腹泻患儿粪标本沙门菌菌型及对抗菌药物的耐药性论文

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　　【摘要】 目的：分析腹泻患儿粪标本沙门菌菌型及对抗菌药物的耐药性。方法： 回顾性分析 2018 年 2 月至 2021 年 2 月河南大学淮 河医院收治的 2487 例腹泻患儿的临床资料，取新鲜粪便标本，进行细菌培养、菌型鉴定及药敏试验，统计沙门菌检出情况及血清型，并 分析不同人口学特征患儿检出情况和不同菌型沙门菌耐药率。 结果： 2487 份粪便标本共分离出 107 株沙门菌， 检出率为 4.30%(107/2487)， 2018、2019、2020、2021 年检出率分别为 5.81%、4.21%、4.32%、2.45%;107 株沙门菌主要血清型为肠炎沙门菌、鼠伤寒沙门菌， 分别 占 14.95%、63.55%; 男性、5~9 岁、病程≥ 5 d、腹泻次数≥ 4 次 /d、中度脱水患儿沙门菌检出率较高; 肠炎沙门菌对环丙沙星、氨苄西林、 左氧氟沙星耐药率均高于 70.00%，对诺氟沙星、头孢曲松、亚胺培南、美罗培南耐药率均低于 10.00%;鼠伤寒沙门菌对环丙沙星、氨苄 西林耐药率均高于 80.00%， 对头孢曲松、亚胺培南、美罗培南均无耐药; 其他类型沙门菌对环丙沙星、氨苄西林耐药率均高于 90.00%， 对头孢曲松、亚胺培南、美罗培南耐药率均低于 10.00%。结论： 腹泻患儿粪标本沙门菌血清型主要为肠炎沙门菌、鼠伤寒沙门菌， 其对 抗菌药物的耐药性差异明显。

　　【 Abstract 】 Objective: To analyze Salmonella types and antimicrobial resistance of faecal specimens of children with diarrhea. Methods: The clinical data of 2487 children with diarrhea admitted to Huaihe Hospital of Henan University from February 2018 to February 2021 were retrospectively analyzed. The fresh faecal specimens were taken for bacterial culture, bacterial identification and drug sensitivity test. The detection and serotype of Salmonella were statistically analyzed. The detection of children with different demographic characteristics and the drug resistance rate of different types of Salmonella were analyzed. Results: A total of 107 strains of Salmonella were isolated from the 2487 faecal samples with a detection rate of 4.30% (107/2487). The detection rates in 2018. 2019. 2020 and 2021 were 5.81%, 4.21%, 4.32% and 2.45%, separately. The main serotypes of the 107 strains of Salmonella were Salmonella enteritidis and Salmonella typhimurium, accounting for 14.95% and 63.55%, respectively. Among the children with diarrhea, Salmonella was mostly detected in male, 5-9 years old, course of disease ≥ 5 d, diarrhea frequency ≥ 4 times, and moderate dehydration. The resistance rates of Salmonella enteritidis to Ciprofloxacin, Ampicillin and Levofloxacin were higher than 70.00%, and the resistance rates to Norfloxacin, Ceftriaxone, iImipenem and Meropenem were lower than 10.00%. The resistance rates of Salmonella typhimurium to Ciprofloxacin and Ampicillin were higher than 80.00%, and there was no resistance to Ceftriaxone, Imipenem and Meropenem. The resistance rates of other types of Salmonella to Ciprofloxacin and Ampicillin were higher than 90.00%, and the resistance rates to Ceftriaxone, Imipenem and Meropenem were lower than 10.00%. Conclusions: The serotypes of Salmonella in the faecal specimens of the children with diarrhea are mainly Salmonella enteritidis and Salmonella typhimurium, and their resistance to antibiotics is significantly different.

　　【Keywords】 Diarrhea; Children; Faecal specimens; Salmonella; Serotype; Drug sensitivity test; Drug resistance

　　腹泻是一种常见的食源性疾病，主要症状为排 便次数增加、腹痛、粪便性质改变等，可引发营养 不良、贫血、水电解质紊乱、脱水等并发症 [1-2]。 我国腹泻患病率为 0.17~0.70 次 / 人年，而 5 岁以 下小儿患病率为 2.50~3.38 次 / 人年 [3-4] 。沙门菌属 是最常见的感染性腹泻病原体，但由于广谱抗生素的大量使用，导致沙门菌属出现多种新型耐药菌 株 [5] 。因此快速、准确区分沙门菌菌型，明确不同 菌型对抗菌药物的耐药率在临床腹泻诊疗中意义重 大。本文分析腹泻患儿粪标本沙门菌菌型及对抗菌 药物的耐药性。

