SCI论文（www.lunwensci.com）:
摘要：目的以SD癫痫模型大鼠为研究对象，探究益智乙醇提取物治疗癫痫可能的作用机制。方法SD大鼠随机分为正常组，癫痫模型组及给药组，采用氯化锂-匹鲁卡品法制备癫痫模型。观察大鼠癫痫发作情况，并于3d，7d和14d取大鼠海马组织，检测MDA、SOD水平，观察HE染色情况。结果益智仁醇提物可遏制癫痫发作,减轻癫痫大鼠海马神经元的损伤，提高大鼠海马组织SOD的水平，降低MDA的水平。结论益智仁醇提物能遏制癫痫发作，并抑制大鼠海马内的氧化应激、凋亡，为癫痫患者提供新的选择。
关键词：癫痫；益智乙醇提物；海马组织；氧化应激
本文引用格式：陈钰，黄远涛，刘慧青,等.益智乙醇提取物治疗癫痫大鼠的研究[J].世界最新医学信息文摘,2019,19(76):223-224.
0引言
癫痫(Epilepsy)是一种常见病、多发病，具有突然发生、反复发作的特点,严重危害健康和影响生存质量。近年研究发现，以益智仁为主的方剂在益智健脑方面的临床应用越来越多，并且在动物实验中证实益智仁具有良好的脑保护作用，可用于老年性痴呆及其他智能障碍类疾病的治疗[1]。本研究探讨益智乙醇提物能否治疗癫痫，初步探究其可能的作用机制。
1材料与方法
1.1材料
1.1.1主要试剂与仪器
氯化锂（麦克林）、匹鲁卡品（Sigma）、益智（海南蔺氏盛泰药业有限公司）、BCA蛋白浓度测定试剂盒（碧云天生物技术）、总SOD活性检测试剂盒（碧云天生物技术）、脂质氧化（MDA）检测试剂盒（碧云天生物技术）、酶标仪（SYNERGY）、荧光显微镜（OLYMPUS）。
1.1.2动物
SD雄性大鼠，体重200-250g（长沙天勤实验动物中心），适应性饲养1周后，无不良反应即进入实验。
1.1.3实验动物模型制备
实验组予氯化锂-匹鲁卡品造模[2]，取达IV及V级（Racine六级评价标准[3]）的大鼠。正常组的大鼠在腹腔等时注射等量的氯化锂和生理盐水。记录并比较大鼠发作时的行为表现与癫痫发作等级标准及时间。
1.1.4益智醇提物制备及给药
益智粉碎，过十目筛，称取益智粉末500 g，加入两倍体积95%乙醇，加热回流3次，每次3 h，合并滤液蒸干后得浸膏78.2 g。浸膏加入20%吐温80和80%蒸馏水配制成2 L悬浊液。每天同一时间，给药组给予1 mL悬浊液灌胃，正常组和模型组给予1 mL蒸馏水灌胃。
1.2方法
1.2.1标本处理
于第3、7和14天（给药24h后）：各组取3只于冰上快速分离海马组织，于-80℃冰冻保存用于氧化应激检测[4]；各组取1只用4％多聚甲醛缓冲液心脏灌注取海马，于蔗糖溶液梯度脱水，保存于-80℃冰箱用于HE切片染色[5]。
1.2.2海马SOD活性和MDA含量的测定
海马组织匀浆离心后用于检测。配置反应溶液后，在96孔板中分别加入待测样品和标准品，使用酶标仪测定吸光度。根据标准曲线计算出SOD活性和MDA含量。
1.2.3HE切片观察
将灌注固定、脱水后的组织修块后切片，HE染色，显微镜下观察海马组织的病理变化。
1.2.4统计方法
数据采用均数±标准差（±s）的方式表示，使用SPSS 25.0统计分析软件进行分析，多组样本的均数比较采用单因素方差分析。P<0.05为差异的时候具有统计学意义。
2结果
2.1大鼠发作情况
正常组大鼠无任何癫痫发作情况。当模型组与给药组腹腔匹鲁卡品注射5 min内,多数大鼠先后出现不同程度Ⅰ级发作,5到30 min内,逐渐出现Ⅲ~Ⅴ级发作。给药组给予益智仁提取物后癫痫发作次数明显减少（见表1）。
2.2HE染色
取大鼠海马体后进行HE染色，显微镜下观察模型组的海马神经元：可看到模型组神经元变性，细胞结构不完整，有破裂现象，细胞之间没有明显的间隔，染色质发生聚集。给药组神经细胞肿胀，体积增大，胞核偏位伴有核碎裂，溶解，少量神经元丢失（见图1）。表明益智醇提物具有神经保护作用，能够抑制神经元的凋亡，保护神经元细胞免受损伤。
2.3氧化应激
2.3.1SOD
相比正常组，模型组的SOD活性著显降低（P<0.05）。相比模型组，给药组的SOD活性有了显著升高（P<0.05）（见表2）。
2.3.2MDA
正常组的MDA含量显著低于其他两组（P<0.05）。相比模型组，给药组的MDA含量有了显著下降（P<0.05）（见表3）。
3讨论
癫痫的发病具有突发性，不可控性，故需建立动物癫痫模型来研究发生机制，筛选、评价抗癫痫药物的效果和作用[6]。采用氯化锂-匹鲁卡品造模法的癫痫模型与成年人癫痫中最常见的类型颞叶癫痫非常相似[7]。
