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摘要：目的检测乳腺癌新辅助化疗（NAC）前后乳腺癌组织中RECK、MMP-9的表达水平，探讨其与化疗疗效的关系。方法接受蒽环类及紫杉醇类联合或序贯新辅助化疗4周期的128例乳腺癌患者作为研究对象，用免疫组织化学SP法检测其化疗前后癌组织中RECK、MMP-9的表达水平，结合临床病理特征、化疗疗效进行回顾性分析。结果1.临床完全缓解（CR）26例，部分缓解（PR）66例，病情稳定（SD）29例，病情进展（PD）7例，NAC有效率为71.19%。2.RECK阳性表达者与阴性表达者的NAC有效率无明显差异（P>0.05）。3.NAC前后RECK阳性表达率无明显变化；NAC后MMP-9阳性表达率较NAC前明显降低(P<0.05)。4.Logistic分析显示淋巴结有转移和MMP-9阴性表达是NAC有效率的独立影响因素（P<0.05）。结论RECK的表达不能作为乳腺癌NAC疗效的评价，MMP-9的表达与乳腺癌NAC疗效关系密切，可作为临床上评估NAC效果的参考指标。
关键词：RECK；MMP-9；乳腺癌；新辅助化疗
本文引用格式：张靖,张晓红,徐卫云,等.乳腺癌新辅助化疗前后RECK、MMP-9的表达与化疗疗效的关系[J].世界最新医学信息文摘,2019,19(100):27-29.
RECK and MMP-9 Expression in Breast Cancer Before and after Neoadjuvant Chemotherapy
ZHANG Jing,ZHANG Xiao-hong*,XU Wei-yun,ZHAO Li-juan,ZHANG Zhen,TANG Zhuo-yuan,LONG Li,FENG Jing
(Mianyang Central Hospital,Sichuan Province Breast surgery,Mianyang Sichuan)
ABSTRACT：Objective To detect the expression of RECK and MMP-9 in breast cancer tissues before and after neoadjuvant chemotherapy(NAC).To explore the relationship between chemotherapy and its efficacy.Methods 128 breast cancer patients receiving anthracycline and paclitaxel combined or sequential neoadjuvant chemotherapy for four cycles were studied.The expression levels of RECK and MMP-9 in cancer tissues before and after chemotherapy were detected by immunohistochemical SP method.A retrospective analysis was made on the clinical and pathological features and the efficacy of chemotherapy.Results 1.Clinical complete remission(CR)was found in 26 cases.Partial remission(PR)was found in 66 cases.There were 29 patients with stable condition(SD).Seven cases had progressive disease(PD).The effective rate of NAC was 71.19%.2.There was no significant difference in the efficiency of NAC between RECK positive and negative expression(P>0.05).3.There was no significant change in RECK positive expression rate before and after NAC.The positive expression of MMP-9 after NAC was significantly lower than that before NAC(P<0.05).4.Logistic analysis showed that lymph node metastasis and negative expression of MMP-9 were independent factors affecting the efficiency of NAC(P<0.05).Conclusion The expression of RECK can not be used to evaluate the efficacy of NAC in breast cancer.The expression of MMP-9 is closely related to the efficacy of NAC in breast cancer.It can be used as a reference index for clinical evaluation of NAC effect.
