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摘要：目的分析2014~2016年乌鲁木齐市腹泻病人分离株鼠伤寒沙门菌的耐药性和分子分型，为此类食源性疾病暴发预警、调查及溯源提供参考数据。方法按国标GB4789.4-2016对腹泻标本进行分离培养和生化及血清学鉴定，确定为鼠伤寒沙门菌的菌株采用纸片扩散法(K-B法)检测敏感性，通过脉冲场凝胶电泳(PFGE)对菌株进行电泳分型，所得结果运用BioNumerics 6.6软件进行聚类分析。结果20株鼠伤寒沙门菌中，13株分离自男性，7株分离自女性；0~4岁儿童共分离15株（61.4%），分离时间多集中于每年的5、7月份。抗生素敏感性试验结果显示，20株鼠伤寒沙门菌对氨苄西林、萘啶酸、阿莫西林/克拉维酸耐药度较高，耐药率分别为70.0%、60.0%和35.0%；对氟喹诺酮类如环丙沙星和氨基糖苷类如庆大霉素较敏感；其中耐2种以上抗生素的多重耐药菌株为9株。所有菌株酶切图谱分为9个PFGE型，分别命名为S-1~S-9；各带型包含菌株数为1~6株不等，S-3和S-9分别包含6和3株菌，为该血清型主要优势带型。结论鼠伤寒沙门菌耐药状况比较严重，仍需加强对多重耐药株的监控；鼠伤寒沙门菌引起腹泻病例存在高度散发和分散爆发的流行特征，应当重视PFGE优势带型菌引起潜在聚集性疫情的风险。
关键词：鼠伤寒沙门菌；药敏试验；脉冲场凝胶电泳；分子分型
本文引用格式：杨毅,官蕾,牟文婷,等.2014-2016年乌鲁木齐市鼠伤寒沙门菌耐药与分子分型[J].世界最新医学信息文摘,2019,19(78):267-268.
0引言
沙门氏菌在自然界中分布广泛，它的抗原结构复杂，血清可以分为2700多个，其中鼠伤寒沙门菌经常引起人类胃肠炎或食物中毒，是常见食源性病原菌之一[1-2]。目前，PFGE是国际上公认的食源性疾病研究与暴发调查、溯源的重要手段，被广泛应用于沙门菌及其他致病菌的综合监测工作中[3-6]。本研究对分离自乌鲁木齐市腹泻性疾病监测哨点的20株鼠伤寒沙门菌进行耐药分析，并采用PFGE方法对分离菌株进行分子分型，同时结合流行病学资料，分析不同PFGE型株鼠伤寒沙门菌株的流行能力，为减少和控制肠道传染病流行提供参考。
1资料和方法
1.1资料
实验用菌株选择2014~2016三年间的5~10月间，乌鲁木齐市腹泻性疾病监测哨点(A区，B区，C区，D区，)对感染性腹泻患者的便样分离的沙门氏菌，实验用菌株均经过血清学重新复核鉴定为鼠伤寒沙门菌(抗原式为O4：Hi：H2)。
1.2方法
试验所用的抗菌药物包括7种抗生素药敏纸片：氨苄西林(SAM，10g)、阿莫西林/克拉维酸(AML，20g)、头孢噻肟(CTX，30g)、庆大霉素(GEN，10g)、环丙沙星(CIP，5g)、萘啶酸(NAL，30g)均购自杭州天和微生物试剂有限公司，参照美国临床实验室标准化协会(CLSI/NCCLS)推荐的K-B药敏纸片法进行药物敏感性检测。
PFGE实验参照中国疾病预防控制中心传染病预防控制所推荐的标准化PulseNet China技术手册之脉冲场凝胶电泳（PFEG）操作规范。主要的电泳参数为：电压梯度6 V/cm，电泳夹角120°，电泳温度14℃，初始转换时间：2.16 s终末转换时间：63.8s，电泳时间：18-19h。
1.3统计学处理
数据采用PFGE图像导入BioNumerics（version6.6）软件包进行处理，选择Dice相关系数和UPGMA方法，tolerance设置为1.5%。
2结果
2.1患者一般资料
20株鼠伤寒沙门菌中，13株分离自男性，7株分离自女性；0~4岁儿童共分离15株，占61.4%，分离时间多集中于每年的5、7月份。
2.2耐药性结果