　　1 资料与方法

　　1.1 一般资料 回顾性分析 2018 年 2 月至 2021 年 2 月河南大学淮河医院收治的 2487 例腹泻患儿 的临床资料。纳入标准：符合《中国儿童急性感染性腹泻病临床实践指南》中腹泻的诊断标准 [6] ;存 在明显排便次数增加(>2 次 /d) 、粪便水分增加、 质稀薄及大便失禁、肛门不适、排便急迫感等症状; 临床资料完整。排除标准：真菌性腹泻、病毒性腹泻; 粪便取样前抗菌药物治疗史;严重出生并发症(染 色体异常、胃肠道畸形) ;已知免疫缺陷;严重脱 水;肝、肾等重要脏器器质性病变。其中男 1475 例，女 1012 例;年龄 5~12 岁， 平均(8.24±1.42 ) 岁;病程 1~10 d，平均( 5.51 ±0.46 ) d;腹泻次数 2~7 次 /d，平均(4.30±0.42)次 /d;脱水程度： 轻度 1741 例，中度 746 例。

　　1.2 方法

　　1.2.1 仪器及试剂 克氏双糖铁培养基管、HE 琼 脂平板、M-H 琼脂平板购自上海伊华生物技术公 司， 沙门菌显色(CAS) 平板、亚硒酸盐煌绿增菌 液(SBG)购自上海科玛嘉微生物技术公司，沙门 氏菌诊断血清购自宁波天润生物药业有限公司，玻 片购自江苏汇达医疗器械有限公司，灭菌容器购自 诸城市利宇机械有限公司，磷酸盐甘油购自山东鲁 力亚新材料有限公司。

　　1.2.2 细菌培养及鉴定 患者自然排便后，取其脓 血、黏液部分 2 g，液体粪便取 2 mL 絮状物，置于 灭菌容器，不易自然排便时，采用直肠拭子采集 粪便。立即送检，室温保存不超过 2 h，若无法及 时送检放入磷酸盐甘油，但不宜超过 24 h。接种至 HE 琼脂平板，加入 SBG，培养( 35 ℃ ) 16~24 h， 分离出单个菌落， 观察形成菌落形状、色素、大小、 表面等， 选择 HE 琼脂平板边缘淡绿或绿色、中 心黑色、半透明或透明可疑菌落接种于 CAS 平板、 克氏双糖铁培养基管。有粉红色、紫黑色两种菌落， 分别挑选两种菌落在斜面培养基上接种标记，培养 ( 35 ℃ ) 16~24 h，采用全自动细菌鉴定及药敏分 析系统(法国梅里埃 VITEK 2 Compact)进行细菌 鉴定。

　　1.2.3 血清学分型 将已复苏沙门菌株用玻片凝集 法进行血清凝集，采用沙门菌属菌体(O) 、鞭毛 ( H)、表面(Vi)抗原的不同抗血清鉴定沙门菌 血清型，多价抗血清(A~F) 、克氏双糖铁培养基 管菌株室温混匀，轻摇玻片， 1 min 内出现凝集颗 粒为阳性，同方法确定 H 抗原、 Vi 抗原，明确血 清型。

　　1.2.4 药敏试验 采用纸片扩散法(K-B) ，挑取 孵育 18~24 h 后单个菌落，经 0.9% 氯化钠注射液调制成 0.5 麦氏单位，接种至 M-H 琼脂平板，贴 药敏纸片置于 36.5 ℃环境中，孵育 18 h 后判读结 果。选择环丙沙星、氨苄西林、头孢噻肟、头孢他 啶、左氧氟沙星、头孢吡肟、诺氟沙星、头孢曲松、 阿米卡星、亚胺培南、美罗培南、复方新诺明、莫 西沙星等 13 种抗菌药，药敏检测微孔板清亮孔提 示该药物在此浓度可抑制细菌生成，为敏感;浑浊 孔提示该药物在此浓度无法抑制细菌生成， 为耐药; 全自动细菌鉴定药敏分析仪判读时以每种药物清亮 孔数计药敏试验结果，若存在跳孔，则重复试验。 药敏试验结果判定及抗生素药物选择均参照美国临 床实验室标准化协会(CLSI)制订标准。质控菌株： 鼠伤寒沙门菌 ATCC14028.

