IL-21对乙肝肝硬化患者T淋巴细胞亚群及NK细胞的影响论文

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摘要：目的观察乙肝肝硬化患者血清IL-21水平，研究IL-21在体外对T淋巴细胞亚群及NK细胞的影响。方法纳入乙肝肝硬化患者60例，其中代偿期组30例，失代偿期组30例，同时以30例健康人为对照组，采用ELISA法检测血清IL-21水平；采用流式细胞术检测T淋巴细胞亚群及NK细胞的含量，分离出的外周血单个核细胞与IL-21共培养后，再检测上述指标。结果与健康对照组相比，乙肝肝硬化患者代偿期组和失代偿期组血清IL-21水平均明显升高（P<0.05）；与健康对照组比较，乙肝肝硬化失代偿期患者外周血中CD4+T淋巴细胞和NK细胞的含量均明显下降，而CD8+T淋巴细胞的含量则上升（P<0.05）；加入IL-21体外培养后可使乙肝肝硬化患者代偿期组和失代偿期组的CD8+T淋巴细胞含量升高（P<0.05）。结论IL-21在特异性和非特异性免疫中发挥重要作用，提示IL-21可应用于乙肝肝硬化患者的免疫治疗。

关键词：IL-21；乙肝肝硬化；T淋巴细胞；NK细胞

本文引用格式：李媛,龙富立,张衎,等.IL-21对乙肝肝硬化患者T淋巴细胞亚群及NK细胞的影响[J].世界最新医学信息文摘,2019,19(61):41-42.

Effect of IL-21 on T lymphocyte Subsets and NK Cells in HBV Cirrhotic Patients

LI Yuan1,2,LONG Fu-li1,ZHANG Kan1,MO Chun-mei1,GUAN Zhi-jie1,QIU Hua1,HUANG Gu-ye1,MAO De-wen1*

(1.The First Affiliated Hospital,Guangxi Traditional Chinese Medical University,Nanning Guangxi;2.Guangxi Key Laboratory of Translational Medicine for Treating High-Incidence Infectious Diseases with Integrative Medicine,Nanning Guangxi)

ABSTRACT:Objective To observe the serum IL-21 level in HBV cirrhotic patients and to study the effect of IL-21 on T lymphocyte subsets and NK cells in vitro.Methods In 60 HBV cirrhotic patients,the compensatory period group of 30 cases,decompensation period group of 30 cases,with 30 cases of healthy people as control group.The serum IL-21 level was detected by ELISA method.Flow cytometry was used to detect the content of T lymphocyte subsets and NK cells,and the isolated peripheral blood mononuclear cells were co-cultured with IL-21 to detect the above indicators.Results Compared with the healthy control group,serum IL-21 levels were significantly increased in both the compensatory and decompensated groups(P<0.05).Compared with the healthy control group,the contents of CD4+T lymphocytes and NK cells in peripheral blood of patients with decompensated hepatitis B cirrhosis were significantly decreased,while the contents of CD8+T lymphocytes were increased(P<0.05).The addition of IL-21 in vitro culture can increase the content of CD8+T lymphocytes in the compensatory group and decompensated group of hepatitis B cirrhosis patients(P<0.05).Conclusion IL-21 plays an important role in specific and non-specific immunity,suggesting that IL-21 can be used in the immunotherapy of HBV cirrhotic patients.

KEY WORDS:IL-21;HBV cirrhosis;T lymphocytes;NK cells

0引言

乙肝肝硬化是各种慢性肝病发展的晚期阶段，死亡率高，严重影响患者的生命健康。乙肝肝硬化患者多存在免疫功能紊乱或免疫功能低下，外周血T细胞以及NK细胞是反映宿主特异性和非特异性细胞免疫状态的重要指标。T淋巴细胞是介导细胞免疫应答的主要免疫细胞，CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞是具有不同功能的T淋巴细胞亚型，前者主要起辅助T细胞作用，后者具有杀伤T细胞效应[1]。NK细胞是机体重要的执行非适应性免疫反应的免疫细胞，它介导天然免疫应答，不依赖抗体和补体，能直接杀伤靶细胞，如肿瘤细胞或受病毒感染的细胞等，同时也具有抗感染、免疫调节和免疫监视作用[2,3]。在机体的细胞免疫中，作为效应细胞的T细胞和NK细胞发挥着重要作用，而IL-21在T细胞和NK细胞的活化和增殖过程中有重要作用。在本研究中，我们检测乙肝肝硬化患者外周血血清中IL-21的表达水平，并观察IL-21对乙肝肝硬化患者T淋巴细胞亚群和NK细胞的影响。

1资料与方法

1.1研究对象

2017年7月至2018年7月在我院住院的乙肝肝硬化患者60例，所有病例诊断均符合中华医学会肝病分会、中华医学会感染病学分会2015年发布的《慢性乙型肝炎防治指南》乙肝肝硬化诊断标准[4]，将乙肝肝硬化患者根据有无主要并发症分为代偿期和失代偿期两组。另选30例HBsAb阳性的健康成年人作为健康对照。排除标准：合并HIV感染或其他病毒性肝炎、酒精性肝病、自身免疫性疾病、寄生虫感染、肝癌及其他系统严重疾病。本研究方案经由广西中医药大学第一附属医院伦理委员会审批，所纳入患者均签署知情同意书。

1.2血清IL-21的检测

采用双抗体夹心ELISA(eBioscience，San Jose，CA，USA)方法检测受试者血清IL-21水平。操作按照试剂盒说明书进行，取受试者血清及标准液各50L加入酶标板，37℃孵育30 min，每孔加酶标抗体50L，37℃孵育30 min。洗涤5次加底物显色；终止反应后，采用酶标仪(FACSCalibur，BD，USA)测定OD值。

