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摘要：目的优化土炒白术饮片炮制工艺。方法以白术内酯系列、白术总多糖、醇溶性浸出物含量为指标，黄土用量、干燥温度、土炒温度、土炒时间为考察因素，正交试验优选土炒白术最佳炮制工艺。结果土炒白术饮片的最佳炮制工艺为：取干燥的白术饮片放入水中浸湿，取出，闷润软化至药透水尽，按药材与黄土的比例为100:20加入鲜黄土，拌匀，于60℃的烘箱中干燥，置铁锅中，用120℃～130℃加热翻炒8 min，取出立即筛去黄土。按此方法炮制的白术饮片，测定白术总内酯、总多糖、醇溶性浸出物的含量分别为0.16%、45.38%、42.45%。结论该工艺稳定、可行，可用于土炒白术饮片的炮制。
关键词：土炒白术；工艺；正交；HPLC
本文引用格式：张敏，李玮，杜洪志，等.土炒白术饮片炮制工艺优化[J].世界最新医学信息文摘,2019,19(98):285-286.
Optimization of Processing Technology of Atractylodes macrocephala Koidz Sauteed with Loess
ZHANG Min,LI Wei*,DU Hong-zhi,WANG Xian-ju,LIU Ya-qin
(Guizhou University of Traditional Chinese Medicine,Guiyang Guizhou)
ABSTRACT:Objective To optimize the processing technology of Atractylodes macrocephala Koidz sauteed with loess.Methods The content of total lactone,total polysaccharide and alcohol-soluble extract of Atractylodes macrocephala Koidz was taken as the indes,and the amount of loess,drying temperature,loess frying temperature and times were taken as the factors.Results The best processing technology for:Atractylodes macrocephala Koidz slices soaked into the water,removed and stuffy soften lip to drug permeable,according to the medicinal materials and the proportion of the loess is 100:20 to join fresh loess,mixed,in 60℃oven drying,with 120℃-130℃heat and stired 8 min,takeing out the screen immediately to the loess,cool,atractylodes total lactones,polysaccharides,alcohol soluble extract content of 0.16%,45.38%and 42.45%respectively.Conclusion The technology is stable and feasible,and can be used for processing Atractylodes macrocephala Koidz sauteed with loess.
KEY WORDS:Atractylodes macrocephala Koidz sauteed with loess;Soil fry;Processing technology;Orthogonal test;HPLC
0引言
白术为菊科植物白术Atractylodes macrocephala Koidz.的干燥根茎，具有燥湿利水，健脾益气，止汗，安胎等作用。主要用于腹胀泄泻，脾虛食少，痰饮眩悸，水肿，自汗，胎动等症[1]。
白术主要含有白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ及白术多糖等有效成分[2]，相关药理研究表明，白术具有抗肿瘤、抗氧化应激、抗胃溃疡、免疫调节、肝脏保护等作用[3-7]。目前，临床上常用的饮片主要为麸白术、土白术。土炒白术为贵州特色炮制饮片，记载于《贵州省中药饮片炮制规范》[8]，但并未见具体的炮制工艺参数。有研究者以白术水提取物、醇提取物和白术内酷Ⅲ含量为指标，采用正交法优选最佳炮制工艺[9]。此工艺存在评价指标少的缺点，不能体现中药的多成分多靶点共同协同作用的特点。因此，本研究在此基础之上，以白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ及白术多糖含量为检测指标，设计单因素试验和正交试验，结合综合评分法优选土炒白术的最佳炮制工艺，使其炮制工艺参数更加具体、合理。
1仪器与材料
1.1仪器
UItiMate-300型赛默飞高效液相色谱仪；TU-1810型紫外可见分光光度仪（北京普析通用仪器有限责任公司）；ME204型万分之一电子分析天平（上海梅特勒托利多仪器有限公司）；HS10260D型超声波清洗机（天津恒奥科技发展有限公司）；HH-2型数显恒温水浴锅（常州奥华仪器有限公司）；CS101-1C型鼓风干燥箱（重庆四达实验仪器厂）；AUW220D型十万分之一电子分析天平（苏州岛津仪器有限公司）。
1.2试药
白术药材购自花果园药材市场，经贵州中医药大学药学院魏升华教授鉴定为菊科植物白术Atractylodes macrocephala Koidz的根茎。白术内酯Ⅰ对照品（批号：GZDD-0594）、白术内酯Ⅱ对照品（批号：GZDD-0595）、白术内酯Ⅲ对照品（批号：GZDD-0596）均购自贵州迪大生物科技有限责任公司。乙腈（色谱纯），其余均为分析纯，水为娃哈哈纯净水。
2方法与结果
2.1醇溶性浸出物测定
用60%乙醇作溶剂，参照2015版《中国药典》四部通则醇溶性浸出物测定法（通则2201）项下的热浸法测定。
2.2白术内酯含量测定
