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摘要：目的检测疑似分枝杆菌感染患者的各类临床实验室常规指标进行分析研究，最终利用病原生物学常规实验进行论述改良标本处理方法对Bacte cmGIT960的实验培养结果产生的影响进行分析研究，并能够有效的评价改良标本处理方法对Bacte cmGIT960培养性能的影响。方法筛选某院2013年12月至2016年12月结核一科至结核五科住院患者治疗前各类标本共计16522份先进行TB—DNA检测，然后利用Bacte cmGIT960进行培养，将上述标本分别应用常规处理方法和改良处理方法（洗涤，抗凝，浓集，消化等实验方法）进行培养，比较两种处理方法的灵敏度和特异性，并进行配对资料的χ2检验分析。结果应用Bacte cmGIT960培养的16522份标本中，常规处理方式的培养结果是：阳性4396例、阴性10385例，污染1741例。阳性符合率为77.49%，阴性符合率为95.72%。改良处理方法的培养结果是：阳性5475例、阴性10534例，污染513例，阳性符合率为96.51%阴性符合率为97.10%。两种标本处理方法在应用Bacte cmGIT960快速分枝杆菌培养鉴定药敏仪进行分枝杆菌培养时，其培养结果存在差异有统计学意义，（χ2=704.32，P<0.05）。结论两种标本处理方法在应用Bacte cmGIT960对已知结核分枝菌阳性和阴性标本进行分枝杆菌快速培养时，其培养结果的差异有统计学意义（P<0.05），改良标本处理方法在应用Bacte cmGIT960对分枝杆菌进行快速培养时，其性能明显优于常规处理方法，无论是对阴性标本还是阳性标本均具有较高的灵敏度和特异性。
关键词：Bacte cmGIT960；处理方法；分枝杆菌
本文引用格式：王建伟,张波,范玉梅,等.结核分枝杆菌与非结核分枝杆菌分型及感染患者常规生化指标分析与研究[J].世界最新医学信息文摘,2019,19(81):190-191.
0引言
Bacte cmGIT960使病原体的分离和药敏时间缩短了5倍左右，使临床医生在很短的时间内就能获得分型、药敏的结果[1-3]。该科研项目的研究主要是对2013年12月至2016年12月间某院呼吸与危重症医学科确诊的一万余例住院结核患者标本实验操作进行回顾性分析研究，借助多种试验方法对分枝杆菌进行快速培养试验中各类标本污染原因进行探索分析，特别是对Bacte cmGIT960进行改进标本前处理方法，阐述对不同类型标本更合理、更实用的前处理方法，然后应用到临床实践和科研实验中，应用统计学方法进行分析，现对试验研究过程进行如下描述。
1材料与方法
1.1材料
1.1.1标本与标本分类：标本来源于某院2013年12月至2016年12月呼吸与危重症医学科三部至呼吸与危重症医学科五部住院患者的16522例各类标本，标本类型为，痰5833例，灌洗液4219例，胸水2319例，腹水27例，组织1335例，支气管刷取物2300例，尿液133例、脑脊液248例、脓液52例、胃液14例，其它穿刺液32例。在16522例标本中，经结核分枝杆菌DNA检测，其中阳性标本5673例，阴性标本为10849例。
1.1.2主要仪器与试剂：Bacte cmGIT960快速分枝杆菌培养鉴定药敏仪，7 mL MGIT液体培养管，OADC营养添加剂，PANTA杂菌抑制剂（上述仪器试剂均购自美国BD公司），高压灭菌的前处理液2%NALC-NaOH（试剂为本实验室自配），中山大学达安基因有限公司的荧光基因探针PCR检测仪及其配套的PCR试剂TB-DNA。抗酸染液珠海贝索有限公司，OLYMPUS-BX53显微镜，离心机，温箱等。
1.1.3处理方法与接种：①各类标本常规处理方法。严格执行Bacte cmGIT960系统操作手册相关标准程序进行实验操作。②各类标本改良处理方法。各类标改良本处理方法是对标本进行如下处理。