1.3T淋巴细胞亚群和NK细胞含量的检测

将肝素钠抗凝外周血分离出外周血单个核细胞（PBMC），取一部分PBMC加入Percp-cy5.5标记的抗人CD3抗体、PE标记的抗人CD4抗体、APC标记的抗人CD8抗体及FITC标记的抗人CD56抗体，室温避光孵育30min后PBS洗涤2次，流式细胞仪检测T细胞和NK细胞的含量。以上流式抗体均购自美国BD公司。

1.4IL-21对T淋巴细胞亚群和NK细胞含量的影响

取一部分PBMC与IL-21共培养48h，再按上述方法检测T淋巴细胞亚群和NK细胞的含量。以上流式抗体均购自美国BD公司。

1.5统计学方法

采用SPSS 17.0统计软件进行数据分析，患者的临床资料中计量资料以均数±标准差表示，进行正态性检验和方差齐性检验，若符合正态性、方差齐性检验的数据，多组间比较采用方差分析，组内比较采用配对t检验；若不符合正态性、方差齐性检验的数据可采用非参数秩和检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1研究对象基本临床资料（见表1）。



2.2乙肝肝硬化患者血清IL-21水平

乙肝肝硬化患者代偿期组、失代偿期组与健康对照组比较，血清IL-21水平均明显升高，差异有统计学意义（P<0.01），见表2。




2.3乙肝肝硬化患者T淋巴细胞亚群和NK细胞的含量

乙肝肝硬化失代偿期患者外周血中CD4+T淋巴细胞和NK细胞的含量均明显下降，而CD8+T淋巴细胞的含量则上升，与健康对照组比较，差异有统计学意义（P<0.01），见表3；乙肝肝硬化代偿期患者外周血中T淋巴细胞亚群和NK细胞变化不明显，见表3。

2.4IL-21对T淋巴细胞亚群和NK细胞含量的影响

乙肝肝硬化患者代偿期组和失代偿期组外周血与IL-21共培养后，CD8+T淋巴细胞的含量升高，与未加IL-21时比较，差异有统计学意义（P<0.01），见表4。

3讨论

人体的免疫细胞在机体的免疫监视、免疫识别和免疫清除中发挥重要的作用，尤其在外来抗原感染机体后作用尤为突出[5]。HBV感染机体造成的乙肝肝硬化是目前主要感染性疾病之一，机体从感染HBV到乙肝肝硬化的形成中，免疫细胞对HBV进行免疫识别和免疫清除。

IL-21可以通过活化肝星状细胞影响乙肝肝硬化，因此中和IL-21可能是治疗肝硬化的有效措施[6]。有研究发现，慢性HBV感染者IL-21表达水平是上调的[7]，无论是病毒携带状态还是炎症活动状态，也无论是HBeAg阳性还是阴性状态，都显示相对于健康对照组有较高的血清IL-21水平[8]。本研究发现乙肝肝硬化患者外周血血清IL-21水平明显增高，与最近的报道一致[9]，并且该报道还在体外实验中证实IL-21可以促进HSC的激活、增加α-SMA的表达，抑制LX-2细胞的凋亡和上调胶原蛋白的产生。由此，提示IL-21表达上调可能是机体应对慢性感染和控制HBV过度复制的表现。

乙肝肝硬化失代偿期患者外周血中CD4+T淋巴细胞和NK细胞的含量均较健康对照组明显下降，而CD8+T淋巴细胞的含量则上升，提示乙肝肝硬化失代偿期患者存在机体免疫功能紊乱，主要表现为外周血中执行特异性和非特异性免疫功能的免疫细胞含量下降，这与前期的报道一致[10,11]。其原因可能是在乙肝肝硬化从炎性反应逐渐形成和演变至硬化的过程中，T淋巴亚群细胞和NK细胞对HBV的不断免疫清除，而具有抑制作用的T淋巴细胞又在一定程度上限制CD8+T淋巴细胞和NK细胞的免疫杀伤功能，使得HBV持续存在，免疫细胞逐渐破坏、耗竭。而CD8+T淋巴细胞的含量则有所上升，可能与HBV的存在激活杀伤性CD8+T淋巴细胞有关。然而，乙肝肝硬化代偿期患者外周血中T淋巴细胞亚群和NK细胞变化不明显，可能由于乙肝肝硬化代偿期患者病情及肝脏的炎性反应程度相对较轻，HBV的高复制使得T淋巴细胞免疫反应处于激活状态。

乙肝肝硬化患者代偿期组和失代偿期组外周血与IL-21共培养后，与未加IL-21时比较CD8+T淋巴细胞的含量升高，Li等[12]研究发现重组人IL-21体外可以扩增HBcAg特异性IFN-γ+CD8+T淋巴细胞的增殖，提示IL-21的表达上调是机体应对病毒感染的重要应答反应，可通过细胞免疫效应CD8+T淋巴细胞控制HBV复制。

综上所述，乙肝肝硬化患者外周血中T淋巴细胞亚群和NK细胞均发生明显的变化，随着肝硬化的加重，患者的免疫状况逐渐下降，这对于判断乙肝肝硬化的病情、免疫功能及预后非常重要。而IL-21广泛参与机体的免疫应答，在特异性和非特异性免疫中发挥重要作用，因此，IL-21可能成为治疗肝硬化的一个新靶点。

参考文献

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