摘要：文章基于对煎煮提取的桑葚粗多糖得率的分析，对粗多糖结构进行了表征，并对抗氧化活性进行了分析。结果表明，通过煎煮法提取的桑葚粗多糖得率为11.47±0.22%，且主要由甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖组成，为酸性吡喃糖，热稳定性良好，抗氧化活性优越。研究结果有望为桑葚多糖的提取和实际应用提供参考。
关键词：桑葚,多糖,煎煮,抗氧化
桑葚（Mori Fructus）为桑科桑（Morus alba L.）植物的果穗，具有补肝益肾、养血生津、滋液熄风、润肠通便的作用，被誉为“保健圣果”，在功能食品领域应用广泛[1-2]。普遍存在于植物细胞壁中的多糖，是药用植物的主要药效物质之一。药理学研究表明，桑葚多糖具有降血糖[3]、免疫调节[4]、抗氧化[5]、保肝[6-7]等多种作用，在功能食品开发领域中展现出了巨大的应用潜力。
提取是分离生物活性多糖的重要环节。水煎煮法（水提法）是从药用植物中提取有效成分的传统方法，实验设备简单，操作工艺简便，适用范围广泛。多糖的提取效率与颗粒大小、料液比值、浸泡时间、提取（煎煮）时间、提取温度、提取（煎煮）次数等因素密切相关。ZHANG等[8]研究了提取温度对桑葚多糖生物活性的影响，发现在较高温度下桑葚多糖具有较强的胆汁酸结合能力，且对α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶具有抑制能力。HUANG等[5]发现，热水提取的桑葚多糖具有降血糖功能和优异的抗氧化作用。CHEN等[9]研究表明，桑葚多糖的料液比值、提取时间、提取温度等因素对多糖得率具有显著影响，且得到的多糖组分对DPPH和羟基自由基的清除活性更强。
因此，本文拟进行桑葚粗多糖的煎煮提取，对桑葚中多糖的结构及抗氧化活性的影响展开研究，以期为桑葚多糖的提取和实际应用提供参考。
1材料与方法
1.1材料与试剂
根据T/CACM 1021.135-2018《中药材商品规格等级桑椹》，以选货等级的桑葚展开试验。桑葚产地为新疆，购自陕西仓满满供应链管理有限公司，色泽黑亮，颗粒饱满，无涩感。
石油醚、无水乙醇、三氯乙酸、三氯甲烷、苯酚、浓硫酸、咔唑、盐酸、氢氧化钠、1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（PMP）、磷酸二氢钠、铁氰化钾、1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）、2，2’-联氮-双（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）（ABTS）、过硫酸钾、三氯化铁、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、三氯乙酸均为分析纯，购自国药集团化学试剂有限公司；考马斯亮蓝G250（纯度≥90%）；甲醇、乙腈均为色谱纯，购自国药集团化学试剂有限公司；牛血清白蛋白标准品（纯度≥99%），购自北京索莱宝科技有限公司；葡萄糖、半乳糖、D-葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、鼠李糖、甘露糖、阿拉伯糖标准品均为色谱级，纯度≥99%，购自上海源叶生物有限公司。
1.2仪器与设备
GK2007CT型中药煎煮壶（不锈钢、玻璃材质），佛山帝圣斯电器有限公司；DHG-9245A型鼓风干燥箱，上海慧泰仪器有限公司；300A型高速多功能粉碎机；PWC254型精密分析天平，上海越平科学仪器有限公司；3-18R型高速冷冻离心机，湖南恒诺仪器设备有限公司；85-2A型恒温磁力搅拌器，金坛市科析仪器有限公司；UV-9100 D紫外-可见分光光度计，北京莱伯泰科仪器股份有限公司；Nicolet is50型傅立叶变换红外光谱仪，美国赛默飞世尔科技公司；SCIENTZ-25T型真空冷冻干燥机，宁波新芝冻干设备股份有限公司；DSC200F5型差示扫描量热仪，德国NETZSCH公司；1260型高效液相色谱系统，美国Anglient公司；SynergyH4型多功能酶标仪，美国BioTek仪器公司。
1.3多糖提取工艺
桑葚粗多糖（MFP-D）的水煎煮提取过程如图1所示。
在优化煎煮提取条件的基础上，将60℃烘干至恒重的桑葚粉碎并经0.426 mm（40目）过筛后，准确称取一定量的样品与去离子水以1∶30的料液比（mg/mL）混合，保鲜膜封口并在室温（25℃)下浸泡4 h后，在中药煎煮壶中保持微沸（90℃)煎煮35 min，4层纱布过滤，滤液在10 000 r/min速度下离心15 min，收集上清液，即为桑葚提取液。参照CHEN等[10]的方法，对提取液进行醇沉和除杂。具体操作如下：在缓慢搅拌状态下，向提取液中加入4倍体积的无水乙醇，使最终溶液中乙醇体积分数为80%；4℃下静置24 h后，离心（3 500 r/min，10 min）并收集底部沉淀，无水乙醇洗涤3次；沉淀物透析（分子量截止值：8 kDa）72 h除杂后冷冻干燥，即得桑葚粗多糖（MFP-D）。按公式（1）计算多糖得率。
式中：m为冻干后粗多糖的质量，单位为g；M为称取的原料质量，单位为g。
1.4多糖化学成分的测定
1.4.1多糖含量
参照DUBOIS等[11]的方法，以葡萄糖为标准品，采用苯酚-硫酸法测定多糖含量。具体操作如下：分别准确移取0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0 mL的0.1 mg/mL葡萄糖标准溶液于具塞玻璃试管中，每管补加超纯水至溶液最终体积1.0 mL，充分摇匀后，迅速向其中加入1.0 mL的5%苯酚溶液和5.0 mL浓硫酸，涡旋振荡后沸水浴30 min。冷却至室温后，用酶标仪于490 nm波长下测定其吸光度（A）。以葡萄糖标准品溶液质量浓度（mg/mL-1）为横坐标，吸光度（A）为纵坐标，绘制葡萄糖标准曲线。葡萄糖标准曲线如图2所示。
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