灯芪通脉颗粒高效液相色谱法指纹图谱研究论文

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　　摘要 目的：建立灯芪通脉颗粒的指纹图谱 法，指认共有成分并评价质量 。 方 法：使 用 DiamonsilC18 色谱柱(4.6mm×250mm,5 μm),流动相为水(含 0.1%磷酸)-乙腈，梯度 洗脱，检测波长为 230nm 。 对 10批灯芪通脉颗粒指纹图谱分析，并建立共有模 式计算样 品 间 的相似度 。 结果：样品具有较 高 的 相似性 。 结论：本方法可用于评价灯芪通脉颗粒质量。

　　灯芪通脉颗粒是一种常用且有效的中药制剂，由 灯盏细辛、黄芪、枳壳、厚朴、桂枝、黄连、炙甘草、半夏 等 14味药材组方而成 。 系知名 中医药专家杨巨奎先 生运用经典名方生脉散、枳实薤 白桂枝汤、小 陷胸汤 等加减化裁而成，用于预防治疗气 阴两虚、胸 阳不振、 瘀血阻络所致胸痹 的长 期(五年 以 上)临床 经验方。 汤慧敏[1-3] 等发现 由灯芪通脉颗粒组方 内 的君药灯 盏细辛制备而成的口服液，是一种经临床验证具有良 好疗效和安全性的治疗胸痹(冠心病、心绞痛)的有效 药物 。 陈娟红[4] 等人在西药治疗 的基础上辅以黄芪 制剂治疗，常雨[5] 采用黄芪注射液联合丹参注射液治 疗心绞痛，均证明灯芪通脉颗粒组方 内的君药黄芪对 心绞痛等心血管疾病具有显著 的疗效 。 黄娟[6] 等采 用瓜蒌薤白半夏汤治疗胸痹心痛，证明灯芪通脉颗粒组方内的瓜蒌、薤白对胸痹具有良好的疗效和安全性。

　　然而，由于灯芪通脉颗粒的制备过程复杂，所用 中药材的产地、生长环境、采集季节等 因素 的差异，导 致不同批次产品的质量可能存在差异 。 因此，建立一 种可靠的灯芪通脉颗粒指纹 图谱分析方法是十分必 要的，以确保其质量的一致性和有效性。

　　目前，与灯芪通脉颗粒组方类似 的 中药制剂多采 用高效液相色谱法 ( HPLC)、超 高 效 液 相 色 谱 法 (UPLC) 进行指纹图谱 的研 究[7-11] 。 本 论 文拟采 用 高效液相色谱技术，建立灯芪通脉颗粒的指纹 图谱， 并探索其质量评价和质量控制的应用。
 

　　1 仪器与试药

　　1.1 仪器

　　赛默飞 U-3000高效液相色谱仪，ThremoFisher科技公 司;AUW120D 电子分析 天平，岛津 公 司;AS 系列超声波清洗机，天津奥特赛恩斯有限公司。

　　1.2 试药

　　甲醇(色谱纯，批号：20220801408 , 天津市致远化 学试剂有 限 公 司);乙腈(色谱纯，批 号：20220927 , 天 津市永大化学试剂有 限公 司);怡宝[纯净水，华润怡 宝饮料(中国)有限公司]。

      10批 灯 芪 通 脉 颗 粒( 批 号 分 别 为 20210709-1 、 20210709-2 、20210709-3 、20210710-1 、20210710-2 、 20210710-3 、20210711-1 、20210711-2 、20210711-3 、 20210711-4),由山西黄河中医药研究所提供。

　　对照品：野黄芩苷(批 号为 110842-202010 , 购 买 于中国食 品 药 品检 定研 究 院);五 味子 醇 甲(批 号 为 110857-200709 , 中 国食 品药 品检 定研 究 院购得);新 橙皮苷(批号为 11857-201804 , 中 国食 品药 品检定研 究院购得);柚皮苷(批号为 110722-201815 , 中 国食 品 药 品 检 定 研 究 院 购 得 ); 毛 蕊 异 黄 酮( 批 号 为 A03GB156838 , 上海源叶生物科技有限公司购得);和 厚朴酚(批号为 110730-201915 , 中国食品药 品检定研 究院购得);甘草酸铵(批号为 110731-200408 , 中 国药 品生物 制 品 检 定 所 购 得);芍 药 苷( 批 号 为 110736- 202145 , 中国食品药品检定研究院购得)。
 

　　2 方法

　　2.1 色谱条件

　　迪马 DiamonsilC18柱(250×4. 6mm5μm); 以 乙腈为流动相 A , 以水(含 0.1%磷酸)为流动相 B , 按 表 1中的规定进行梯度洗脱;流速为 1.0mL/min ; 柱 温为 30℃ ; 检测波长 230nm;进样量 20uL 。