在颞叶癫痫的研究中发现细胞的氧化应激水平是加重神经细胞损伤方式之一[8]。癫痫发作后海马组织中MDA的含量明显升高[9]，升高的MDA参与了癫痫的神经损伤；另一方面，癫痫发作后海马组织中SOD的水平显著下降。其中自由基的产生和MDA会抑制SOD的活性,而SOD下降,细胞清除自由基的能力下降,对神经元的保护作用减弱,形成恶性循环,进一步加重脑损伤[10]。益智仁乙醇提取物具有较强的抗氧化能力[11]，结果显示在14天的时候，其对神经细胞的保护作用最明显，抗氧化应激也最有效。其他时间点虽然有效果，但是不如14天的时候显著。
给予益智仁提取物后大鼠癫痫发作次数明显减少，提示其有遏制癫痫大鼠发作的作用。癫痫发作后，可导致海马神经元凋亡、坏死[12]。HE染色结果证明在癫痫中，益智果实乙醇提取物同样对鼠神经细胞具有保护作用，对神经细胞损伤有显著的减轻作用，并能有效地抑制凋亡[13]。
本研究发现，益智醇提物对由氯化锂-匹鲁卡品所致的癫痫大鼠行为学变化和其海马内的氧化应激、凋亡有显著的抑制作用。其通过增加SOD含量，降低MDA的含量，改善氧化系统/抗氧化系统之间的失调状态，并减轻癫痫大鼠海马神经元的损伤，从而减轻癫痫的发作。本实验结果对应用益智仁醇提物防治癫痫具有一定的意义。
参考文献
[1]李裕倩,王英锋,时小礼,等.益智仁乙醇提取物对东莨菪碱痴呆小鼠学习记忆的影响[J].首都师范大学学报,2015,36(1):54-56.
[2]聂政,陈建军.H2S与神经疾病的研究进展[J].中风与神经疾病杂志,2014,(08):758-759.
[3]彭昌,谭梅,刘颖,等.外源性硫化氢对癫痫幼鼠学习记忆能力及海马Fos蛋白表达的影响[J].神经解剖学杂志,2013,(06):686-690.
[4]高新丽.绿茶多酚对癫痫大鼠海马NF-κB，iNOS表达及NO含量变化的影响[D].河北医科大学,2013.
[5]高永强,杨巧莲,王伟.大鼠局灶性脑缺血模型制备及取脑方法实验研究[J].包头医学院学报,2009,25(4):6-9．
[6]祖筠筠,王晓宇,陆海美.小鼠匹鲁卡品诱导的癫痫持续状态模型改良研究[J].中国现代应用药学,2017,(04):505-508.
[7]KW Choy,SR Setlur,C Lee,et al.The impact of human copynumbervariation on a new era of genetic testing[J].BJOG,2010,117:391-398.
[8]Gregory M Cooper,Deborah A Nickerson,Evan E Eichler.Mutatio-nal and selective effects on copy-number variants in the human geno-me[J].Nature Genetics,2007,39,S22-29.
[9]Freitas RM.Investigation of oxidative stress involvement inhippocampus in epilepsy model induced by pilocarpine[J].Neurosci Lett,2009,462(3):225-229.
[10]Chun K.S.,Park K.K.,Lee J.et al.,Inhibition of mouse skin tumor promotion by anti-inflammatory diarylheptanoids derived from Alpinia oxyphylla Miquel(Zingiberaceae)[J].Oncol.Res.,2002a,13(1):37-45.
[11]刘叶明,郑甜甜,徐美娟,等.益智仁中的原儿茶酸对鱼藤酮损伤PC12细胞的保护作用[J].辽宁大学学报,2016,43(1):61-67.
[12]林力峰,梁维,刘洲,等.甘氨酸转运体1抑制剂M22对癫痫小鼠认知障碍的改善作用研究[J].安徽医科大学学报,2019,54(2):182-186.
[13]张俊清,王勇,陈峰,等.益智的化学成分与药理作用研究进展[J].天然产物研究与开发,2013,25(2):280-287.
关注SCI论文创作发表，寻求SCI论文修改润色、SCI论文代发表等服务支撑，请锁定SCI论文网！ 文章出自SCI论文网转载请注明出处：https://www.lunwensci.com/yixuelunwen/21698.html
