SCI论文（www.lunwensci.com）:
摘要：目的 本研究通过实时荧光定量PCR检测前列腺癌患者、前列腺增生患者及正常人血清中miRNA-34b表达水平，探讨miRNA-34b在 前列腺癌早期诊断中的价值。方法 收集2017年12月至2018年10月期间在我院泌尿外科经病理活检确诊的前列腺癌患者、前列腺增生患 者术前血清及健康男性血清。其中前列腺患者30例，年龄59
〜91岁，平均年龄为（77.8±7.4）岁；前列腺增生患者30例，年龄60
〜82岁，平 均年龄（75.3±6.0）岁；健康男性30例。所有患者术前未行任何治疗。采用实时荧光定量PCR检测受试者血清中miRNA-34b及PSA，计算 miRNA-34b在各组患者中的相对浓度。结果miRNA-34b在各组中均有表达，但前列腺癌组中表达最多，与前列腺增生组和健康男性组比较 有统计学意义（
P>0.05）。结论miRNA-34b在各组中均有表达，但在前列腺癌中表达最高，可用来特异性标记前列腺癌，能够临床诊断早期前 列腺癌。
关键词：前列腺癌；miRNA-34b；肿瘤标记物；早期诊断
本文引用格式：王凯，罗振国，牛文斌，等.检验血清中miRNA-34b在前列腺癌早期诊断的价值[J].世界最新医学信息文摘,2019,19（30）:223-224.
0引言
前列腺癌是男性常见恶性肿瘤，在我国发病率相对较低，但 在欧美等发达地区发病率较高，在对男性健康存在极大危害的 恶性肿瘤中，前列腺癌排名第二。前列腺癌在我国并非表现出 高整体发病率特点，然而近几年朝日渐升高方向发展。前列腺 癌病人早期通常不会出现明显症状体征，局限性前列腺癌患者 容易有下尿路综合征等临床症状出现，但一般与前列腺增生等 疾病并发所致，随着疾病进一步发展，症状出现持续加重表现。 部分患者出现骨转移时，则可能以骨盆区或腰部转移病灶的疼 痛或病理性骨折为主要临床表现⑴。前列腺癌早期无典型症状 表现，导致20%左右的病人当确诊时已出现转移，错过了最佳 手术治疗期。故而，对于前列腺癌的研究将重点放在了此病早 期诊断与相关治疗方案的探究上。目前，最常用的前列腺癌筛 查及早期诊断手段包括联合直肠指检（DRE）与前列腺特异抗原 （PSA）。近几年来，PSA在前列腺癌的筛查中发挥了重要的作用， 但是PSA作为应用最为普及的前列腺癌诊断标志物，灵敏度高 但特异性低⑵。故而,针对前列腺癌，挖掘出一个（或若干个）具 备高灵敏度与特异性的诊断指标，从而促成较为有效地早期诊 断的实现，成为了医务人员以及研究人员的希望。近几年相关 研究证实，miRNA这一小RNA分子具备调节功能，对于生理病 理反应时的基因表达以及蛋白效应释放起着关键性作用，特别 是在肿瘤的发生发展过程中被证实具有重要的作用，且具备一 定的特异性，可以作为早期诊断的指标。有研究表明miRNA-34 家族隶属于P53肿瘤抑制网络，致癌因素改变以及DNA受损都 会促使miRNA-34的表达
[3'
4]O本实验旨在研究miRNA-34b在 前列腺癌患者、前列腺增生患者及健康男性血清中的表达水平， 探究其对前列腺癌的诊断价值。
1材料方法
1.1临床资料
收集2017年12月至2018年10月期间在我院泌尿外科经 病理活检确诊的前列腺癌患者、前列腺增生患者术前血清及健 康男性血清。其中前列腺患者30例，年龄59
~91岁，平均年龄 为77岁，均为已行彩超引导瞎前列腺穿刺活检与术后病理回报 确诊患前列腺癌的病人;前列腺增生病人30例，最低年龄60岁， 最高为82岁，年龄均值为75岁，全部确诊患前列腺增生，同时 还没有接受过系统诊疗；健康男性30例，年龄24
~45，平均年龄 31岁，均为无肿瘤疾病及前列腺相关疾病的患者。不予使用可 能影响miRNA表达的慢性病患者的血清样本。采集血清标本 前均充分与患者沟通，取得患者知情同意。所有血清样本均保 存于-80Y环境下。
1.2实验方法