抗生素敏感性试验结果显示，20株鼠伤寒沙门菌对氨苄西林、萘啶酸、阿莫西林/克拉维酸耐药度较高，耐药率分别为70.0%、60.0%和35.0%。分离菌株对头孢类抗生素如头孢噻肟较敏感，对氟喹诺酮类如环丙沙星和氨基糖苷类如庆大霉素耐药率最低(0.0%)。其中耐2种以上抗生素的多重耐药菌株为9株，统计结果见表1。
2.3PFGE分型结果
20株鼠伤寒沙门菌经XbaⅠ酶切并进行脉冲场电泳后，利用Bionumerics软件的Cluster analysis模块进行聚类分析，电泳产生12~15个条带，条带大小在20~1135kb之间，酶切图谱分为9个PFGE型，分别命名为S-1~S-9，各种PFGE型别之间仅有1~3条带的差异，相似度在79.8%~100%，菌株之间具有很近的亲缘关系。见图1。
国家致病菌识别网自2017年启动以来，以网络化信息平台为依托，通过病原识别、分子分型、基因组溯原等新型调查分析技术，为细菌性传染病监测与防控打开了新的局面。其中脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术的应用，为进一步探明相同血清型菌株的同源性，以及识别相同表型菌株间的细微差异提供了一种手段，本研究通过此项技术结合流行病学以期为控制感染性腹泻的发生，查明污染来源，切断传播途径提供基础的实验数据。
S-9型有3株，二者占到总数的45.0%，为乌鲁木齐市鼠伤寒菌的优势带型。这些菌株间遗传相关性很近，不同分离株之间出现变异现象，但仍有高度同源性。通过与辽宁、无锡、北京、上海、四川、广东、河南、湖北、重庆地区报道的鼠伤寒沙门菌分子型比对[9,10]，未见我市鼠伤寒沙门菌有新型别，这也说明我市鼠伤寒沙门菌的感染相对稳定。值得注意的是，2016年7月25日由C区检出的4株鼠伤寒沙门菌PFGE条带相似度为100%，发病日期均为2016年7月21日，由于缺失患者联系方式，无法电话核实是否为聚集性疫情。如我们能够做到对所有病人分离的菌株常规地、实时地进行PFGE分型，对于同一克隆的菌株进行跟踪调查，可以大大提从时间分布上看(表2)，2014~2016年5月-9月均能分离到鼠伤寒沙门菌，鼠伤寒沙门菌感染的高发季节为5月(14.0%，7/20)和7月(14.0%，7/20)；从地区分布上看(表3)，各区域均有鼠伤寒沙门菌株检出，C区检出最多（55.0%，11/20），A区和B区次之(20.0%，4/20)，再次为D区(5.0%，1/20)。从分型结果看，C区有7个型别，A区和B区各有2个型别。
3讨论
本次研究监测数据显示，2014~2016年鼠伤寒沙门菌在腹泻病监测中阳性病例以儿童感染为主，这与林文娟的报道相一致[7]，提示儿童基础免疫力低，感染风险高于其他人群高，应加强该地区卫生宣传。乌鲁木齐作为北方城市，5月后气温回升，细菌性扩散传播疾病的几率增加，加上接触生冷食品的机会增多，感染鼠伤寒沙门菌的潜在风险应得到足够重视。
耐药菌是医疗卫生机构面临的重大问题，抗生素的使用像一把双刃剑，做好治病救人的同时加强耐药监测在公共卫生方面具有重要意义。本研究选用6种抗生素对20株鼠伤寒沙门菌进行药敏试验，结果与杨劲松报道基本一致[8]，鼠伤寒沙门菌分离株对环丙沙星和庆大霉素比较敏感，仍需加强对多重耐药株的监控。
本研究中，以血清型为（O4：Hi：H2）的20株鼠伤寒沙门菌为研究对象，经XbaI酶切、PFGE分型及聚类分析，按照100%的相似度可将菌株酶切图谱分为9个PFGE型，其中S-1型有6株，高发现暴发的能力，真正实现实验室和流行病相结合的传染病监测模式，发挥预警预报的功能。
参考文献
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