　　2.2 供试品溶液的制备

　　取灯芪通脉颗粒 约 1. 0g , 研细，精密称 定，置 于 具塞的锥形瓶 中，精密移入 80%甲醇溶液 12. 5mL , 称定重量，超声 30min , 取 出放冷，再次称定重量，用 80%甲 醇 溶 液 补 足 因超 声 减 失 的 重 量，摇 匀，经 0. 45μm的有机滤膜过滤，取续滤液即得。

　　2.3 对照品溶液的制备

　　分别取芍药苷、野黄芩苷、柚皮苷、新橙皮苷、毛蕊异黄酮、甘草酸铵、五味子醇 甲、和厚朴酚对照 品适 量，精密称定，分别加 70%甲醇制成适合浓度的对照 品储备溶液，取各储备液适量制备成浓度约分别为芍 药 苷 0. 01mg/mL、野 黄 芩 苷 1. 8mg/mL、柚 皮 苷 1mg/mL、新 橙 皮 苷 1mg/mL、毛 蕊 异 黄 酮 0. 5mg/ mL、甘草酸 铵 2mg/mL( 甘 草 酸 重 量=甘 草 酸 铵 重 量/1.0207)、五味子醇甲 2mg/mL、和厚朴酚 0.5mg/ mL的混合对照品溶液，即得。

　　2.4 精密度试验

　　取 20210709-1批样品，制备供试 品溶液 1份，连 续进行 6次进样，按照“ 2.1 ”项下 的色谱条件进行液 相色谱测定 。每次进样取 20μL样 品溶液，记录对应 的色谱图 。选取峰形良好、出峰位置居 中、分离度高、 峰面积大的 14号峰新橙皮苷作为参 照 峰，计算各主 要色谱峰相对峰面积和相对保留时间的 RSD值，均 不大于 4.56% , 符合特征 图谱 的要求，表 明仪器具有 良好的精密度。

　　2.5 稳定性试验

　　取 20210709-1批样品，首先制备一份供试品溶液， 并按照“2.1”项下的色谱条件进行测定。供试品溶液在 0 、2.5 、5 、7.5 、10、12.5h时分别进样，记录各自的色谱图。 以 14号峰新橙皮苷为参比峰，计算各个共有峰的相对保 留时间和相对峰面积及其 RSD值，均不大于 4.75% , 说 明在 12.5h内供试品溶液保持稳定。

　　2.6 重复性试验

 

　　取 20210709-1批供试品，制备供试品溶液 6份，按 “ 2.1 ”项下色谱条件测定，每份供试品溶液进样 1次， 精密吸取 20μL注入液相色谱仪，记录色谱 图。 以 14 号峰新橙皮苷为参 比峰，计算各共有峰相对保 留 时 间 和相对峰面积。 实验结果表 明，各主要色谱峰 的相对 保留时间和相对峰面积 的 RSD值，均不大于 4.97% , 符合特征图谱技术要求，表明本实验重复性较好。

　　3 指纹图谱的建立

　　3.1 参照色谱峰的建立

　　为了使整个比较系统具有一致 的尺度范 围，因此 设立一个参照峰 。 与 图 1混合对照品溶液色谱图比 较，在图 2灯芪通脉颗粒供试 品溶液色谱 图 中 10号 峰为芍药苷，12号 峰为野黄芩苷，14号 峰为柚皮苷， 15号峰为新橙皮苷，18号 峰为毛蕊异黄酮，20号 峰 为甘草酸，21 号 峰 为 五 味 子 醇 甲，22号 峰 为 和 厚 朴 酚 。根据特征图谱 中参照峰(S) 的选择要求，选择 峰 形对称、出峰位置居 中、分离度高、峰面积大 的 14号 峰新橙皮苷峰作为参照峰(S)。

　　3.2 共有指纹峰的标定

　　根据供试 品溶液 的制备方法和检测方法，对 10 批灯芪通脉颗粒建立指纹图谱，结 果 见 图 3 。 根 据 《中药色谱指纹图谱相似度评价软件》(2012版)，对 10批灯芪通脉颗粒 的 HPLC指纹谱图进行了分析。 同时采用中位数法生成 10批样品的对照指纹 图谱， 采用 DAD检测器对各成分的光谱纯度进行分析，选 取匹配因子 >950 、分 离度 良 好、峰面积较大的色谱 峰，共得到了 22个共有 峰，以 14号色谱 峰新橙皮苷 作为参照峰 。通过计算各个共有 峰 的相对保 留 时 间 和相对峰面积，得到了相应的结果，详见表 2 。

　　3.3 相似度评价

　　使用国家药典委员会发布的 2012版的“ 中药色谱指 纹图谱相似度评价软件”，对 10批灯芪通脉颗粒进行了 相似度评价。10批灯芪通脉颗粒相似度均大于 0.900 , 说明 10批样品相似性较好。评价结果见表 3 。

