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摘要：目的观察木犀草素对糖尿病大鼠视网膜抗氧化应激通路的影响。方法SD雄性大鼠以腹腔注射链脲佐菌素诱导糖尿病模型。分为对照组、低、中、高剂量给药组、空白组。于第12周处死试验大鼠摘除眼球，行HE染色，黄嘌呤法检查SOD含量，qRT-PCR检测Nrf2、HO-1。结果对照组大鼠视网膜变薄，神经节细胞排列紊乱。中、高剂量给药组SOD、Nrf2、HO-1mRNA的表达较对照组增加（均为P<0.05），差异均有统计学意义。结论木犀草素可能通过增加SOD含量，激活Nrf2/HO-1通路而延缓糖尿病大鼠视网膜病变的进程。
关键词：糖尿病；木犀草素；氧化应激；视网膜
本文引用格式：周亚男,李琰,李猛,等.木犀草素对糖尿病大鼠视网膜病变氧化应激通路的影响[J].世界最新医学信息文摘,2019,19(74):113-114.
0引言
糖尿病视网膜病变是一种致盲性眼病，由多种通路共同参与。Nrf2-ARE是近年新发现的机体抵抗内外界氧化刺激的防御性转导通路，也是近年来抗氧化领域人们争相研究的热点。木犀草素具有抗氧化、抗炎症、抗肿瘤、治疗心血管疾病和骨质疏松等多种生物活性。本试验旨在研究木犀草素对糖尿病视网膜病变的发生发展是否起到延缓作用并推测其作用机制。
1材料及方法
1.1实验动物及分组。选取健康清洁级雄性2月龄SD大鼠55只，体重（200±20）g。普通饲料喂养，自由进食进水，适应性喂养1周后，对大鼠进行编号，按照数字表法随机分为空白组（A组，12只）及模型组。
1.2试验材料。链脲佐菌素及柠檬酸钠缓冲液，均购自美国Sigma公司；SOD超氧化物歧化酶试剂盒，购自南京建成生物科技有限公司。HO-1，Nrf2，GAPDH引物序列由上海生工生物有限公司设计；提取总RNA试剂盒、逆转录试剂盒、qRT-PCR试剂盒均购自北京碧云天生物有限公司。
1.3模型建立。模型组大鼠45只禁食水24 h后利用链脲佐菌素30 mg/kg分1次/日，连续两日左下腹腔注射诱导糖尿病模型，再继续喂养1个月，符合多饮、多食、多尿、血糖持续≥16.7 mmol/L的大鼠即为模型组。
1.4随机分组及用药。45只大鼠均成功诱导为模型组，随后按数字表法抽取40只随机分为对照组（B组10只）及低中高剂量给药组（C、D、E组各10只），成模后分别给药组给予木犀草素5 mg/kg/day、10 mg/kg/day、25 mg/kg/day，连续12周，对照组10只予等剂量0.1%DMSO，均灌胃给药。
1.5标本采集及处理。于12周时处死各组试验大鼠，迅速取出双侧眼球，一眼放入FAA液中固定，另一眼放入液氮瓶中冷冻。
1.6HE染色。采用苏木精-伊红染色法进行染色，并在光学显微镜下进行观察视网膜形态。
1.7检测SOD含量。按照试剂盒检测方法要求，于波长550 nm处检测SOD含量。
1.8qRT-PCR法检测HO-1，Nrf-2mRNA含量。Nrf2、HO-1引物序列分别为107bp、242bp。按照试剂盒检测方法进行检测，结果以Hmox1作为内参照，采用2-△△Ct计算Nrf2、HO-1mRNA的相对表达量。
1.9统计学分析。采用SPSS 17.0统计分析软件处理。本试验数据以均数（±s）±标准差（s）表示。各组间血糖差异采用重复测量方差分析。余检测指标总体差异比较采用单因素方差分析和两样本t检验，多重比较采用Bonferroni检验，以P<0.05为差异具有统计学意义。
2结果
2.1不同时期试验大鼠视网膜中超氧化物歧化酶（SOD数量），见表1。
2.2不同时期试验大鼠视网膜中HO-1、Nrf2mRNA的相对表达量的测定，见表2。
3讨论
目前，糖尿病全球患病率不断攀升，糖尿病视网膜病变是糖尿病常见的微血管病变之一。本研究中，模型组大鼠均产生明显高血糖，差异具有统计学意义。HE染色，12周时空白组大鼠的视网膜形态正常，而对照组大鼠视网膜明显变薄，神经节细胞排列紊乱；给药组大鼠视网膜变薄，但结构层次分明，各层细胞排列比较规则，细胞染色较均匀且形态尚规整。与既往[1]HE染色结果相似。
本研究中，对照组SOD、Nrf2、HO-1mRNA表达较空白组增多，说明DM发生时，机体产生氧化应激反应，但不能达到平衡状态，不能代偿过多的有害物质。机体仍发生氧化应激损伤[2-4]。
本实验中，给药后，中、高剂量的木犀草素均可以使SOD活性上升，Nrf2、HO-1含量升高，以对抗氧化因子对视网膜的“攻击”[5-8]。但低剂量木犀草素没有明显增强SOD活力，未增加Nrf2、HO-1因子含量，说明木犀草素发挥抗氧化能力与剂量相关。
综上所述，采用木犀草素治疗糖尿病大鼠后，观察到一定剂量木犀草素能增强SOD活力，激活Nrf2/HO-1通路，延缓糖尿病大鼠视网膜病变的进程，但糖尿病大鼠视网膜损伤的机制是极其复杂的[9-12]，本试验主要研究氧化应激通路，对于木犀草素其它药理作用是否对于糖尿病大鼠视网膜的具有保护作用未可知，且本实验未得出木犀草素的最佳给药，仍需进一步的研究。
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