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【摘要】 目的：观察结核菌感染 T 细胞斑点试验（T-SPOT.TB）联合基因芯片检测在肺结核诊断中的效能。 方法：选取 150 例年龄 >60 岁疑似肺结核的患者作为研究对象，均行 T-SPOT.TB、基因芯片检查。以痰培养及痰涂片检测结果为金标准，统计 T-SPOT.TB、基因芯片 单项及联合检测诊断肺结核的效能。 结果： 痰培养及痰涂片检出 82 例阳性， 68 例阴性； T-SPOT.TB 检出 80 例阳性， 70 例阴性；基因芯 片检出 81 例阳性， 69 例阴性 ；联合检测检出 94 例阳性， 56 例阴性；联合检测诊断肺结核的灵敏度、阴性预测值均高于 T-SPOT.TB 与基 因芯片单项检测， 漏诊率低于 T-SPOT.TB 与基因芯片单项检测；准确度高于 T-SPOT.TB 单项检测， 差异均有统计学意义（P<0.05）；T-SPOT. TB、基因芯片单项及联合检测诊断肺结核的特异度、误诊率、阳性预测值比较，差异均无统计学意义（P>0.05） ；联合检测与基因芯片单 项检测诊断肺结核的准确度比较，差异无统计学意义（P>0.05）。 结论： T-SPOT.TB 联合基因芯片检测诊断肺结核能提高灵敏度、阴性预 测值，降低漏诊率，效能优于 T-SPOT.TB 或基因芯片单项检测。
【关键词】 结核菌感染 T 细胞斑点试验；肺结核；基因芯片；诊断；阴性预测值；漏诊率；效能
Efficacy of tuberculosis infection T cell spot test combined with gene chip detection in diagnosis of pulmonary tuberculosis
XIA Xuesong
(Department of Laboratory Medicine of Pingdingshan Third People’s Hospital, Pingdingshan 467000 Henan, China)
【Abstract】 Objective: To observe efficacy of tuberculosis infection T cell spot test (T-SPOT.TB) combined with gene chip detection in diagnosis of pulmonary tuberculosis. Methods: 150 cases of suspected pulmonary tuberculosis patients aged > 60 years old were selected as the research objects, and all of them underwent T-SPOT.TB and gene chip examination. Taking the results of sputum culture and sputum smear examinations as the gold standard, the results of single T-SPOT.TB and single gene chip detection as well as combined detection of pulmonary tuberculosis were statistically analyzed, and their efficacies were compared. Results: Sputum culture and sputum smears detected 82 positive cases and 68 negative cases; T-SPOT.TB detected 80 positive cases and 70 negative cases; gene chip detected 81 positive cases and 69 negative cases; and combined detection detected 94 positive cases and 56 negative cases. The sensitivity and the negative predictive value of combined detection for the diagnosis of pulmonary tuberculosis were higher than those of single T-SPOT.TB and single gene chip detection the missed diagnosis rate was lower than those of single T-SPOT.TB and single gene chip detection; the accuracy was higher than single T-SPOT.TB; and the differences were statistically significant (P<0.05). There were no statistically significant differences in the specificity, the misdiagnosis rate, and the positive predictive value single and combined detection of t-spot.tb and gene chip in the diagnosis of pulmonary tuberculosis (P>0.05). Further, there was no statistically significant difference in the accuracy between combined detection and single gene chip detection in the diagnosis of pulmonary tuberculosis (P<0.05). Conclusions: The sensitivity, the negative predictive value, the missed diagnosis rate, and the efficiency of T-SPOT.TB combined gene chip detection in the diagnosis of pulmonary tuberculosis are better than single T-SPOT.TB and single gene chip detection.
