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摘要：目的探讨儿童难治性癫痫（refractory epilepsy,re）血清中谷氨酸脱羧酶抗体（Glutamic acid decarboxylase antibody,Gada）及神经节苷脂抗体（antibodies to GM1 Ganglioside,GM1-a）免疫学发病机制与上述两种血清抗体的相关性。方法用elisa检测re组及ce组患儿的血清Gada和GM1-a的数值，并用roc曲线分析两种抗体对re的诊断性能。结果re组患儿血清Gada及GM1-a浓度水平明显高于ce组；两种抗体均对re具有一定的诊断意义，且联合两种抗体对re的诊断价值大于任意单独一种抗体对re的诊断价值。结论儿童re多伴有自身免疫功能紊乱，血清中可检测到与癫痫难以控制有关的Gada及GM1-a抗体；Gada及GM1-a与re发生有关；且联合检测Gada及GM1-a血清滴度水平对于儿童re诊断、治疗及预后判断具有指导作用。
关键词：儿童；难治性癫痫；谷氨酸脱羧酶抗体；神经节苷脂抗体
本文引用格式：郭爱芳,董琰.难治性癫痫患儿血清中的GADA及GM1-A表达及临床意义[J].世界最新医学信息文摘,2019,19(83):5-6.
The Expression and Significance of GADA and GM1-A in Serum of Children with Refractory Epilepsy
GUo ai-fang1,donG Yan2*
(1.Weixian People's Hospital,Handan,Hebei,China;2.Tangshan Maternal and Child Health Hospital,Tangshan,Hebei,China)
ABSTRACT:Objective to investigate the correlation between the immunopathogenesis of serum glutamate decarboxylase antibody and ganglioside antibody in children with refractory epilepsy and the above two autoantibodies.Methods the values of serum Gada and GM1-a in re and ce groups were detected by elisa,and the diagnostic performance of the two antibodies for re was analyzed by roc curve.Results The serum levels of GADA and GM1-A in RE group were significantly higher than those in CE group.Both antibodies had certain diagnostic value for re,and the diagnostic value of combining two antibodies for re was greater than that of any single antibody.Conclusion children with re are often accompanied by autoimmune dysfunction.Gada and GM1-a antibodies can be detected in serum.Gada and GM1-a are related to the occurrence of re.combined detection of serum titers of Gada and GM1-a can guide the diagnosis,treatment and prognosis of children with re.
KEY WORDS:children;refractory epilepsy;Glutamate decarboxylase antibody;Ganglioside antibody
0引言
癫痫是一种常见的慢性神经系统疾病，约60%的患者于儿童期起病。儿童期新诊断的癫痫患儿，大部分单药控制良好[1]。但仍有近20%的癫痫患儿，不管是单药分别使用还是联合用药，仍有癫痫发作，成为难治性癫痫[2]。难治性癫痫的发病机制一直是临床研究的难点，其中难治性癫痫的免疫学发病机制作为一个可治性的病因，更有其研究价值。因此本研究把难治性癫痫患儿作为病例组，药物可控性癫痫作为对照组进行研究，通过分析血清GADA及GM1-A两种抗体与难治性癫痫发生的相关性，为临床诊断及治疗儿童RE提供科学依据。
1研究对象与方法
1.1研究对象
根据纳入排除标准筛选出206例癫痫患儿，其中难治性癫痫患儿45例，药物可控性癫痫患儿161例。把45例难治性癫痫患儿作为病例组（RE组），随机选取45例药物可控性癫痫患儿作为对照组（CE组）进行研究分析。
1.2方法
记录所有入组患儿的年龄、性别、发病年龄、发病病程、出生史、癫痫家族病史、既往史、首次癫痫发作形式、发作频率、发作类型等。采集每个患儿的晨起空腹血，离心血清。每个患儿的血清分两份收集，用ELISA方法检测GADA及GM1-A数值。
1.3统计学分析
采用SPSS 17.0统计学软件进行数据分析，计量资料用均数±标准差（±s）表达，采用t检验，计数资料用率（%）表达，采用2检验；计量资料不符合正态分布的采用非参数秩和检验。用ROC曲线分析GADA、GM1-A对RE的诊断性能，P<0.05差异具有统计学意义。
2结果
2.1GADA及GM1-A在RE组和CE组患儿体内的表达水平比较
依据抗体计算方法计算出RE组和CE组GADA的中位数浓度分别为2.2 nmoL/L和0.58 nmol/L；GM1-A中位数浓度分别为12.80 ng/mL、0.65 ng/mL。结果显示RE组的GADA及GM1-A浓度值水平显著高于CE组，差异具有统计学意义（P<0.05），详见表1、2。说明GADA及GM1-A在RE组中表达水平较CE组明显升高。