（1 ） PSA检测：由我院检验科进行PSA检测，通过查阅病历获得;（2）提取miRNA：取患者外周血2mL，离心分离后取 300uL血清，应用miRNA试剂盒（Applied Biosystems）提取血 清总RNA，miRNA提取试剂盒分离提取miRNA，按照试剂盒 说明进行逆转录;（3）荧光定量PCR：取提取的血清miRNA， 依逆转录试剂盒（TaqMan ™ MicroRNA Reverse Transcription） 说明方法进行逆转录，反应条件为16Y 30min,42r 30min， 85r 5min，逆转录引物miRNA-34b的特异性茎环引物序列为: 5
,-UAGGCAGUGUCAUUAGCUGAUUG-3
,.用上步所得的 cDNA 为模板，对miRNA-34b、U6引物进行PCR反应扩增。反应条件 为：95Y 10min,95Y 15s,60^ 1min,50个循环。以上反应均在 ABI 7500实时定量PCR仪上完成，每个样本重复进行3次，以 U6为内参基因。采用2-ACt计算miRNA-34b的相对定量表 达水平，其中 ACt = Ct miRNA-34b- Ct U6。
1.3统计学处理
所得CT值以相应标本的U6扩增曲线标准化后，所选用的 数据统计分析软件为SPSS。由无土s表示计量数据结果，通过 ANOVA这一单因素方差分析法进行多组间对比，通过LSD-t检 验进行组间两两对比分析，若
P<0.05,表明存在显著差别。
2结果
通过实时荧光定量PCR检测发现，miRNA-34b在三组 患者的血清样本中均有表达。miRNA-34b在前列腺癌、前列 腺增生及正常男性血清中的相对含量分别为：15.191±4.424、 9.662± 3.978、2.845 ±0.336。
针对三组研究对象的血清数据通过软件SPSS实施正态 检验，获得以下结果，前列腺癌组P值等于0.006,前列腺增生 组P值等于0.020,健康男性组P值等于0.012,表明，在三组内 miRNA-34b以偏态性分布
o miRNA-34b在前列腺癌患者血清 中的表达量明显高于前列腺增生组和健康男性组，
户=0.009。而 在血清数据上，相比健康男性组，前列腺增生组未见明显差别，
P=0.231。以上结果说明miRNA-34b存在于前列腺癌病人血 清内，同时在表达量上，相比健康男性组与前列腺增生组明显偏 高。进而推测，对于前列腺癌的形成发展，miRNA-34b具有重 要作用，具有潜在的诊断价值。
3讨论
前列腺癌是目前困扰男性的最常见的恶性肿瘤之一，近年 来，我国的前列腺癌的发病率产生了较大的变化,前列腺癌的发 生存在地区差异，高发病率地区的发病率相对低发病率地区的发病率约有20倍，6】。由于前列腺癌早期症状不典型，多有与前 列腺增生相似的临床症状表现。目前主要的筛查手段包括前列 腺特异抗原及直肠指检。确诊依赖彩超引导的前列腺穿刺活检。 PSA是目前诊断前列腺癌和预测预后的一个重要的肿瘤标记物， 但PSA作为早期筛查前列腺癌的指标，其敏感性及特异性尚不 足。因此亟需找寻一个更加准确的肿瘤标记物来达到前列腺癌 早期诊断早期治疗的目的。
外泌体是Trams等在1980年最先发现的、直径在30- lOOnm.含有多种蛋白质、DNA、mRNA、miRNA等，在细胞内吞 过程中细胞膜融合外排形成的囊泡，广泛存在与体液，如血清、 唾液、尿液等中。外泌体在肿瘤微环境中含量丰富，与肿瘤的发 生发展、免疫逃逸、微环境建立密不可分。研究表明肿瘤细胞来 源的外泌体可以应用于肿瘤早期检测【7】。而存在与外泌体中的 miRNA,是一类非编码、长度约18-25nt的单链小RNA,参与细 胞的重要生理病理变化过程，且在研究中发现许多肿瘤中都观 察到miRNA异常表达⑻。近期的研究表明miRNA-34家族是 p53肿瘤抑制网络中的一员，miRNA-34的作用能够发挥于p53 的活性环节，可使CDK4、cyclinDl, CDK6以及Bcl2、E2F3与 cyclinE2这三类细胞周期蛋白表达水平下降，从而间接发挥阻滞 细胞周期以及导致细胞凋亡作用⑼。