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摘要：采用高效液相色谱法，在同一色谱条件下按外标法测定酒石酸溴莫尼定的含量。其中，含量测定采用100%酒石酸溴莫尼定对照品溶液。结果表明：本方法稳定性好、简单快速、重现性好，可作为原料药酒石酸溴莫尼定的质量控制标准。
关键词：酒石酸溴莫尼定；含量测定；高效液相色谱法
酒石酸溴莫尼定为5-溴-N-(咪唑烷-2-亚甲基)喹噁啉-6-胺L-酒石酸盐，是一种有机化合物，化学式为C1H10BrN5·CH6O6。它是由5-溴喹噁啉-6-胺(BRT3)1经过5个阶段的合成而制备。在水中溶解，在无水乙醇或甲苯中几乎不溶。本品是一种新型高度选择性的α2-肾上腺素能受体激动剂[2，还具有显著的降眼压作用。临床研究证明，本品主要用于开角型青光眼和高眼压症的治疗，对高眼压患者的慢性治疗有明显效果，酒石酸溴莫尼定的长期用药是安全有效的。以往的质量标准中酒石酸溴莫尼定的含量测定项采用高氯酸电位滴定的容量分析法，实验的精密度和准确性不高。本方法采用同一个色谱系统测定其含量，测定结果表明，该方法操作简便、准确、效率高、重复性好。
1仪器、试药和试剂
1)仪器:高效液相色谱仪，Agilent1100 Series，美国安捷伦公司;超声波清洗机，宁波新芝生物科技有限公司。
2)试药:酒石酸溴莫尼定，批号RK16BRT005、RK16BRT006、RK17BRT001，规格原料药，均为上海华源医药科技发展有限公司产品;酒石酸溴莫尼定对照品:批号WS/BRT/015-05，99.93%，水分0.28%，海华源医药科技发展有限公司提供。
3)试剂:甲醇(TEDIA),乙腈(TEDIA),磷酸二氢钾，广州化学试剂厂;磷酸，广州市金华大化学试剂有限公司。
2实验部分
2.1色谱条件
色谱柱:InertsiloR ODS-3C18(250 mm x4.6 mm,5μm)。
流动相，流动相A:0.03 mol/L磷酸二氢钾溶液,取磷酸二氢钾4.08 g，加1000mL水使其溶解，用0.1%磷酸调节pH至4.5±0.05;流动相B:乙腈-甲醇(体积比1:4);V(流动相A):V(流动相B)=4:1为流动相。
流速1.0mL/min，检测波长248nm3，柱温40℃3]进样量10μL。
2.2溶液的制备
稀释剂:0.03 mol/L磷酸二氢钾溶液，取磷酸二氢钾4.08g，加1000 mL水使其溶解，用0.1%磷酸调节pH至4.5±0.05。
2.2.1对照品溶液的制备
取酒石酸溴莫尼定对照品约20mg，精密称定，置于100 mL容量瓶中，加入稀释剂适量，超声5min使其溶解，加稀释剂稀释至刻度，摇匀。作为对照品溶液。
2.2.2供试品溶液的制备
取原料药酒石酸溴莫尼定约20mg，精密称定，置于100 mL容量瓶中，加入稀释剂适量，超声5 min使其溶解，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
2.3专属性实验
分别取供试品溶液、酒石酸溴莫尼定对照品溶液、空白溶剂，按上述色谱条件测定。
2.4线性关系的考察
精密量取酒石酸溴莫尼定对照品溶液1、2、5、10、15、20μL，进样分析，记录色谱图，以进样量(μg)上为横坐标，色谱峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线。
2.5精密度实验
取本品(批号:RK16BRT005)约20 mg,精密称定，置于100mL量瓶中，加入稀释剂适量，超声5min使其溶解，加稀释剂稀释至刻度，摇匀。作为供试品溶←液，取溶液进样10μL(同一批样品共6份).