2.2利用ROC曲线分析GADA及GM1-A的临床应用及意义
2.2.1Gada及GM1-a的roc曲线
绘制这两种抗体的ROC曲线（见图1）。其ROC曲线下面积AUC分别为GADA 0.847（95%CI 0.767-0.928）、GM1-A 0.759（95%CI 0.660-0.857），详见表3。并与面积0.5进行比较，差异具有统计学意义（P<0.05），表明两种抗体对RE具有一定的诊断意义。
由ROC曲线分析计算GADA及GM1-A的最佳截点浓度值。GADA的最大敏感度和特异度分别为80%和80%，约登指数为0.6 0，对应的最佳截点浓度值为0.96 mmoL/L（图1 a点）。G M 1-A的最大灵敏度和特异度分别为73.3%和71.1%，约登指数为0.444，对应的最佳截点浓度值为4.36 ng/mL（图1b点），详见表4。可见GADA的灵敏度及特异度均较GM1-A的高。
根据两种抗体的最佳截点浓度值，计算两种抗体在RE组及CE组的阳性率。其中GADA在RE组中的阳性率是77.8%，CE组的阳性率是17.8%；GM1-A在RE组的阳性率是73.3%，CE组的阳性率是26.7%，见表5。
2.2.2Gada及GM1-a两抗体联合的roc曲线
两抗体联合ROC曲线的AUCROC为0.878（95%CI 0.809~0.946），灵敏度为91.1%，特异度为73.3%，约登指数为0.644。对联合两种抗体的ROC曲线下面积与参考曲线下面积的0.5进行对比，比较结果发现差异具有统计学意义（P<0.05），说明两种抗体联合对RE的诊断有效，并且联合两种抗体对RE的总体诊断性能优于任意单个抗体对RE的诊断性能，详见图2。
3讨论
GAD是人体内γ-氨基丁酸（Gamma Aminobutyric Acid,GABA）合成的重要限速酶。在神经系统内约有40%
的突触是GABA能突触，是脑内重要的抑制性神经递质，抑制性神经递质水平的变化在癫痫的发病机制中有重要的作用[3]。因此当体内出现GADA抑制了GAD的活性，影响中枢抑制神经递质的生成，就会引发癫痫或癫痫发作且难以控制。近年来，研究报道显示癫痫病人体内有多种自身抗体，因此癫痫发病的免疫因素受到广泛关注，尤其是与难治性癫痫的关系报道逐渐增多。Errichiello L等[4]报道的233例癫痫病人中有2.58%的GADA血清阳性率，其中4人GADA血清抗体滴度明显升高，癫痫发作难以控制。国内也有研究证明在成人难治性癫痫病人中，GADA血清滴度较可控性癫痫及正常人明显升高[5]。提示了GADA的血清抗体水平增高与难治性癫痫有密切的关系。本研究结果也发现RE组的GADA阳性率明显高于CE组，抗体中位数浓度明显高于CE组，与国内外研究结果基本一致。
正常生理情况下，GM1通过调节钙离子流、减少活性氧的产生、激活酪氨酸酶受体及促进Na+、K+-ATP酶的活性等作用调节正常的神经细胞活动，维持神经细胞的功能。但当各种因素使GM1抗原物质暴露，激活免疫系统，使体内淋巴系统产生拮抗神经节苷脂的自身抗体，并在补体的参与下激活机体免疫系统导致神经细胞的损伤[6]。 Bartolomei F 等[7]发现在隐源性部分发作的癫痫病人体内有较高的GM1-A滴度，并发现产生GM1-A的癫痫患者对大部分抗癫痫药耐药，而对免疫球蛋白治疗是有效的。国内刘建光等[8]在对成人癫痫体内的GM1-A研究时发现，难治性癫痫患者的Anti-GM1-IgM水平较药物可控性癫痫明显升高，推测GM1-A与RE的发病机制有关。本研究结果中，RE组的GM1-A抗体中位数水平较CE组明显升高，与国内外研究结果一致，说明GM1-A与难治性癫痫的发病机制相关。
对GADA及GM1-A进行ROC曲线分析时发现，两种抗体的曲线下面积AUCROC分别为0.759、0.847，并与曲线下面积0.5进行比较，差异具有统计学意义（P<0.05），说明GADA及GM1-A对难治性癫痫有一定的诊断意义。同时根据ROC曲线，发现RE组的患儿血清GM1-A、GADA的阳性率分别为73.3%、77.8%。做两种抗体联合ROC曲线，发现联合两种抗体的AUCROC为0.878，分别大于GADA及GM1-A的AUCROC，说明两种抗体联合提高了对难治性癫痫的诊断性能，为临床早期识别、诊断及治疗儿童难治性癫痫提供参考。
参考文献
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[3]Chowdhury FA,O'Gorman RL,Nashef L,et al.Investigation of glutamine and GABA levels in patients with idiopathic generalized epilepsy using MEGAPRESS[J].Journal of Magnetic Resonance Imaging Jmri,2015,41(3):694-699.
[4]Errichiello L,Perruolo G,Pascarella A,et al.Autoantibodies to glutamic acid decarboxylase(GAD)in focal and generalized epilepsy:A study on 233 patients[J].Neuroimmunology,2009,211(1):120-123.
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[6]郝红林,李晓光,郭玉璞.抗神经节苷脂抗体与免疫介导的神经疾病[J].中国临床康复,2006,10(26):142-144.
[7]Bartolomei F,Boucraut J,BarriéM,et al.Cryptogenic Partial Epilepsy with Antibdies:A New Form of Immune-Mediated Epilepsy[J].Epilepsia,1996,37(10):922-926.
[8]刘建光,李毅,阎建平.不同发作类型癫痫患者血清神经节苷脂GM1抗体和谷氨酸脱羧酶抗体的比较[J].神经损伤与功能重建,2009,4(3):179-180.
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