若miRNA-34缺失则会使 p53依赖的细胞凋亡受到抑制。此类现象可较为明显的在前列 腺癌中被观察到。实验证实,在肿瘤组织里，在p53突变的同时， miRNA-34分子存在未正常表达表现，此可能为肿瘤细胞生长其 中一项机制。本实验分别测定miRNA-34b在健康、前列腺增生 与前列腺癌男性机体内的表达强度，从而使miRNA-34b同前列 腺癌之间相关性得到进一步明确。研究表明，miRNA-34b在前 列腺癌患者血清中呈现高表达，在前列腺增生增生及健康男性 血清中呈现低表达，差异具有统计学意义。所以miRNA-34b可 以用于前列腺癌的早期诊断。彩超引导下穿刺活检是我国前列 腺癌诊断的金标准时，随着PSA的广泛应用，前列腺癌诊断及 治疗水平不断完善，由于PSA的低特异性，miRNA-34b有相当 的应用前景，PSA联合miRNA-34b检测，可以增加前列腺癌的 穿刺活检的阳性率，避免不必要的穿刺检查。PSA联合miRNA- 34b检测有助于提高前列腺癌的检出率，促成早期发现与早期检 查前列腺癌的实现，可在极大程度上有助于此类病人治愈率与 预后水平的提升。
综上所述,miRNA-34b在前列腺癌患者血清中高表达，可以 作为前列腺癌早期诊断的肿瘤标记物之一，联合PSA检测对于 前列腺癌早期诊断具有协同作用，或许对PSA水平增高但穿刺 活检阴性的患者具有指导意义，但相关数据结果仍需进一步实 验验证。由于本实验样本量较小，需扩大样本量级多中心患者 群体进一步验证。
参考文献
[1] 李建军，刘胜前.前列腺癌的诊断和治疗进展[J].医学综 述,2013,19(20):3718-3720.
[2] 吴沛珊，倪少滨.PSA相关指标对前列腺癌诊断价值的评价及比较研究 DL现代生物医学进展,2015,15(2):291-293.
[3] Bommer,G.T,et al,p53-mediated activation of miRNA34 candidate tumor suppressor genes[J]-Curr Biol,2007,17(15):1298-307.
[4] He L,He X,Lim LP et al.A microRNA component of the p53 tumor suppressor networklj] .Nature,2007,447:1130-1134.
[5] Coleman MP,Quaresma M,Berrino F,et al.Cancer survival in five continents: a worldwide population-based study (CONCORD) [J] .Lancet Oncology,2008,9(8):730-756.
[6] 罗振国，王超，陶然，等.血清PSA、fPSA/tPSA在前列腺癌诊断中的临 床意义[)].黑龙江医药科学,2012,35(1):32-33.
[7] 郭静，徐桂英.外泌体在肿瘤诊疗中的研究进展[)].中国比较医学杂 志,2017,27(2):86-92.
[8] 郑雨潇，成功，杨海伟，等.外泌体在前列腺癌中的研究进展[J]-中华 泌尿外科杂志,2016,37(8):635-637.
[9] Raver-Shapira,N,et al. Transcriptional activation of miR-34a contributes to p53-mediated apoptosistj] .Mol cell,2007,26(5):731-43.
[10] 汪洋，艾热提•阿皮孜，孙宝演，等.MRI与TRUS联合定位穿 刺活检在PSA灰区患者前列腺癌诊断中的研究[)].中国男科学杂 志,2017,31(5): 47-49.
关注SCI论文创作发表，寻求SCI论文修改润色、SCI论文代发表等服务支撑，请锁定SCI论文网！ 文章出自SCI论文网转载请注明出处：https://www.lunwensci.com/yixuelunwen/5263.html
