HPLC法测定含化上清片中葛根素的含量论文

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摘要：目的建立HPLC法测定含化上清片中葛根素的含量。方法采用Agilent Eclipse XDB-C18色谱柱（5μm，4.6×250mm）；流动相为甲醇-水（25：75)；流量1.0mL/min；检测波长250nm；柱温25。结果葛根素在6.91~138.29μg/mL范围内呈现良好的线性关系（r=0.9991），平均回收率为98.5%，RSD为0.6%。结论该方法简单、准确、重复性好，可用于含化上清片中葛根素的含量测定。

关键词：含化上清片；葛根素；HPLC

本文引用格式：苏丹.HPLC法测定含化上清片中葛根素的含量[J].世界最新医学信息文摘,2019,19(92):250,252.

0引言

含化上清片是由前胡、桔梗、天花粉、葛根等7味中药组方而成的复方制剂，具有利咽生津、清喉散火的功效，用于咽喉失润，咳嗽不爽，声音嘶哑，口燥舌干以及急慢性咽炎，扁桃体炎。现行标准[1]中无含量测定项目，本文建立了HPLC法测定该制剂中葛根的葛根素含量，进一步完善质量标准，现报道如下。

1仪器与试药

1.1仪器

安捷伦1200型高效液相色谱仪（美国安捷伦公司）；梅特勒-托利多XPE205型电子分析天平（瑞士梅特勒公司）；HH-S型恒温水浴锅（常州市金坛友联仪器研究所）。

1.2试药与试剂

葛根素对照品（批号110752-201615，纯度为95.4%，购自中国食品药品检定研究院）；水为超纯水；甲醇为色谱纯(购自迪马科技公司)，其他试剂均为分析纯(购自成都市科龙化工试剂厂)；含化上清片为市售品（批号：A035041、A035021、A035071，市售品）。

2方法与结果

2.1色谱条件

色谱柱：Agilent Eclipse XDB-C18（5m，4.6×250mm）；流动相：甲醇-水(25:75)；流量：1.0mL/min；检测波长：250nm；柱温：25℃；进样量：10L。

2.2溶液制备

2.2.1对照品溶液的制备

精密称取葛根素对照品18.12mg（含量以95.4%计），置50mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，得浓度为345.73g/mL的对照品贮备液，备用。精密吸取葛根素对照品贮备液0.5mL、1.0mL、2.5mL、5.0mL、10.0mL，分别置25mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，得葛根素标准曲线溶液的浓度为6.91g/mL、13.83g/mL、34.57g/mL、69.15g/mL、138.29g/mL。

2.2.2供试品溶液的制备

取含化上清片30片，研细，称取细粉约2g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入30%乙醇50mL，称定重量，于水浴回流提取装置中加热回流30分钟，冷却至室温，再称定重量，用30%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液用0.45m微孔滤膜滤过，作为供试品溶液。

2.2.3阴性样品溶液的制备

按照含化上清片的处方比例及制备工艺制备缺葛根的阴性样品，并照“2.2.2”供试品溶液的制备方法制成阴性样品溶液。

2.3专属性试验

吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性样品溶液各10L，照“2.1”色谱条件测定。结果，供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相同保留时间处有一致色谱峰，阴性样品溶液色谱图中，在与供试品溶液色谱中葛根素相应保留时间位置上未见色谱峰，说明其他药材对测定无干扰，色谱图见图1。

2.4线性关系考察

精密吸取葛根素标准曲线溶液各10uL注入液相色谱仪，以浓度为横坐标（X）,峰面积为纵坐标（Y）进行线性回归，得回归方程为Y=54.27X+81.39，r=0.9991（n=5），结果表明，葛根素在6.91~138.29g/mL范围内呈良好的线性关系。

2.5精密度试验

精密吸取浓度为138.29g/mL的对照品溶液10L，连续进样6次，测定峰面积，RSD值为0.2%(n=6)，表明仪器精密度良好。

2.6稳定性试验

取同一供试品（批号：A035041），于制备后0、2、4、8、12和24小时，按照“2.1”项下色谱条件进样，测定葛根素的峰面积，考察其稳定性，结果峰面积的RSD值为0.7%(n=6)，表明在常温条件下，供试品溶液在24小时内稳定性良好。

2.7重复性试验

取同一供试品（批号：A035041），按“2.2.2”项下方法平行制备6份供试品溶液，照“2.1”项下色谱条件，测得葛根素的平均含量为：0.675mg/g,RSD值为0.6%(n=6)，表明该方法的重复性良好。

2.8加样回收试验

取已知含量的供试品（批号：A035041）9份，每份1g，精密称定，每3份1组，分别加入浓度为345.73g/mL的对照品贮备液（低浓度组：加1.5mL；中浓度组：加2mL；高浓度组：加2.5mL），挥干溶剂，再按“2.2”项下方法制备供试品溶液，照“2.1”项下色谱条件测定，计算回收率，结果见表1。




2.9样品测定

取供试品3批（批号：A035041、A035021、A035071），按照“2.3”葛根素的含量分别为，0.675 mg/g、0.680 mg/g、0.672 mg/g。

3讨论

本实验参照文献[2]选取30%乙醇为提取溶剂，考察加热回流提取和超声提取对葛根素提取率的影响，发现同一时间段内前者提取率较高。再考察回流提取30、60、90分钟的提取率，结果无明显差异，故选择回流提取30分钟。另外以甲醇-水（25:75）为流动相，此流动相比例条件下葛根素出峰时间快且无杂质干扰。本实验对含化上清片中的葛根素进行提取并采用HPLC法进行含量测定，可作为含化上清片的质量控制方法。

参考文献

[1]中华人民共和国卫生部药品标准[S].中药成方制剂第十七册:118.[2]中国药典[S].一部.2015:77.

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