2.2.1色谱条件WondaSil C18-WR色谱柱(250×4.6mm，5μm)；流动相：乙腈（A）-水（B）；梯度程序：0~10 min，50%~70%A；10~20min，70%~80%A，20~30 min；80%~92%A，30~38min，92%~100%A；流速：1.0mL·min-1；柱温：25℃；检测波长：白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅲ为220nm，白术内酯Ⅱ为276nm；进样量：20μL。
2.2.2对照品溶液的制备分别称取白术内酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ对照品6.10mg、3.15 mg、8.7 mg，精密称定，置于50mL棕色量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，既得0.122mg/mL、0.063mg/mL、0.174mg/mL白术内酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ对照品溶液。
2.2.3供试品溶液的制备取白术药材粉末约2 g，精密称定，置于100mL的具塞锥形瓶中，加入70%的乙醇溶液30 mL，称定重量，超声30min，取出擦干放凉，用70%乙醇溶液进行补重，滤过，取续滤液用0.45μm微孔滤膜滤过，即得。
2.2.4线性关系考察精密吸取上述各对照品溶液1μL、5μL、9μL、13μL、17μL、20μL按“2.2.1”项下的色谱条件进样，以峰面积值为纵坐标（Y），进样量为横坐标（X）进行线性回归，得白术内酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的回归方程分别为：Y=8.0268X+0.385（r=0.9999）、Y=22.666X+0.7624（r=0.9997）、Y=9.2597X+0.2435（r=0.9998）。结果表明白术内酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ分别在0.122μg~2.440μg，0.063μg~1.260μg，0.174μg~3.480μg范围内呈良好的线性关系。
2.3白术总多糖含量测定
2.3.1对照品溶液的制备取105℃干燥至恒重的无水葡萄糖对照品5.01mg，精密称定，置50mL棕色量瓶中，加水溶解并定容至刻度线，摇匀，即得浓度为0.1002mg/mL的无水葡萄糖对照品溶液。
2.3.2供试品溶液的制备取白术药材粉末约0.1 g，精密称定，置于100mL锥形瓶中，加入85%乙醇60mL，于水浴中加热回流1.5h，趁热过滤，残渣用10mL的85%乙醇洗涤两次，将残渣和滤纸放入100mL锥形瓶中，加25mL蒸馏水，置水浴中加热回流1h，趁热过滤，吸取续滤液2mL于250mL棕色量瓶中，加水至刻度线，摇匀。
2.3.3显色条件考察精密吸取供试品溶液2mL，精密加入5%的苯酚溶液1mL，摇匀，再精密加入5mL浓硫酸，摇匀，于沸水中水浴加热10min，再放置冰水浴中5min，即得。
2.3.4线性关系考察取5mL浓度为0.1002mg/mL的上述无水葡萄糖对照品溶液置10mL棕色量瓶中，加蒸馏水定容到10 mL，既得浓度为0.0501mg/mL的对照品溶液。精密吸取稀释后的无水葡萄糖对照品溶液0.7mL、0.9mL、1.1mL、1.3mL、1.5mL、1.7mL、1.9mL，进行显色操作，以蒸馏水为空白对照，在490nm处测定吸光度。以吸光度为纵坐标（Y），对照品含量为横坐标（X）进行线性回归，得白术多糖回归方程为Y=66.705X-0.072（r=0.9995），结果表明，无水葡萄糖在0.035007mg~0.095019mg范围内线性关系良好。
2.4炮制工艺研究
2.4.1单因素试验以三种内酯成分、白术总多糖及醇溶性浸出物为评价指标，分别对黄土用量（A）、干燥温度（B）、土炒温度（C）、土炒时间（D）进行考察，结果以黄土用量为20%、干燥温度为80℃、土炒温度120℃~130℃、土炒时间8min为最佳条件。
2.4.2正交试验根据单因素试验结果，各因素选取3个水平，选用L9（34）正交表进行试验。根据各成分在白术中的重要性，对三种内酯成分、白术总多糖及醇溶性浸出物进行综合评分。即权重比例为白术总多糖占60%、白术内酯Ⅰ占10%、白术内酯Ⅱ占10%、白术内酯Ⅲ占10%、醇浸出物占10%。综合评分值=白术内酯Ⅰ隶属度×10%+白术内酯Ⅱ隶属度×10%+白术内酯Ⅲ隶属度×10%+白术总多糖隶属度×60%+醇浸出物隶属度×10%[隶属度=（指标值-指标最小值）/（指标最大值-指标最小值）]，满分为1.00，并对正交试验结果进行方差分析，结果见表1-3。
干燥温度>黄土用量>土炒温度。因C（土炒温度）的均方值最小，故将其作为误差项来考察计算方差分析，以土炒温度为空白组，采用spss statistics23.0统计软件进行方差分析。由方差分析表可知，P（A）>0.05，说明A对各指标的影响无显著性差异，P（B）、P（D）<0.05，B、D的差异显著。正交试验结果表可得极差RB>RD>RA>RC。根据K值和R值确定最佳炮制工艺为黄土用量100:20、干燥温度60℃、土炒温度120℃~130℃、土炒时间8 min。
2.5工艺验证
根据正交试验结果确定的最佳炮制工艺制备同一样品3份，测定白术总内酯、总多糖及醇溶性浸出物含量分别为0.16%、45.38%、42.45%，RSD值分别为2.20%、1.00%、1.24%，结果表明，3批次工艺验证结果差异较小，含量稳定，表明该工艺稳定、可行。
3讨论
正交试验结果表明，土炒白术的最佳炮制工艺为：取干燥的白术饮片放入水中浸湿，取出，闷润软化至药透水尽，按药材与黄土的比例为100:20加入鲜黄土配，拌匀，于60℃的烘箱中干燥，置铁锅中，用120℃~130℃加热翻炒8 min，取出立即筛去黄土，晾凉。《贵州省中药饮片炮制规范》[8]收载土炒白术的炮制方法为取干燥的生白术片，加纯净的新鲜黄土拌匀，干燥，置铁锅内，用小火翻炒，炒至白术发出焦香时取出，筛去黄土即得，但其具体的炮制参数未明确。因白术的主要药理成分为白术内酯系列、醇浸出物和总多糖等，所以本研究以其主要活性成分为检测指标，通过正交试验优化土炒白术的炮制工艺，使其工艺参数具体化，为土炒白术饮片的生产提供一定的依据。
参考文献
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[9]马传江.正交试验优选白术的土炒炮制工艺[J].中国药师,2016,19(07):1245-1247.
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