白藜芦醇对缺氧/复氧心肌细胞的内质网应激机制研究论文（附论文PDF版下载）

SCI论文（www.lunwensci.com）:

摘要：目的 探究白藜芦醇 (Res) 能否抑制心肌细胞缺氧 / 复氧 (H/R) 损伤导致的内质网应激 (ERS) 来发挥保护作用。方法 1) Western Blot 法检测 ERS 分子伴侣 GRP 78 的表达以确定最佳复氧时间。2) LDH 试剂盒检测各组细胞毒性；Western Blot 法检测各组GRP 78、GRP 94 的表达。结果 1) 与缺氧组比，复氧 2 h 组 GRP 78 表达明显增多，差异具有统计学意义。2) 与对照组比，缺氧 / 复氧组 GRP 78、GRP 94 表达显著增多，加入白藜芦醇后，明显抑制缺氧 / 复氧产生的影响，差异具有统计学意义。结论 白藜芦醇能够抑制缺氧 / 复氧导致的内质网应激，保护心肌细胞。

关键词：白藜芦醇；缺氧 / 复氧；心肌细胞

本文引用格式：贺翼飞 , 赵苗 , 韩雅茹 , 等 . 白藜芦醇对缺氧 / 复氧心肌细胞的内质网应激机制研究 [J]. 世界最新医学信息文摘 ,2018,18(76):1-2.



ABSTRACT: Objective To investigate whether resveratrol can inhibit the endoplasmic reticulum stress induced by hypoxia/ reoxygenation injury in cardiomyocytes. Methods 1) The expression of ERS chaperone GRP 78 was detected by Western Blot to determine the optimal reoxygenation time. 2) LDH kit was used to detect the cytotoxicity of each group; Western Blot was used to detect the expression of GRP 78 and GRP 94 in each group.  Results   1) Compared with the hypoxia group, the expression of GRP    78 in the reoxygenation group was significantly increased. The difference was statistically significant. 2) Compared with the control group, the expression of GRP 78 and GRP 94 in the H/R group increased significantly. After adding resveratrol, the effects of hypoxia/ reoxygenation were significantly inhibited. The difference was statistically significant. Conclusion Resveratrol can inhibit endoplasmic reticulum stress induced by hypoxia/reoxygenation and protect cardiomyocytes.
KEY WORDS: Resveratrol; Hypoxia/reoxygenation; Cardiomyocytes

0引言

冠心病是最常见的心血管疾病之一，是造成死亡的主要原因。急性心肌梗死的治疗方案是，让冠状动脉实现心肌组织的再灌注，但是，再灌注往往不能减轻缺血后的损伤，反而会加重，这就是缺血再灌注损伤 (IRI)[1-2]。如何防治再灌注损伤是临床上现在急需解决的问题，有关这方面的研究已成为现下的研究热点。缺氧 / 复氧 (H/R) 是在细胞水平上模拟的缺血再灌注损伤，有研究表明，缺氧 / 复氧能造成内质网应激(ERS)[3-4]。白藜芦醇对缺氧 / 复氧心肌细胞有保护作用[5-6]， 但白藜芦醇能否通过内质网应激机制保护缺氧 / 复氧心肌细胞尚不可知，本文就此问题进行实验研究，为心肌保护提供理论依据。

1材料与方法

1.1材料
白藜芦醇 ( 批号：038K5202，美国 Sigma 公司 )；GRP 78、 GRP 94、Tubulin 抗体 ( 美国 CST 公司 )。乳酸脱氢酶细胞毒性检测试剂盒 ( 碧云天生物技术研究所 )。

1.2方法

1.2.1实验分组
(1)确定最佳复氧时间( 最佳缺氧时间前期实验已证明[7])， H9C2 细胞随机分为：① Control 组；② H(3h) 组；③- ⑧ H(3h)/ R(1-6h) 组。Western blot 法检测 GRP 78 的表达。
(2)检测缺氧复氧对 ERS 的影响以及白藜芦醇能否抑制此过程，H9C2 细胞随机分为：① Control 组；② H/R 组；
③ Res+H/R 组；④ Res 组：终浓度为 10 mol·L-1( 前期实验已验证 [8])。

1.2.2乳酸脱氢酶细胞毒性检测
细胞培养至最佳状态，把细胞按照合适的密度种在 96 孔板里，待长到 80% 左右时，按实验分组进行处理，然后按照说明书上的操作步骤一步步进行，最后，通过检测吸光度来评估细胞毒性。

1.2.3Western Blot 检测
检测 GRP 78、GRP 94 蛋白表达水平。细胞生长至 90% 左右，按实验分组进行处理。完毕后，用 PBS 洗 2 次，每个皿里加 50L 新配的细胞裂解液，冰上裂解 30min。刮取细胞悬液，超声破碎，离心取上清 (4℃，12000r·min-1，15min)。用 BCA 测定蛋白浓度后，按照酶标仪测定结果进行蛋白分装， 分装完毕后，将蛋白煮沸上样、电泳、转膜。10% 脱脂牛奶室温封闭 90min，GRP 78、GRP 94、Tubulin 抗体(1：1000 稀释)， 4℃孵育过夜。二抗 (1：2000 稀释) 室温孵育 1h 后，ECL 显色。 Image J 软件对图像进行灰度值分析并统计。


1.3数据处理
实验数据使用 SPSS 22.0 以及 GraphPad Prism 5 软件进行统计分析，以均数 ± 标准差 ( ±s) 表示。多组均值比较采用完全随机设计的单因素方差 (one-way ANOVA) 分析、LSD 法两两比较，以 P<0.05 为差异有统计学意义。

