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摘要：目的通过研究雷公藤多甙对致敏大鼠气道白三烯C4表达的影响，探讨雷公藤多甙对哮喘气道炎症的影响，从而为临床上哮喘患者的治疗提出实验依据。方法雄性Wistar大鼠30只，随机分为对照组、致敏组及治疗组，每组10只。后二组应用卵白蛋白(OVA)致敏并长期(8周)吸入激发，制备哮喘模型；治疗组在激发第3周开始，于雾化激发前30min给雷公藤多甙精制纯原料8mg/kg(1mL)灌胃。白三烯C4浓度测定采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)，按试剂盒说明书进行操作。结果①致敏组气道白三烯C4的表达（259.58±2.78）明显高于治疗组(166.65±2.12)和对照组(75.38±1.68),差异有统计学意义（均P<0.01）；治疗组高于对照组，差异有统计学意义（P<0.01）。结论雷公藤多甙可使致敏大鼠气道白三烯C4表达减少，减轻气道炎症。
关键词：哮喘；白三烯C4；雷公藤多甙
本文引用格式：袁峰.雷公藤多甙对致敏大鼠气道白三烯C4表达的影响[J].世界最新医学信息文摘,2019,19(96):222,226.
Effects of Tripterygium Wilfordii on Expressions of LTC4 in Sensitized Rats Airway
YUAN Feng
(Department of Respiratory medicine,Yanqing district Hospital，Beijing)
ABSTRACT:Objective To study the effect of Tripterygium wilfordii(TW)on airway Inflammation of asthma and put forward experimental basis for the treatment of asthma through researching the effect of TW on the expressional levels of LTC4 in sensitized rats airway.Methods Thirty male Wistar rats were divided randomLy into control group,sensitized group and treated group The rats of latter two groups were sensitized and challenged by ovalbumin to establish the asthmatic model.From the challenged third weeks,the treated group rats were taken TW by intragastric administration.The expressions of LTC4 in airway were defected using ELISA in all rats of three groups.Results①The expressions of airway LTC4 of the sensitized group(259.58±2.78)were significantly higher than those of the treated group(166.65±2.12)and the control group(75.38±1.68).
Conclusion Smoking can decrease the expession level of LTC4 in sensitized rats airway and alleviate Airway Inflammation.
KEY WORDS:Asthma;LTC4;Tripterygium wilfordii
0引言
哮喘是由多种细胞和细胞组分参与的气道慢性炎症为特质的一种常见呼吸道疾病，随着经济的发展和工业化进程，以及人们生活方式的改变，我国哮喘的患病率呈快速上升趋势，而其反复发作性、难治性以及致死性为其防治带来很大困难，哮喘己经成为一个全球关注的问题。目前哮喘的发病机制尚未完全阐明，因此研究哮喘发病机制以及治疗策略具有重大的意义。白三烯是花生四烯酸的代谢产物及炎性介质，在哮喘发病机制的许多环节起重要作用。白三烯不仅可引起哮喘患者支气管强力收缩，而且还参与了哮喘的炎症反应过程，加快炎症细胞在气道的聚集和活化，参与慢性气道局部炎症过程。本研究拟通过观察吸烟对致敏大鼠气道白三烯C4表达的影响，进一步探讨吸烟哮喘大鼠气道炎症的发生机制，从而为临床吸烟哮喘患者的治疗提供实验依据。
1材料和方法
1.1研究对象
选用8周龄健康雄性Wistar大鼠（山西医科大学实验动物中心提供）30只，体质量(200±20)g，饲养条件为室温（20±2）℃，湿度50%~60%，12小时交替采光，普通饲料喂养，自由饮水进食，动物精神状态好，体毛光滑，眼睛有神，反应敏捷，肌肉丰满，无畸形。
1.2主要仪器和试剂
