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摘要：目的探讨HBV（乙型肝炎病毒）感染在辅助生殖技术中对胚胎发育和妊娠结局的影响。方法回顾性分析2010年1月至2012年12月在南京市妇幼保健院生殖医学中心首次行IVF-ET(体外受精-胚胎移植)治疗的278对感染HBV患者夫妇的临床资料，患者均为输卵管因素、男方因素或不明原因导致的不孕。根据HBsAg（乙肝表面抗原）阳性情况进行分组，分为：单独男方阳性组，146个周期；单独女方阳性组，98个周期；夫妇双方阳性组，34个周期。对照组为同一时期在南京市妇幼保健院生殖医学中心首次行IVF-ET治疗的未感染HBV的不孕夫妇，350个周期。比较各组的基本临床资料、超促排卵结果、胚胎着床率和临床妊娠率是否存在统计学差异。结果单独男方阳性组、单独女方阳性组、夫妇双方阳性组和对照组的基本临床资料、超促排卵结果差异无统计学意义（P>0.05）。单独男方阳性组和单独女方阳性组的胚胎着床率和临床妊娠率与对照组相比差异无统计学意义（P>0.05）。夫妇双方阳性组的胚胎种植率、临床妊娠率与对照组相比差异有统计学意义（P<0.05）。结论只有男方或者女方一人为HBsAg阳性的夫妇行IVF-ET对胚胎发育和妊娠结局的影响不显著。夫妻双方均为HBsAg阳性行IVF-ET对胚胎发育影响不显著，但其不良妊娠结局率显著高于正常对照组。
关键词：乙型肝炎病毒；体外受精；胚胎移植；辅助生殖技术
本文引用格式：李兢.辅助生殖技术中乙型肝炎病毒感染对胚胎发育和妊娠结局的影响[J].世界最新医学信息文摘,2019,19(100):39-41.
Effects of Hepatitis B Virus Infection on Embryo Development and Outcomes in Assisted Reproduction Treatment
LI Jing
(Department of Obstetrics and Gynecology,Women’s Hospital of Nanjing Medical University(Nanjing Maternity and Child Health Care Hospital),Nanjing Jiangsu)
ABSTRACT：Objective To investigate the influence of hepatitis B virus infection on embryo development and outcomes in assisted reproduction treatment.Methods The clinical data of 278 couples with hepatitis B virus infection whichwas underwent IVF-ET treatment for the first time in the Assisted Reproductive Unit of Nanjing Maternity and Child Health Care Hospitalform January 2010 to December 2012were retrospectively analyzed.All of them were caused by fallopian tube factor or male factor or other factors.Based on the positive situation of the HBsAg，the patients were divided into male with hepatitis B virus infection group(n=146),female with hepatitis B virus infection group(n＝98),both with hepatitis B virus infection group(n=34)and control group(without hepatitis B virus infection,n＝350).The general condition of the clinical data,outcome of ovarian stimulation,implantation rate and clinical pregnancy rate were compared.Results The difference of general condition of the clinical data and the outcome of ovarian stimulation in these four groups were not statistically significant(P>0.05).There were no statistically significant differences in the implantationrate and clinical pregnancy rate among the male positive group,the female positive group and the control group(P>0.05).The difference of implantation rate and clinical pregnancy rate in group C and group D were statistically significant(P<0.05).Conclusion The hepatitis B virus infection only in the half part of the couple which was underwent IVE-ET treatment has no significant effect on embryo development and outcomes of the in vitro fertilization and embryo transfer treatment.The hepatitis B virus infection in both two of the couple has no significant effect on embryo development but the adverse pregnancy outcome rate was significantly higher than the control group.