　　1.3 观察指标 ( 1 ) 统计沙门菌检出情况。(2) 统计检出沙门菌血清型。(3)分析不同性别、年 龄腹泻患儿沙门菌检出情况。(4)分析不同血清 型沙门菌的耐药率。

　　1.4 统计学方法 应用 SPSS 25.0 软件进行统计学 分析，计量资料以( x(—) ±s )表示，采用 t 检验，计 数资料以率(%)表示，采用 χ2 检验，以 P<0.05 为差异有统计学意义

　　2 结果

　　2.1 沙门菌检出情况 2487 份粪便标本共分离 出 107 株沙门菌，检出率为 4.30% ( 107/2487 )，2018、2019、2020、2021 年检出率分别为 5.81%、 4.21%、4.32%、2.45%。见表 1.

　　2.2 沙门菌血清学分型 107 株沙门菌主要血清 型为肠炎沙门菌、鼠伤寒沙门菌，分别占 14.95%、 63.55%。见表 2.

　　2.3 不同人口学特征患儿沙门菌检出情况 男性、 5~9 岁、病程≥ 5 d、腹泻次数≥ 4 次 /d、中度脱 水患儿沙门菌检出率较高。见表 3.

　　2.4 不同血清型沙门菌耐药率分析 肠炎沙门菌 对环丙沙星、氨苄西林、左氧氟沙星耐药率均高于 70.00%，对诺氟沙星、头孢曲松、亚胺培南、美 罗培南耐药率均低于 10.00% ;鼠伤寒沙门菌对环丙沙星、氨苄西林耐药率均高于 80.00%，对头孢 曲松、亚胺培南、美罗培南均无耐药;其他类型沙门菌对环丙沙星、氨苄西林耐药率均高于 90.00%， 对头孢曲松、亚胺培南、美罗培南耐药率均低于 10.00%。见表 4.

　　3 讨论

　　沙门菌是一种常见感染性腹泻病原体，血清型 众多，现阶段已明确分离出血清型 2600 多个，其 中 200 多种血清型沙门菌对人体有致病性 [7-8] 。沙 门菌是引发小儿腹泻的主要肠道致病菌之一，严重 危害小儿健康 [9] 。本研究结果显示， 2487 份粪便 标本共检出 107 株沙门菌，检出率为 4.30%，其中 肠炎沙门菌 16 株( 14.95%) 、鼠伤寒沙门菌 68 株 ( 63.55%) 。提示沙门菌是小儿腹泻的主要致病 菌。需要注意的是，本研究仅检测腹泻患儿沙门菌 属， 未检测其他病菌。本研究结果同时显示， 男性、 5~9 岁、病程≥ 5 d、腹泻次数≥ 4 次 /d、中度脱 水患儿沙门菌检出率较高。分析原因可能为男童活 泼好动， 喜欢室外活动， 加之年龄小， 免疫系统、 肠功能发育不完善，故普遍易感沙门菌 [10-11]。

　　已知抗生素滥用致使病原菌的耐药性加重，小 儿腹泻沙门菌耐药情况尤为明显 [12]。本研究药敏试 验结果显示，肠炎沙门菌对环丙沙星、氨苄西林、 左氧氟沙星耐药率均高于 70.00%，鼠伤寒沙门菌 对环丙沙星、氨苄西林耐药率均高于 80.00%，其 他类型沙门菌对环丙沙星、氨苄西林耐药率均高于 90.00%。提示环丙沙星、氨苄西林不宜作为沙门菌 腹泻首选治疗药物。本研究药敏试验同时显示，肠 炎沙门菌对诺氟沙星、头孢曲松、亚胺培南、美 罗培南耐药率均低于 10.00%，鼠伤寒沙门菌对头孢曲松、亚胺培南、美罗培南均无耐药，其他沙门 菌对头孢曲松、亚胺培南、美罗培南耐药率均低于 10.00%。提示沙门菌属导致小儿腹泻应首选头孢曲松、 亚胺培南、美罗培南等高效、敏感抗菌药物 [13] 。另 需注意的是，沙门菌血清型种类繁多，不同地区主要 流行血清型不尽相同，对抗生素敏感性亦存在差异， 故建议应强化各地区监测工作，深入了解其流行病学 特征，结合病原菌耐药性选择敏感抗生素 [14-15]。

　　综上所述，腹泻患儿粪标本沙门菌血清型主要 为肠炎沙门菌、鼠伤寒沙门菌，其对抗菌药物的耐 药性差异明显。

　　参考文献

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