卵白蛋白(OVA，V级)为美国Sigma公司产品。白三烯C4浓度测定采用酶联免疫吸附法(ELISA)，试剂盒购自美国Neogen公司。喷射式雾化吸入器，雾化微粒大小为2~3m。MIAS-2000医学图象分析系统为四川川大智胜软件股份有限公司产品。
1.3动物模型的建立
实验大鼠随机分为对照组、致敏组、治疗组，每组10只。参照文献制备哮喘模型[1]，致敏组分别于第1天和第8天以10%的0VA1mL、氢氧化铝干粉100 mg腹腔注射致敏；第14天后将大鼠置于透明密闭容器中给予1%的OVA溶液60 mL雾化吸入激发，每日1次，每次40分钟，共10周。治疗组前期处理同致敏组，从雾化吸入1%OVA第3周起，于雾化激发前30min给雷公藤多甙精制纯原料8mg/kg(1mL)灌胃。
1.4标本制备
于末次雾化吸入后24小时，以25%乌拉坦（1000mg/kg）腹腔注射麻醉，腹主动脉放血处死大鼠，完整游离心、肺组织，夹闭右主支气管，左肺注入4%多聚甲醛5mL内固定30分钟后，部分用4%多聚甲醛固定24小时，酒精梯度脱水，常规石蜡包埋、切片。白三烯C4浓度测定采用酶联免疫吸附法(ELISA)，操作方法按说明书进行，结果以ng/L表示。
1.5统计学处理
采用SPSS 11.5统计软件包进行统计分析。数据以±s表示，组间总差异采用方方差分析，组间两两比较采用SNK-q检验。P<0.05为差异有统计学意义。
2结果
2.1各组大鼠的表现
对照组大鼠精神状态良好，无喘息。致敏组于雾化吸入后可见喘息发作、张口呼吸、易激惹、烦躁不安，饮水增多等。治疗组亦有上述表现，但程度较致敏组明显减轻。
2.2各组大鼠组织病理学改变
各组大鼠肺组织切片光镜下观察可见：对照组支气管及肺泡形态结构正常，气道内未见炎性细胞浸润；致敏组可见细支气管粘膜水肿，管腔缩窄，支气管黏膜皱襞增多，表现为以嗜酸性粒细胞浸润为主的气道炎症；治疗组病理改变同致敏组，但程度明显减轻。
2.3各组大鼠气道白三烯C4的表达结果
对照组气道白三烯C4无表达或微弱表达。致敏组气道可见白三烯C4蛋白表达。治疗组大鼠气道白三烯C4表达较致敏组明显减少。各组大鼠气道白三烯C4表达结果的比较见表1。
3讨论
支气管哮喘是常见的慢性气道炎症疾病，以气道非特异性炎症为其特征，由多种细胞和细胞组分参与。白三烯是与哮喘气道炎症密切相关的一类高活性炎性介质，可引起气道平滑肌收缩，血管壁通透性增加，促进黏液分泌，炎症细胞尤其是嗜酸性粒细胞在气道聚集，并参与气道的重构，在哮喘的发生、发展中起重要作用。
用现代技术研究中国传统的中药治疗支气管哮喘，是近年哮喘研究中日渐受到重视的一个热点。2003年钟南山教授发出走具有中国特色的支气管哮喘防治研究之路的呼吁[2]。中药雷公藤属卫茅科植物，具有抗炎、抗肿瘤、抗生育及免疫抑制等显著生理活性，一直被广泛应用风湿性关节炎和其他自身免疫性疾病的治疗。1987年来茶云[3]首次报道雷公藤治疗重型、偏重型小儿支气管哮喘31例取得良好效果，激发国内学者广泛开展雷公藤治疗支气管哮喘的临床与基础研究。
近年来研究发现，作为目前控制气道炎性及防止气道重塑的首选药物，糖皮质激素对过敏原引起的气道嗜酸性粒细胞性炎症有明显的抑制作用，而气道内中性粒细胞增多时,吸入糖皮质激素的抑制作用则明显减弱[4]，糖皮质激素不能抑制哮喘患者气道白三烯的合成与释放，这也提示临床上通过加用白三烯拮抗剂，可能对糖皮质激素治疗效果差哮喘患者产生更好的治疗效果。Lazarus等[5]首次报道了LTs受体拮抗剂孟鲁司特对轻度吸烟哮喘患者有较好的疗效。本实验采用大鼠哮喘模型，进一步观察雷公藤对致敏大鼠气道白三烯C4表达的影响。结果表明，对照组大鼠气道基本无白三烯C4的表达，致敏组气道白三烯C4的表达均呈阳性，治疗组气道白三烯C4的表达较致敏组明显减少。提示雷公藤可以使致敏大鼠气道白三烯C4的表达减少，进而减轻气道炎症。
参考文献
[1]沈华浩,王苹莉.支气管哮喘小鼠模型应用评价[J].中华结核和呼吸杂志,2005(04):284-286.
[2]钟南山.走具有中国特色的支气管哮喘防治研究之路[J].中华结核和呼吸杂志,2003,26(3):129.
[3]来茶云,杨朝喜,黄彤,等.雷公藤多贰治疗重型偏重型小儿支气管哮喘的临床疗效观察[J].实用儿科杂志,1987,2(1):28-29.
[4]Gauvreau GM,Inman MD,Kelly M,et al.Increased levels of airway neutrophils reduce the inhibitory effects of inhaled glucocorticosteroids on allergen-induced airway eosinophils[J].Can Respir J,2002,9:26-32.
[5]Lazarus SC,Chinchilli V,Rollings NJ,et al.Smoking affects response to inhaled corticosteroids or leukoriene receptor antagonists in asthma[J].Am J Respir Crit Care Med,2007,175:783-790.
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