2结果

2.1缺氧 / 复氧对内质网应激的影响
如图 1 所示，与 Control 组比，缺氧 3h 时，GRP 78 表达增多，与 H(3h) 组比，H/R 组 GRP 78 表达均增多，但程度不一，其中 H(3h)/R(2h) 组表达增多最明显，差异具有统计学意义 (P<0.05)，因此，后续实验采用 H(3h)/R(2h)。


2.2乳酸脱氢酶细胞毒性检测
如表 1 所示，与 Control 组比，H/R 组细胞毒性显著增强，而加入 Res 后，细胞毒性减弱，差异具有统计学意义(P<0.05)，说明 H/R 造成心肌细胞毒性增强，但白藜芦醇明显抑制此过程。

2.3白藜芦醇对 GRP 78、GRP 94 的影响
如图 2 所示，与 Control 组比，H/R 组 GRP 78、GRP 94 表达增多，而加入 Res 后，两者的蛋白表达均降低，差异具有统计学意义 (P< 0.05)，说明，白藜芦醇能抑制内质网应激。


3讨论

急性心肌梗死后，通过溶栓或经皮冠状动脉介入治疗(PCI) 及早恢复心肌灌注是减小心肌梗死面积、改善临床预后最有效的方法，然而缺血心肌血流恢复可能引起心肌再灌注损伤，就是心肌缺血再灌注损伤。缺氧 / 复氧是在细胞水平上模拟的心肌缺血再灌注损伤。有研究表明，缺氧 / 复氧能造成内质网应激 [8]。内质网是真核细胞中的重要细胞器，它参与蛋白质的折叠、组装和转运等，感染、炎症、营养物质缺乏等均可紊乱内质网的稳定状态，导致蛋白质折叠障碍或错误，触发 ERS[10-11]。白藜芦醇属于非黄酮类多酚化合物，生物性很强，是天然的抗氧化剂，主要是从葡萄、桑葚、虎杖等之中提取出来的，是许多中药的主要成分 [12]。它具有广泛的能抑制缺氧 / 复氧导致的内质网应激，保护心肌。

参考文献：

[1]He X, Schuchman E H. Ceramide and Ischemia/Reperfusion Injury[J]. J Lipids,2018,2018(26):3646725.
[2]刁长会 , 刘修恒 . 缺血 / 再灌注损伤的病理生理机制 [J/OL]. 医学综述 ,2018,(12):2306-2311+2317.
[3]高扬 , 邢长泰 , 贾大林 . 番茄红素减轻 H9C2 心肌细胞缺氧 / 复氧致内质网应激的相关机制 [J]. 心脏杂志 ,2017,29(02):138-143.
[4]Bi X, He X, Xu M, et al. Acetylcholine ameliorates endoplasmic reticulum stress in endothelial cells after hypoxia/reoxygenation via M3 AChR-AMPK signaling[J]. Cell Cycle,2015,14(15):2461-2472.
[5]宋丽华 , 张晓一 , 来丽娜 , 等 . PKC/HSP70 通路介导白藜芦醇对心肌细胞缺氧 / 复氧损伤的保护作用 [J]. 中国医院药学杂志 ,2017,37(16):1585- 1589.
[6]Wu X, Zhou S, Zhu N, et al. Resveratrol attenuates hypoxia/reoxygenation induced Ca2+ overload by inhibiting the Wnt5a/Frizzled 2 pathway in rat H9c2 cells[J]. Mol Med Rep,2014,10(5):2542-2548.
[7]贺翼飞 , 李璐 , 蔡志亮 , 等 . 白藜芦醇对缺氧心肌细胞的保护作用及机制研究 [J]. 中国新药杂志 ,2017,26(10):1163-1168.
[8]沈志嘉 , 郑桓 , 费硕 , 等 . 白藜芦醇对 H9c2 心肌细胞抗氧化应激损伤的内质网应激机制研究 [J]. 中国新药杂志 ,2015,24(01):74-78.
[9]Wu Q, Wang Q, Guo Z, et al. Nuclear factor‐κB as a link between endoplasmic reticulum stress and inflammation during cardiomyocyte hypoxia/reoxygenation[J]. Cell Biol Int,2014,38(7):881.
[10]Minamino T, Kitakaze M. ER stress in cardiovascular disease[J]. Mol Cell Cardiol,2010,48(6):1105-1110.
[11]张国中 , 刘增长 . 内质网应激与心肌缺血再灌注损伤 [J]. 实用临床医药杂志 ,2015,19(07):170-172.
[12]Jang M S, Cai L N, Udeani GO, et al. Cancer chemopreventive activeity of resveratrol a natural product derived from grapes[J]. Science, 1997, 275(5297): 218-220.
[13]Movahed A, Yu L, Thandapilly SJ, et al. Resveratrol protects adult cardiomyocytes against oxidative stress mediated cell injury[J]. Arch biochem Biophys,2012,527(2):74-80.
[14]贺翼飞 , 田发明 , 习瑾昆 , 等 . 白藜芦醇心肌保护作用研究进展 [J]. 中国煤炭工业医学杂志 ,2017,20(04):496-499.
[15]吴翔 . 白藜芦醇后处理对缺氧 / 复氧 H9C2 心肌细胞钙超载的保护效应及作用机制研究 [D]. 南方医科大学 ,2015.

《白藜芦醇对缺氧 / 复氧心肌细胞的内质网应激机制研究论文》附论文PDF版下载：
http://www.lunwensci.com/uploadfile/2018/1215/20181215024829341.pdf
 
关注SCI论文创作发表，寻求SCI论文修改润色、SCI论文代发表等服务支撑，请锁定SCI论文网！

文章出自SCI论文网转载请注明出处：https://www.lunwensci.com/yixuelunwen/2200.html