KEY WORDS：Hepatitis B Virus;In Vitro Fertilization;Embryo Transfer;Assisted Reproduction Technique
0 引言
乙肝病毒感染是危害人类健康的全球性问题，我国是HBV感染的高发区，HBV携带率高达10%-15%[1]。动物实验证实HBV并非专一嗜肝病毒，许多肝外组织都检测到HBV DNA（脱氧核糖核酸）的存在[2]，已有报告从乙肝患者的卵子、精子及胚胎中检测出了HBV DNA[3-5]。近年来辅助生殖技术已成为治疗不孕症的有效手段，但取卵、体外受精、胚胎移植等各个环节似乎都存在乙肝病毒感染的风险[6]。
近年来，HBV对人类生育能力影响的研究取得了一定进展。HBV感染通过影响免疫作用、病毒基因整合及肝炎病毒蛋白的表达影响精子和卵子的功能，最终降低人类的生育能力[7-9]。但HBV携带者行IVF-ET是否影响卵子质量、胚胎发育和妊娠结局，目前还无确切结论。本研究对行IVF-ET治疗且合并HBV感染的不孕病例进行回顾性分析，探讨HBV感染对IVF-ET妊娠结局的影响。
1材料与方法
1.1研究对象。对2010年1月至2012年12月在南京市妇幼保健院生殖医学中心首次行IVF-ET治疗的不孕夫妇进行筛选。入选标准：不孕原因为输卵管因素、男方原因或不明原因；所有入选者抗HCV（丙型肝炎病毒）、抗HIV（人类获得性免疫缺陷病毒）和TP（梅毒螺旋体）均阴性，ALT（丙氨酸氨基转移酶）和AST（天门冬氨酸氨基转移酶）均正常，无活动性肝炎的症状和体征。共有278对夫妇入选，根据HBsAg阳性情况分为：A组，单独男方HBsAg阳性组，146个周期；B组，单独女方HBsAg阳性组，98个周期；C组，夫妇双方均HBsAg阳性组，34个周期。D组为对照组，350个周期，对照组选自同一时期在南京市妇幼保健院生殖医学中心首次行IVF-ET的不孕夫妇，双方HBsAg均为阴性。
1.2控制性超促排卵方案。根据女方年龄、基础内分泌水平和窦卵泡数制定超促排卵方案。采用标准的短方案或者长方案进行控制性超促排卵。根据卵泡的反应，给予个体化剂量的促性腺激素。当最大卵泡直径达18 mm，或有两个卵泡直径≥17 mm，或有三个卵泡直径≥16 mm，当晚注射人绒毛膜促性腺激素10000 U，36 h后取卵。
1.3受精、胚胎发育和妊娠诊断。取卵后4-6 h，行IVF或ICSI（卵细胞浆内单精子注射）。18-20 h后观察受精情况，受精后第1至3天观察胚胎发育情况。选择合适的移植胚胎个数。移植后14天查血β-hCG确定妊娠情况。如未妊娠，停用黄体酮。胚胎移植后6周行超声检查确定是否宫内妊娠。
1.4观察指标。分析临床结局的主要指标为胚胎着床率和临床妊娠率。胚胎着床率为孕囊数目与移植胚胎数目的比值。超声检查发现孕囊及心管搏动为临床妊娠。收集女方年龄、基础FSH（卵泡刺激素）水平、促排卵时间、Gn（促性腺激素）的用量、HCG日E2（雌二醇）水平、获卵数、正常受精数、卵裂数、优质胚胎数和移植胚胎数等计量资料。
1.5随访。采用门诊和电话随访等方式了解妊娠结局。
1.6统计学处理。本研究数据均采用SPSS 21.0 for windows软件进行统计学处理，四组患者的基础FSH值、Gn注射时间等计量资料使用（±s）表示，继发不孕比例、输卵管因素等计数资料以n（%）表示。组间比较用单因素方差分析或者卡方检验，P<0.05为差异有统计学意义。
2结果
2.1四组患者基本临床资料/超促排卵的数据对比。单独男方阳性组（n=146）、单独女方阳性组（n=98）、夫妇双方阳性组（n=34）和对照组（n=350）的基本临床资料、超促排卵结果差异无统计学意义（P>0.05，表1-2）。
2.2单独男方、单独女方及夫妇双方阳性组与对照组妊娠结局的比较。单独男方阳性组（n=146）和单独女方阳性组
（n=98）的胚胎着床率和临床妊娠率与对照组（n=350）相比差异无统计学意义（P>0.05）。夫妇双方阳性组（n=34）的胚胎种植率、临床妊娠率与对照组（n=350）相比差异有统计学意义（P<0.05）（表3）。
3讨论
我国是乙肝病毒感染高流行区，HBV携带比例高达10%-15%[1]。持续的HBV感染可导致急、慢性肝炎、肝硬化，甚至肝癌等。对肝癌患者的活检中发现，HBV DNA整合入精子、卵子和胚胎中，可能使后代患肿瘤的几率大于正常人群[10]。近年来许多研究发现HBV感染者的精子、精液、卵巢、卵泡液中均有HBV的存在，提示HBV可感染人的生殖细胞[3-5]。HBV感染导致精子染色体不稳定和结构改变，可能将降低生育能力[11]。
3.1HBV感染对男性生殖的影响。HBV感染可能是影响精液质量的重要因素之一，有研究比较HBV感染者和未感染者精子染色体异常发生率，发现感染者精子染色体异常发生率高于正常对照组[11]。Moretti等[8]的研究结果显示HBV感染者精子活力下降，凋亡率和死亡率增加。与常规IVF不同，ICSI是将精子通过显微注射的方法注入卵细胞浆内，理论上HBV可能通过注射口进入胚胎，推测ICSI的HBV感染风险可能比IVF高。
对于男方HBV感染对IVF结局的影响，目前尚无定论。郑中等[12]研究表明无论采用IVF或ICSI方式授精，男性HBV感染对妊娠结局均无不良影响。男方HBV阳性者行IVF-ET不影响妊娠结局，可能有以下几个原因：首先，乙肝病毒并不感染患者的所有精子或卵子[13]，精子洗涤和胚胎培养环境有助于降低病毒含量；其次，配子和胚胎可能存在自我修复机制；另外，HBV DNA只能整合于部分胚胎中，胚胎移植前，选取发育较好的胚胎进行移植，从而减少了被HBV DNA整合的胚胎植入宫腔的可能。
3.2HBV感染对女性生殖的影响。长期以来，学术界一直认为卵细胞有保护性屏障，外源基因难以穿透。直到1992年，研究发现外源基因可以穿过卵细胞透明带和卵细胞膜进入卵细胞中。Ye等[3]通过免疫组化和原位杂交技术，在卵巢间质细胞、颗粒细胞和卵母细胞中检测到HBsAg，认为HBV可感染不同阶段的卵子，并在其中复制、增殖。
许多研究证实了HBV DNA可以整合到卵子的基因组中，那么这种整合是否会影响正常受精和胚胎发育，进而影响IVF-ET结局呢。王巍等[14]研究表明，女性HBV感染者行IVF-ET对妊娠结局没有影响。本研究与王巍等的结论一致，推测女性HBV携带者行IVF-ET可能不影响胚胎发育和妊娠结局。主要的原因可能也是由于胚胎的自我修复机制及优质胚胎的选择性移植等因素的存在。
尽管本研究结果中，单独男方或女方HBV感染不影响胚胎发育和妊娠结局，但夫妇双方均为HBV感染对临床妊娠结局起到明显影响。本研究为回顾性分析，其中的机制还有待于大样本多中心的前瞻性研究来进一步证实。
参考文献
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