， 或阴性对照 斑点数≥6 个， 测试孔 A 或 B 斑点数≥2 倍阴性对照孔 斑点数则为阳性 [5]。
1.2.3 ADA 检测 抽取两组患者约 5 mL 浆膜腔积液，离 心(5 000 r/min，10 min)后，取上清液，通过生化分析 仪(浙江普施康生物科技有限公司，型号：MS200)检测 ADA，若 ADA>30 U/L 则为阳性 [6]。
1.3观察指标 ①统计两组患者外周血、浆膜腔积液 T-SPOT.TB 检测的 SFC，以及浆膜腔积液 ADA 水平。 ②比较 3 种检测方法诊断结核性浆膜炎的检测结果比较。 ③比较 3 种检测方法诊断结核性浆膜炎的诊断效能。
1.4统计学方法 采用 SPSS 20.0 统计学软件分析本研究 所有数据，计量资料均使用 S-W 法检验证实服从正态分 布，以 (x ±s) 表示，采用t 检验;计数资料以 [ 例 (%)] 表 示，两组间比较采用 χ2 检验，3 组间比较采用 χ2 趋势检 验。以P<0.05 为差异有统计学意义。
2 结果
2.1两组患者外周血、浆膜腔积液 SFC及浆膜腔积液 ADA水平比较 结核性浆膜炎组外周血、浆膜腔积液 SFC 及浆膜腔积液 ADA 水平均显著高于非结核性浆膜炎 组;且浆膜炎积液 SFC 较外周血更高，差异均有统计学意义(均P<0.05)，见表 1.
2.2 3种检测方法诊断结核性浆膜炎的检测结果比较 外 周血 T-SPOT.TB、浆膜腔积液 T-SPOT.TB、浆膜腔积 液 ADA 检测诊断结核性浆膜炎的阳性率分别为 56.25% (90/160 )、60.62%(97/160 )、53.75%( 86/160 )，3 种检测方 法的阳性率及两者间两两比较，差异均无统计学意义(均 P>0.05)，见表 2.
2.3 3种检测方法诊断结核性浆膜炎的诊断效能比较 浆 膜腔积液 T-SPOT.TB、外周血 T-SPOT.TB 诊断结核性浆 膜炎的灵敏度、准确度、阳性预测值、阴性预测值均显著 高于 ADA 检测，且浆膜腔积液 T-SPOT.TB 诊断显著高于 外周血 T-SPOT.TB，浆膜腔积液 T-SPOT.TB 诊断结核性 浆膜炎的特异度显著高于 ADA 检测，差异均有统计学意 义(均P<0.05)，见表 3.
3 讨论
结核性浆膜炎属于一类较为常见的肺外结核类型，目 前临床上多采用痰培养检查诊断该疾病， 虽然灵敏度高， 但 送检不及时、留取方式错误等均会影响痰标本检测的阳性 率， 导致阳性率较低， 且检测周期较长， 可能贻误治疗 [7]。
SPOT.TB 可记录机体中每个活化的结核特异效应 T 细 胞， 并通过对结核特异效应 T 细胞的检测判断患者体内是 否出现结核杆菌感染，且敏感度相对较高 [8] 。ADA 是一 类可参与嘌呤核苷代谢的酶类物质，其可催化腺嘌呤核苷 降解为次黄嘌呤核苷，而后经核苷磷酸化酶催化成次黄嘌 呤。ADA 主要存在于淋巴细胞中， 其水平与淋巴细胞的激 活和分化有关，当患者发生结核性浆膜炎时，由于机体受 到结核分歧杆菌的刺激，淋巴细胞可有不同程度的分化、 激活，浆膜腔积液中淋巴细胞明显增多，导致 ADA 含量 也显著增多，从而可诊断为结核感染 [9]。
虽然 T-SPOT.TB 检测可通过结合效应 T 细胞来诊断 患者是否出现结核感染，但当患者外周血中淋巴细胞减少 时，仍有不确定结果或假阴性等情况出现，其诊断效能可 随之降低。浆膜炎积液 T-SPOT.TB 检测是从患者局部病 灶直接获取结核特异效应 T 淋巴细胞，由于结核性浆膜 炎患者结核杆菌可诱导机体淋巴细胞聚集于局部的炎症反 应，各类积液中淋巴细胞数量增多，远远多于外周血，因 此浆膜腔积液 T-SPOT.TB 检测价值更高，可避免由于患 者处于潜伏期或病情好转时期而出现漏诊、误诊 [10] 。由 于浆膜腔积液患者本身已处于疾病状态，其体内可能存在 多种致病菌，且 T-SPOT.TB 检测虽对结核分歧杆菌存在 较高的敏感性，但仍可检出患者体内的非结核分歧杆菌， 存在一定的阳性误差。ADA 基本在淋巴细胞和淋巴组织 中表达，但当患有淋巴瘤、感染性疾病等疾病时，浆膜腔 积液中 ADA 水平也会升高，因此诊断结核性浆膜炎的效 能较差。本研究中，结核性胸膜炎浆膜炎组外周血、浆膜 腔积液 T-SPOT.TB 检测出的 SFC 及 ADA 均显著高于非结 核性胸膜炎浆膜炎组，浆膜炎积液 T-SPOT.TB 检测出的 SFC 均较外周血 T-SPOT.TB 检测更高，同时浆膜腔积液 T-SPOT.TB、外周血 T-SPOT.TB 诊断结核性浆膜炎的诊断 效能均显著高于 ADA 检测，且浆膜腔积液 T-SPOT.TB 诊 断显著高于外周血 T-SPOT.TB，浆膜腔积液 T-SPOT.TB 诊 断结核性浆膜炎的特异度显著高于 ADA 检测，表示外周 血、浆膜腔积液 T-SPOT.TB 检测及浆膜腔积液 ADA 水平 可诊断结核性浆膜炎， 且浆膜腔积液 T-SPOT.TB 检测的诊 断价值较高。
综上，外周血、浆膜腔积液 T-SPOT.TB 检测及浆膜 腔积液 ADA 水平可诊断结核性浆膜炎，但 T-SPOT.TB 检 测的诊断价值高于浆膜腔积液 ADA 检测，且浆膜腔积液 T-SPOT.TB 检测的诊断价值最高，可对结核性浆膜炎患者 的病情诊断及预后评估起到一定的参考价值。
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