KEY WORDS：RECK;MMP-9;Breast cancer;Neoadjuvant chemotherapy
0 引言
新辅助化疗（neoadjuvant chemotherapy，NAC）已被广泛应用于局部晚期乳腺癌患者的治疗[1-2]，也适用于降期后的可保乳患者。早期评价乳腺癌NAC的疗效有利于尽早发现那些对化疗不敏感的肿瘤，并及时可以调整治疗方案，合理安排手术方式和时机，减少无谓的手术产生的心理障碍以及化疗药物的毒副反应。因此，探寻评价NAC疗效的可靠指标成为临床研究的热点问题。基质金属蛋白酶-9（matrix metalloproteinase-9，MMP-9）是一种明胶酶，可以降解肿瘤表面的细胞外基质（extracellular matrix，ECM），进而促进肿瘤细胞的浸润和转移[3]。RECK（reversion inducing cysteine rich protein with kazal motifs）是一种基质金属蛋白酶抑制剂，研究发现RECK可以在转录水平抑制MMP-9的表达[4]，本实验通过免疫组化SP法检测化疗前后RECK、MMP-9的表达情况，探讨两者表达情况及临床病理特征与NAC疗效的关系，评价其在化疗疗效中的预测作用。
1资料与方法
1.1一般资料。收集绵阳市中心医院乳腺外科2018年1月至2019年1月收治的128例经过彩超下空芯针穿刺活检证实为II-III期浸润性乳腺癌的患者作为研究对象。未完成4周期NAC的患者以及术后证实达到病理完全缓解的患者不作为此次研究的对象。128例患者均为女性，无其他恶性肿瘤病史，未接受过任何治疗。初治年龄为29-76岁，平均年龄50.9岁，中位年龄51.5岁。
1.2方法
1.2.1治疗方法：128例患者均行TEC（多西他赛、表阿霉素、环磷酰胺）方案，第一天环磷酰胺（600 mg/m2）加表阿霉素（75 mg/m2）；第二天多西他赛（75 mg/m2），21天为一周期，4周期后进行疗效评价。
1.2.2检验方法：有所组织标本用4%甲醛固定、脱水、石蜡包埋。根据2005年WHO乳腺肿瘤病理学和遗传学分类标准和组织学评价系统进行组织学分型和分级。连续切片4张，1张用于HE染色，2张用于RECK、MMP-9免疫组化链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法（Streptavidin-Perosidase，S-P）染色。用已知阳性表达作为阳性对照，最后1张以PBS液代替一抗作为阴性对照。
1.2.3判读方法：RECK、MMP-9均在细胞质中表达，阳性表达呈淡黄色至棕褐色颗粒，细胞核基本不着色。由两位病理科医师采用积分半定量法对结果进行判定。①阳性细胞百分率：≤5%为0分，6%-25%为1分，26%-50%为2分，51%-75%为3分，>75%为4分；②阳性细胞染色程度：无色、淡黄色、黄色及棕黄色分别记0、1、2、3分。将染色阳性细胞百分率积分乘以染色阳性细胞百分率积分，最后为总积分：0分为阴性（-），1-4分为弱阳性（+），5-8分为阳性（2+），9-12分为强阳性（3+），若两位医师判定结果差距大于2分，则由第三位医师重新判读。最后以两者乘积分值<4分为阴性，≥4分为阳性。
1.3观察指标与疗效评价。观察治疗后NAC疗效，疗效评价参照实体肿瘤评价标准：完全缓解（complete response，CR）指4个疗程内所有靶病灶消失，无新病灶出现；部分缓解（partial response，PR）指4个疗程内靶病灶最大径之和减少大于或等于30%；疾病稳定（stable disease，SD）指4个疗程内靶病灶最大径之和缩小未达PR，或增大未达PD；疾病进展（progressive disease，PD）指4个疗程内靶病灶最大径之和至少增加大于或等于30%，或出现新病灶。NAC有效率=（CR+PR）/可评价的病例（%）。
1.4统计学分析。使用SPSS 22.0对所有数据进行分析，计数资料用率（%）表示，采用χ2检验和Fisher确切概率法检验。采用Logistic回归模型进行多因素分析，取P<0.05表示差异有统计学意义。
2结果
2.1128例乳腺浸润性癌患者NAC疗效情况。128例患者中，达到临床完全缓解（CR）26例，部分缓解（PR）66例，病情稳定（SD）29例，病情进展（PD）7例，化疗有效率为71.19%（92/128）。
2.2RECK、MMP-9表达与化疗疗效的关系。RECK阳性表达者中NAC有效率为73.85%，阴性表达者中NAC有效率为69.84%，差异无统计学意义（χ2=0.254，P>0.05）。MMP-9阳性表达者中NAC有效率为80%，阴性表达者中NAC有效率为62.02%，差异有统计学意义（χ2=5.045，P<0.05），见表1。
