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摘要：目的探究牛蒡子苷联合银杏叶对糖尿病大鼠视网膜的保护作用。方法随机选取健康雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠54（体重200～250 g），裂隙灯检查眼前节及眼底有无异常，分为正常组9只，实验组45只。正常组腹腔注入等量柠檬酸钠缓冲液，实验组通过腹腔注射链脲佐菌素(STZ）[1]。实验组选取其中36只造模成功者随机分成损伤组（9只）、牛蒡子苷组（9只给予牛蒡子苷灌胃）、银杏叶组（9只给予牛蒡子苷灌胃）、牛蒡子苷联合银杏叶组（9只给予牛蒡子苷+银杏叶粉末灌胃），正常组与损伤组给予生理盐水灌胃，于给药12周处死各组大鼠取眼球。采用HE染色、免疫组化法观察大鼠视网膜形态及相关因子表达情况。结果HE染色结果表明，正常组大鼠视网膜无病理改变，牛蒡子苷联合银杏叶组大鼠眼球视网膜组织轻度水肿，牛蒡子苷组与银杏叶组大鼠眼球视网膜组织中度水肿，损伤组大鼠眼球视网膜组织高度水。免疫组化法检测结果表明，正常组大鼠眼球视网膜VEGF及PDGF蛋白呈低表达，损伤组VEGF及PDGF蛋白呈高表达状态，主要在视网膜神经节细胞层、内从状层及外核层高表达；牛蒡子苷组与银杏叶组大鼠眼球视网膜VEGF及PDGF蛋白呈较高表达；而牛蒡子苷联合银杏叶组大鼠眼球视网膜VEGF及PDGF蛋白呈弱表达。结论牛蒡子苷联合银杏叶对糖尿病大鼠早期视网膜损伤有更好的保护作用。
关键词：牛蒡子苷；银杏叶；血管内皮生长因子；血小板源性生长因子；糖尿病视网膜病变
本文引用格式：李猛,李晓,肖博,等.牛蒡子苷联合银杏叶对糖尿病大鼠视网膜的保护作用[J].世界最新医学信息文摘,2019,19(76):226-227.
Protective Effect of Burdock Glycoside combined with Ginkgo Leaf on Retina of Diabetic Rats
LI Meng,LI Xiao,XIAO Bo,LIN Jian-wei,LU Ling-yu,WANG Lin-hong*
(Affiliated hospital of north China university of science and technology,Tangshan Hebei)
ABSTRACT:Objective To investigate the protective effect of arctidine combined with ginkgo leaf on retina of diabetic rats.Methods Healthy male Sprague-Dawley(SD)rats were randomly selected(weight:200~250 g).Slit lamp was used to check whether the anterior ganglion and fundus were abnormal.The rats were divided into 9 normal groups and 45 experimental groups.The normal group was intraperitoneally injected with sodium citrate buffer,while the experimental group was intraperitoneally injected with streptozotocin(STZ)[1].Experimental group randomly select 36 building only winner into injury group(9),burdock glycosides(9 is given only to fructus arctii nucleoside lavage),ginkgo leaf group(9 is given only to fructus arctii nucleoside lavage)joint ginkgo leaf,burdock glycosides(9 give fructus arctii glycosides+gingko leaf lavage)and normal group and injury group was given saline lavage,in rats for 12 weeks executed each eye.HE staining and immunohistochemistry were used to observe the morphology and related factor expression of retina in rats.Results The results of HE staining showed that there was no pathological changes in the retina of rats in the normal group,the retinal tissue of the eye of rats in the combination of arctiginin and ginkgo leaf group had mild edema,the retinal tissue of the eye of rats in the arctiginin group and ginkgo leaf group had moderate edema,and the retinal tissue of the eye of rats in the damaged group was highly watery.The results of immunohistochemistry showed that the retinal VEGF and PDGF proteins in the normal group were low in expression,while those in the damaged group were high in expression.The expression of retinal VEGF and PDGF in the eyes of rats in the burdock glycoside group and ginkgo leaf group were higher.However,there were weak expressions of retinal VEGF and PDGF protein in the eye of rats in combination with ginkgo leaf group.Conclusion Arctidine combined with ginkgo biloba has better protective effect on early retinal injury in diabetic rats.