【Key words】 Tuberculosis infection T cell spot test; Pulmonary tuberculosis; Gene chip; Diagnosis; Negative predictive value; Missed diagnosis rate; Efficacy
结核病是由结核分枝杆菌引发的一种慢性传 染性疾病，可侵袭机体多个器官，以肺结核最为常 见 [1-2] 。感染结核分枝杆菌后当机体抵抗力减弱或 细胞介导的变态反应增强后才可发病，故在疾病早 期及时诊断治疗有重要意义 [3] 。临床诊断以痰培养及痰涂片为金标准，但药敏试验耗费时间较长，故 临床应用受限。基因芯片技术属核酸检测手段，可 检查结核分枝杆菌基因和常见突变位点；结核菌感 染 T 细胞斑点试验（T-SPOT.TB）是通过计数经结 核特异性抗原刺激、有效释放 γ 干扰素的效应细 胞来对结核杆菌感染情况作出判断的技术 [4-5] 。本 文观察 T-SPOT.TB 联合基因芯片检测在肺结核诊 断中的效能。
1 资料与方法
1.1 一般资料 选取 2018 年 3 月至 2020 年 8 月本院收治的 150 例年龄 >60 岁疑似肺结核患者作为研究对象。纳入标准：有咳嗽、咳痰、肺部哮鸣音、发热或不伴发热等疑似肺结核症状；行 T-SPOT.TB、基因芯片检测。排除标准：合并心、肾、肝功能障碍；精神异常、认知功能障碍；合并免疫系统疾病、凝血功能障碍、恶性肿瘤；有慢性阻塞性肺疾病、哮喘等肺部疾病。其中女 62 例，男 88 例；年龄 61~76 岁，平均（68.26±3.52）岁；体质量指
数 18.6~26.3 kg/m2，平均（22.53±1.36）kg/m2。
1.2 方法 所有检测所用试剂盒、培养液、染色液、显色液均购自珠海贝索生物科技有限公司；提取液、缓冲液、基因芯片等均购自北京博奥生物有限公司。
痰培养及痰涂片：收集患者三次痰（晨痰、夜间痰、随机痰），进行 2 次培养检测，按照罗氏培养法和直接涂片萋 - 尼氏抗酸染色法进行检验。
T-SPOT.TB 检测：收集患者 5 mL 肘静脉血置于抗凝管中，室温下保存，并及时送检。使用密度梯度离心法在生物安全柜内提取外周血单个核细胞，洗涤、提纯。取出培养板条，嵌入培养板架内恢复至室温；每个样本共用到4 个检测孔，加入细胞培养液、抗原 A 溶液、抗原 B 溶液和阳性质控品；在 37 ℃、5%CO2 的培养箱中培养 16~20 h。最后加入显色剂，蒸馏水洗板后，采用光学显微镜进行细胞计数。结果判定：若视野内阴性对照孔斑点数 6~10 个时，任意一试验孔的斑点数≥阴性对照孔斑点数的两倍，则为阳性；若阴性对照孔斑点数≤ 5 时，任意一实验孔斑点数减去阴性对照孔斑点数≥ 6 时，则为阳性；不符合上述条件，且阳性对照孔正常时为阴性。
基因芯片检查： 采用电化学基因芯片检测仪（佛山达安医疗设备有限公司，国械注准20143402060）对痰标本进行处理并扫描基因，按照说明书进行标本处理，提取核酸，进行PCR扩增、杂交反应、扫描芯片、自动判读。
1.3 观察指标 （1）以痰培养及痰涂片检查结果为金标准，统计 T-SPOT.TB、基因芯片单项检测及联合检测诊断肺结核的结果。任意单一检测为阳性即为联合检测阳性。（2）比较 T-SPOT.TB、基因芯片单项及联合检测在肺结核诊断中的效能，包括灵敏度、特异度、准确度、漏诊率、误诊率、阳性预测值、阴性预测值。
1.4 统计学方法 采用 SPSS 22.0 统计学软件分析数据，计数资料以率（%）表示，采用 χ2 检验，以P<0.05 为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 T-SPOT.TB、基因芯片单项及联合检测诊断肺结核的结果 痰培养及痰涂片检出 82 例阳性，68例阴性；T-SPOT.TB 检出 80 例阳性，70 例阴性；基因芯片检出 81 例阳性，69 例阴性；联合检测检出 94 例阳性，56 例阴性。见表 1。
2.2 T-SPOT.TB、基因芯片单项及联合检测在肺结核诊断中的效能比较 联合检测诊断肺结核的灵敏度、阴性预测值均高于 T-SPOT.TB、基因芯片单项检测，漏诊率低于 T-SPOT.TB、基因芯片单项检测，准确度高于 T-SPOT.TB 单项检测，差异均有统计学意义（P<0.05）；T-SPOT.TB、基因芯片单项及联合检测诊断肺结核的特异度、误诊率、阳性预测值比较，差异均无统计学意义（P>0.05）；联合检测与基因芯片单项检测诊断肺结核的准确度比较，差异无统计学意义（P>0.05）。见表 2。
3 讨论
肺结核的早期筛查、确诊对疾病治疗及预后具有重要意义 [6]。其中老年肺结核患者因其自身常伴有基础疾病、脏器功能减退等情况，需及早进行诊断治疗。
痰培养及痰涂片为结核分枝杆菌检测的金标准，可有效检出结核分枝杆菌，但其出结果时间约为 4 周，且操作繁琐，不利于早期筛查。T-SPOT.TB 检测通过检测结核分枝杆菌特异性抗原刺激机体产生 γ- 干扰素以判断机体是否感染结核分枝杆菌；与痰培养和痰涂片检测相比，T-SPOT.TB 检测与患者是否在排菌期及排菌量无关，且其检测标本为血液或体液，较容易获取，能够于短时间内取得检验结果，从而实现快速诊断 [7]。本研究结果显示，联合检测诊断肺结核的灵敏度、阴性预测值均高于 T-SPOT.TB、基因芯片单项检测，漏诊率低于 T-SPOT.TB、基因芯片单项检测；联合检测诊断肺结核的准确度高于 T-SPOT.TB 单项检测。分析原因在于，基因芯片将玻璃等固相作载体，通过将基因信息固化，并进行系统扫描、显色，对结果进行量化分析，能了解基因位点、类型，以准确诊断结核分枝杆菌，有助于指导临床早期治疗，但操作复杂，容易因处理操作不当导致漏诊发生 [8]。本研究结果同时显示，T-SPOT.TB、基因芯片单项及联合检测诊断肺结核的特异度、误诊率、阳性预测值比较，以及联合检测与基因芯片单项检测诊断肺结核的准确度比较，差异均无统计学意义。提示 T-SPOT.TB 联合基因芯片检测不影响肺结核诊断的特异度和误诊率。由于本研究纳入的样本量较少，其结果尚需后续扩大样本量开展进一步研究予以印证。
综上所述，T-SPOT.TB 联合基因芯片检测诊断肺结核能提高灵敏度、阴性预测值，降低漏诊率，效能优于 T-SPOT.TB 或基因芯片单项检测。
参考文献
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