2.3化疗前后RECK、MMP-9表达的变化。化疗前，RECK阳性表达65例，阴性表达63例，化疗后阳性表达54例，阴性表达74例。化疗前后RECK阳性表达率无明显变化（χ2=1.900，P>0.05）。化疗前，MMP-9阳性表达70例，阴性表达58例，化疗后阳性表达例51，阴性表达77例。化疗前后MMP-9阳性表达率明显降低（χ2=5.658，P<0.05）见表2，图1、2。
2.4NAC疗效与患者临床病理特征的关系分析。128例浸润性乳腺癌患者的NAC有效率与患者的组织学分级、临床分期、淋巴结转移情况存在相关性，差异有统计学意义，表3。
2.5NAC有效率与患者临床病理特征关系的多因素分析。
将患者经过NAC后是否有效作为因变量，组织学分级、临床分期、淋巴结转移情况以及MMP-9的表达情况作为自变量进行Logistic回归分析，结果显示组织学分级III级、临床分期III级、淋巴结有转移、MMP-9阴性表达降低NAC有效率，见表4。
3讨论
新辅助化疗（NAC）是目前公认的局部晚期乳腺癌标准治疗手段。NAC不仅有助于控制全身的肿瘤细胞、降低临床分期，还可以缩小肿瘤体积，提高保乳手术率，进而延长乳腺癌患者生存时间、提高生存质量[5]。目前乳腺癌NAC有效率为60%~90%，但仍有10%~35%的乳腺癌对NAC不太敏感[6]。因此，如何寻找可靠的生物学指标准确的评估NAC疗效，是临床医师思考的难题。
细胞外基质（extracellular matrix，ECM）为组织细胞提供一个支撑屏障，并参与细胞的增值、迁移和凋亡等过程[7]。MMP-9是一种明胶酶蛋白水解酶，可由肿瘤细胞以酶原的形式分泌，激活后主要水解肿瘤细胞周围ECM，是肿瘤发生浸润转移的第一步[8]。RECK是一种MMPs的抑制剂，可以直接通过减少MMP-9分泌，或抑制其酶活性，从转录水平抑制MMP-9的表达[9]。
虽然有研究证明乳腺癌组织中RECK高表达意味着良好的预后，但关于RECK对于NAC疗效的评估价值，还未见报道。在我们的研究中，RECK表达差异的患者NAC有效率没有差异，NAC前后RECK的表达也无明显变化。我们可以认为，RECK尚不能作为预测乳腺癌NAC疗效的可靠指标。
Padala C等人[10]的研究证明MMP-9在乳腺癌浸润、转移过程中发挥了重要的作用，并影响乳腺癌癌患者的5年生存率。我们的研究对MMP-9是否能作为预测NAC疗效的指标进行了分析，发现MMP-9阳性表达患者的NAC有效率明显高于阴性表达患者，NAC后MMP-9阳性表达率较NAC前明显降低。这一现象可能说明NAC对MMP-9阳性表达的乳腺癌患者有更好的敏感性，这与张一君[11]等人的研究一致。我们把NAC是否有效作为因变量，影响NAC有效率的指标作为自变量进行Logistic回归分析得出，腋窝淋巴结有转移及MMP-9阴性表达与NAC的有效率密切相关。这进一步说明MMP-9能够作为预测NAC是否有效的可靠指标。有研究显示NAC抑制MMP-9表达的机制与细胞外调节信号激酶（extracellular signal regulated protein kinase，ERK）有关[12]，Ras-GRF1作为重要的活化因子参与ERK激酶的活化，而MMP-9基因启动活化又是靠ERK激活的。化疗药物与Ras-GRF1竞争性结合并使之降解，使得MMP-9基因无法活化，达到抑制MMP-9表达的作用。但是关于化疗抑制MMP-9表达的具体机制仍不明确。
总之，本实验结果证实了乳腺癌组织中RECK的表达差异尚不能作为评价临床II-III期乳腺癌NAC疗效的指标，而MMP-9的表达差异可作为预测乳腺癌患者NAC疗效的评价指标，这将为临床II-III期乳腺癌NAC疗效的评估提供有价值的参考。
参考文献
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[10]Padala C,Tupurani MA,Puranam K,et al.Synergistic effect of collagenase-1(MMP1),stromelysin-1(MMP3)and gelatinase-B(MMP9)gene polymorphisms in breast cancer[J].PLoS One,2017,12(9):217-219.
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