2.6回收率实验
按3种不同的浓度(溶液溶质质量分数分别为80%，100%，120%)进行实验，分别精密称取酒石酸溴莫尼定对照品适量，3种不同浓度各3份，共9份，以含量测定酒石酸溴莫尼定对照品溶液为对照品溶液,按上述色谱条件测定酒石酸溴莫尼定的含量，计算酒石酸溴莫尼定的回收率。
2.7样品的测定
取3批样品，分别精密量取供试品溶液及对照品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，并按上述色谱条件，测定酒石酸溴莫尼定的含量。
2.8定量限实验
定量限溶液：精密量取含量测定项下的第一份对照品溶液5 mL，置于100 mL容量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀；精密量取1 mL，置100 mL容量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，进样10μL。
2.9稳定性实验
供试品溶液：取精密度项下的第一份供试品溶液，分别于0、5、7.5、10、14 h进样。
2.10干燥失重
由于3批样品均为原料药，应进行样品水分含量检测，故需要进行干燥失重测定，3批样品的测定结果见表1。
3结果与分析
3.1测定波长的选择
经采用DAD二极管阵列检测器检测，酒石酸溴莫尼定在248 nm处均有吸收；选择248 nm作为测定波长合理。
3.2含量测定的方法验证结果
1）在含量测定项下的系统性实验中，对照品溶液重复进样6次所得主峰峰面积的相对标准偏差为0.02%（相对标准偏差应<1.0%），主峰酒石酸溴莫尼定的拖尾因子为1.3（规定拖尾因子应≤1.5），理论板数按酒石酸溴莫尼定峰计算为10 926（规定理论板数>3 500）。
2）含量测定方法学实验中，空白溶剂对酒石酸溴莫尼定测定无干扰，结果见图1—图3；
经线性回归实验，得到酒石酸溴莫尼定线性回归方程为Y=4.70×103X+54.55，r=1.000 0，n=7，说明酒石酸溴莫尼定进样量在0.144 0～2.880 9μg范围内与色谱峰面积呈良好的线性关系；精密度实验配制样品9份，结果为RSD=0.43%（批号：RK16BRT005，均值为100.0%，n=9），表明方法的重现性良好，其结果见表2；准确性实验，平均回收率为99.9%（RSD为0.61%，n=9，)回收率实验结果符合方法学验证要求，结果见表3；三批样品含量测定结果见表4。
3）在本次实验中进行了定量限实验，定量限溶液进样量为10μL，信噪比为10.8（定量限为0.997 ng，相当于供试品溶液质量分数的0.05%），色谱图见图4。
4）本次方法验证中进行了稳定性实验，供试品溶液于配制后室温条件下放置0、5、7.5、10、14 h时测定，平均质量分数为99.6%（批号：RK16BRT005），（RSD为0.18%，n=5），结果表明供试品溶液在室温条件下放置14 h内稳定，其结果见表5。
4讨论
酒石酸溴莫尼定的质量标准在中华人民共和国药典2015年版第一增补本中有收载，英国药典2017[4]和原进品药品注册标准JXHL1400115国[5]以及中华人民共和国药典2015年版第一增补本[6]酒石酸溴莫尼定中酒石酸溴莫尼定的含量测定采用高氯酸电位滴定法，实验步骤繁琐，耗时长，误差性相对较高，实验结果的准确性不高。本方法采用高效液相色谱法（HLPC法）进行含量的测定，供试品溶液与对照品溶液比较，以外标法进行计算，结果准确，重现性好，实验操作简单快捷，可作为酒石酸溴莫尼定质量标准中含量的测定方法。
参考文献
[1]葛宗明，王存德，胡跃飞，等.酒石酸溴莫尼定的合成[J].中国医药工业杂志，2002（1）：3-5.
[2]张翠莲.酒石酸溴莫尼定[J].中国新药杂志.1998（4）：77-78.
[3]欧洲药典委员会.欧洲药典10.0.酒石酸溴莫尼定[S].EDQM，2020：1998-1999.
[4]英国药典委员会.英国药典2020.酒石酸溴莫尼定[S].MHRA，2020：337-338.
[5]国家药品监督管理局.原进品药品注册标准国酒石酸溴莫尼定：JXHL1400115[S].
[6]国家药典委员会.中华人民共和国药典2015年版第一增补本.酒石酸溴莫尼定[M].北京：中国医药科技出版社，2015：202-203.
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