　　3.4 特征峰的选择

　　选择特征图谱中各批次样品共有的、峰形良好、分 离度符合要求的 10号峰、12号峰、14号峰、15号峰、18 号峰、20号峰、21号峰、22号峰为灯芪通脉颗粒的特征 峰。采用混合对照品溶液进行鉴定，确认 10号峰、12号 峰、14号峰、15号峰、18号峰、20号峰、21号峰、22号峰 分别为芍药苷、野黄芩苷、柚皮苷、新橙皮苷、毛蕊异黄 酮、甘草酸、五味子醇甲、和厚朴酚，其与 14号峰(S峰) 的相对保留时间分别为为 0.4789 、0.8831 、1.000、1.1108、 1.3496 、1.5273 、1.6327 、1.7280 。

　　故灯芪通脉颗粒供试 品特征 图谱应有 8个特征 峰，分别为芍药苷、野黄芩苷、柚皮苷、新橙皮苷、毛蕊 异黄酮、甘草酸、五 味子醇 甲、和厚朴酚，分别与相应 的参照物峰保留时间相同。

　　4 讨论

　　在选择 HPLC方法时，我们参考了已有的相关文献 和研究经验，并进行了多次试验和优化，最终确定了适合 灯芪通脉颗粒指纹图谱研究的色谱条件。我们经过对比 甲醇-水系统、乙腈-水系统、乙腈-磷酸水等系统，结果表 明在乙腈-磷酸水系统下，色谱峰的分离度和峰形均较 好。在前期分析过程 中选择 了 230nm、254nm、280nm 和 365nm四个波长监测样品中的化学成分，结果表明在 230nm下，各峰的响应值较高，基线也较为平稳，故选择 以 230nm作为检测波长。

　　本论文旨在通过建立灯芪通脉颗粒的指纹图谱，评 估其质量一致性，并为其质量控制提供科学依据。通过 实验研究和数据分析，我们成功建立了基于高效液相色 谱法的灯芪通脉颗粒指纹图谱。通过对多批次样品的分 析，我们确定了关键有效成分。其次，基于建立的指纹图 谱，我们评估了不同批次样品的质量一致性。通过相似 度计算，我们发现不同批次样品之间具有较高的相似性。 这证明灯芪通脉颗粒的制备工艺具有一定的稳定性和一 致性，并说明质量控制措施的有效性。

　　参考文献

       [1] 汤慧敏，龚俊豪，习元堂，等．灯盏细辛注射液与丹 参注射液治疗不稳定型心绞痛 临床疗效 间接 比较 的 Meta分析[J] . 世界科 学技术－中 医 药现代化， 2021 , 23(03):795-806 .
       [2] 谢安然，韦玮，郝二伟，等．灯盏细辛及其制剂联合 用药 的 研 究 进 展 [J] .  华 西 药 学 杂 志，2022 ,  37 (03):345-348 .
       [3] 叶伟锋，苏观湛，张丹凤．灯盏细辛注射液治疗冠 心病心绞痛 患者 的 临床 疗 效分析[J] .  中 外 医 疗， 2021 , 40(09):86-88 .
       [4] 陈娟红，念君玉，肖建平．中药黄芪的药理作用及临床 应用价值[J]. 临床合理用药，2023 , 16(12):121-124.
       [5] 常雨．观察黄芪注射液联合丹参 注射液治疗冠心 病心绞痛 的 疗 效及 安 全 性 [J] .  中国现代药物应 用，2021 , 15(15):139-141 .
       [6] 黄娟，杜扬，徐翰，等．瓜蒌薤白半夏汤治疗胸痹心痛效果 及安全性系统评价[J]. 山东医药，2022 , 62(20):84-87.
       [7] 刘光丽，徐 文龙，王 张. HPLC法 同 时 测 定灯盏 细 辛注射液中 10种成分[J] . 中成 药，2017 , 39(12): 2521-2524 .
       [8] 涂栩秀，唐琼，赵映娟，等．同 时采 用一测多评 法和 外标法测 定灯盏细辛注射液中 2  类 物 质 的含量 [J] . 药物分析杂志，2021 , 41(05):798-808 .
       [9] 李资磊，唐琼，董媛，等．《中华人 民共和 国 药典》中 灯盏细辛含量 测 定 方 法 的 优化 [J] .  药 物 分析 杂 志，2020 , 40(07):1309-1318 .
       [10] 姚静，孙欣光，董蓉，等. HPLC-CAD 一 测 多评 法同 时 测 定 黄 芪 中 6  种 成 分 含 量 [J] .  药 学 学 报， 2021 , 56(02):557-564 .
        [11] 刘蓬蓬，史辑，张凡，等. UPLC同 时 测 定 4种酶 定向炮制黄芪中的 6种黄酮类成分含量[J] . 中 国 实 验方剂学杂志，2020 , 26(10):94-99 .

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