KEY WORDS:Arctidine;Ginkgo biloba;Vascular endothelial growth factor;Platelet-derived growth factor;Diabetic retinopathy
0引言
糖尿病视网膜病变（DR）是一种临床常见的糖尿病微血管并发症，因患者视网膜新生血管形成的眼底病变可致视力衰退，甚至可致患者失明，严重影响患者的生活质量与生命健康[2]。VEGF属于促血管生长的生长因子，与眼部许多新生血管性疾病存在密切联系。PDGF是一类具有促分裂和增殖活性的生长因子。越来越多的研究表明，VEGF与PDGF在DR发生发展过程中扮演着重要的角色，VEGF与PDGF的表达均随DR的加重逐渐增高。
1材料与方法
1.1材料
1.1.1动物
健康雄性SD大鼠54只，体重200-250ｇ，标准饲料喂养，适应性喂养1周。
1.1.2主要试剂
链脲佐菌素(STZ)，牛蒡子苷，银杏叶，血糖测定采用美国强生公司血糖仪。兔抗大鼠VEGF及PDGF多克隆抗体等。
1.2方法
1.2.1造模
随机选取45只大鼠，禁食24 h，一次性腹腔注射STZ，72 h后测鼠尾静脉血糖，空腹血糖≥16.7 mmol/L、饮水及尿量明显增加为糖尿病造模成功。正常组9只腹腔注入等量柠檬酸钠缓冲液,72 h后测量空腹血糖均<5.5 mmol/L。
1.2.2分组和给药
正常组9只大鼠，将造模成功的36只大鼠按随机数字表法分为损伤组、牛蒡子苷组、银杏叶组、牛蒡子苷联合银杏叶组，每组9只。正常组、损伤组给予生理盐水灌胃，治疗组给予相应药物灌胃，连续治疗12周。
1.2.3标本处理
灌胃12周后，断颈处死，摘取眼球。左眼球冰下取视网膜组织放EP管中，液氮速冻后-80℃冰箱储存，右眼于4%多聚甲醛固定。
1.2.4HE染色
将右眼切除眼前节，乙醇脱水，二甲苯透明，浸蜡、包埋，连续切片。切片脱蜡，乙醇浸泡，苏木精染色，盐酸乙醇分化，伊红染色，乙醇脱水，中性树胶封片，镜下观察视网膜组织病理学变化。
1.2.5免疫组化观察大鼠视网膜VEGF蛋白表达
右眼乙醇逐浓度脱水，石蜡包埋切片，脱蜡水化，抗原修复，封闭，滴加兔抗鼠抗体孵育，PBS冲洗后DAB染色后苏木素复染，脱水，透明，封片。切片以图像处理分析软件分析各组染色区的光密度(OD)值。
1.3统计学方法
应用SPSS 22.0统计软件分析数据。计量资料比较分别采用单因素方差分析和LSD-T检验。P<0.05为差异有统计学意义。
2结果
2.1HE染色
NC组视网膜组织各层结构清晰、完整，排列整齐；DM组视网膜外核层疏松变薄、排列紊乱，神经节细胞数量减少；给药组较模型组病变程度轻，牛蒡子苷联合银杏叶组视网膜组织各层结构较其他给药组明显接近正常。
2.2免疫组化
正常组VEGF及PDGF蛋白在大鼠视网膜有微量表达，损伤组VEGF及PDGF蛋白在视网膜呈高表达，牛蒡子苷组与银杏叶组VEGF及PDGF蛋白表达较损伤组少，呈弱表达，牛蒡子苷联合银杏叶组VEGF及PDGF蛋白呈低表达，明显少于损伤组。
3讨论
糖尿病性视网膜病变(diabetic retinopathy，DR)是糖尿病最常见的微血管并发症之一，是世界五大不可逆的致盲性眼病之一，是工业化国家成年人主要的致盲原因[3]。因此，对糖尿病视网膜病变的早期治疗是近几年的热门研究，但目前尚无具体的治疗方案。VEGF是目前发现的最强的促血管生长的生长因子，和眼部许多新生血管性疾病都存在着紧密联系。其生理状态下在眼部呈弱表达，维持眼部血管的完整性。而其病理状态下呈现过度表达，这种状态能促进眼部异常新生血管的生成[4]。梁勇等发现PDGF参与了视网膜增生膜的形成，早期阻断PDGF可延缓视网膜增生膜的形成和发展[5]。Praidou等研究发现玻璃体中VEGF和PDGF的表达在增生性视网膜病变组中较正常组和非糖尿病视网膜病变组高,表明PDGF和VEGF在PDR的发生和发展中起重要作用[6]。
牛蒡子苷（arctiin,ARC）是从菊科植物牛蒡属牛蒡Arctium lappaL.的果实牛蒡子中提取分离的木脂素类化合物。牛蒡子苷能通过改善DM大鼠视网膜的形态结构，并通过增加视网膜的内核层细胞数和视网膜的厚度，而对DM大鼠的视网膜损伤具有治疗作用[7]。牛蒡子苷对糖尿病肾病、糖尿病神经系统病变及糖尿病心血管病变有一定疗效[8-9]。牛蒡子苷可能通过阻断Akt-HIF-1α-VEGF-A通路来抑制高糖诱导的HUVECs增殖、迁移及血管腔形成，从而阻碍血管内皮细胞的血管新生[10]。银杏叶提取物（ginkgo biloba extract，GBE）提取于银杏的干枯叶，其成分中的银杏内酯和银杏黄酮苷已广泛应用于神经系统及心脑血管疾病之中，郭桂芬[11]的研究发现银杏内酯可有效改善视网膜血液供应，保护视神经。可有效减少视网膜内皮损伤、抑制炎症、缓解视网膜缺血状态[12]，同时保护树突棘内骨架蛋白，维持树突稳定性，从而保护神经。常规治疗联合口服银杏叶提取物能有效提高糖尿病视网膜病变的治疗效果，有利于控制或减少微血管瘤数目和视网膜出血面积，有利于提高患者的生活质量，值得临床应用[13]。
本研究建立糖尿病大鼠模型，长期高血糖状态使得视网膜细胞处于氧化应激的环境。结果发现，糖尿病组较正常组VEGF及PDGF的表达上升，说明机体处于高糖状态，视网膜组织会发生病理变化。经牛蒡子苷与银杏叶治疗后，糖尿病大鼠视网膜中VEGF及PDGF的表达轻度下调。牛蒡子苷联合银杏叶治疗后，糖尿病大鼠视网膜中VEGF及PDGF的表达明显下调。综上所述，牛蒡子苷联合银杏叶治疗可以有效减缓糖尿病大鼠视网膜发生病理变化的进程，为临床上早期预防和治疗糖尿病患者视网膜病变提供理论依据。
参考文献
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[13]李华,秦立国.银杏叶提取物对糖尿病视网膜病变的临床观察[J].中国中医药现代远程教育,2018,16(16):91-92.
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