（1）混有杂菌较多的标本如痰、灌洗液、支气管刷取物等处理方法，痰标本首先加入到50 mL离心管中用生理盐水洗涤，然后离心弃上清。灌洗液、某些分泌物、支气管刷取物等直接加入到50 mL离心管中离心弃上清。将上述沉淀物用前处理液4%NALC-NaOH进行消化处理，将该处理后的标本参照Bacte cmGIT960系统操作手册中痰标本的处理方式进行处理，处理完毕后，将一部分样本接种到液体培养管内置Bacte cmGIT960快速分枝杆菌培养鉴定药敏仪中进行培养，将另一部分样本用蒸馏水洗涤1-2遍，取沉淀物制作至少两张涂片分别进行抗酸杆菌染色和革兰氏染色[4]。
（2）无菌标本如脑脊液，胸水等前处理方法，无菌体液应抗凝留取，根据无菌体液含有细胞，蛋白和其它有机物质的不同分为两种处理方法，第一种为肉眼看不到明显浑浊的标本，首先将标本离心，弃上清，然后用生理盐水洗涤一到两遍，将沉淀物用前处理液4%NALC-NaOH进行消化处理，向含有沉淀物的50 mL离心管中加入5-10 mL标本前处理液，震荡混匀15-20秒，在37℃温箱中静止10分钟左右，在这期间进行一次漩涡震荡，然后加入当日配制的pH值6.8无菌磷酸盐缓冲液约45 mL，颠倒混匀数次，设置离心力三千克离心二十分钟，弃去上清，向沉淀物加入无菌磷酸盐缓冲约2 mL并用振荡器震荡混匀，将一部分样本接种到液体培养管内置Bacte cmGIT960快速分枝杆菌培养仪中进行培养，将另一部分标本用蒸馏水洗涤1-2遍，取沉淀物涂片染色。第二种为含有大量细胞，蛋白和其它有机物质，首先将标本离心，弃上清，然后加入生理盐水少许，用吸管吸取沉淀物加入到组织研磨器内研磨，将研磨物加入到无菌50 mL离心管中离心管中，离心，弃上清。将沉淀物用生理盐水洗涤1-2遍，将沉淀物用前处理液4%NALC-NaOH进行消化处理，向含有沉淀物的50 mL离心管中加入5-10 mL标本前处理液，震荡混匀15-20秒，在37℃温箱中静止10分钟左右，在这期间进行一次漩涡震荡，然后加入当日配制的pH值6.8无菌磷酸盐缓冲液约45 mL，颠倒混匀数次，设置离心力三千克离心二十分钟，弃去上清，向沉淀物加入无菌磷酸盐缓冲约2 mL并用振荡器震荡混匀，将一部分样本接种到液体培养管内置Bacte cmGIT960快速分枝杆菌培养仪中进行培养，将另一部分标本用蒸馏水洗涤1-2遍，取沉淀物涂片染色。
（3）胃液标本的改良处理方法，将含有杂菌的标本用三千克离心力离心约五分钟，弃去上清后，将剩余标本用生理盐水洗涤1-2遍，如果沉淀物少于0.5 mL，可直接进入消化处理程序，如果沉淀物仍然较多超过0.5 mL，可用研磨器研磨沉淀物，再用生理盐水洗涤1-2遍，向沉淀中加入5 mL前处理液4%NALC-NaOH消化处理，震荡混匀15-20秒，在37℃温箱中静止10分钟左右，在这期间进行一次漩涡震荡，然后加入当日配制的pH值6.8无菌磷酸盐缓冲液约45 mL，颠倒混匀数次，设置离心力三千克离心二十分钟，弃去上清，向沉淀物加入无菌磷酸盐缓冲约2 mL并用振荡器震荡混匀，将一部分样本接种到液体培养管内置Bacte cmGIT960快速分枝杆菌培养仪中进行培养，将另一部分标本用蒸馏水洗涤1-2遍，取沉淀物涂片染色。
（4）尿液标本前处理方法，将标本用3000 g离心力离心15分钟，弃上清，向沉淀中加入5 mL前处理液4%NALC-NaOH消化处理，震荡混匀15-20秒，在37℃温箱中静止10分钟左右，在这期间进行一次漩涡震荡，然后加入当日配制的pH值6.8无菌磷酸盐缓冲液约45 mL，颠倒混匀数次，设置离心力三千克离心二十分钟，弃去上清，向沉淀物加入无菌磷酸盐缓冲约2 mL并用振荡器震荡混匀，将一部分样本接种到液体培养管内置Bacte cmGIT960快速分枝杆菌培养仪中进行培养，将另一部分标本用蒸馏水洗涤1-2遍，取沉淀物涂片染色。
（5）组织标本前处理方法，将标本破碎处理后，用生理盐水洗涤1-2遍，弃上清，将5-10 mL前处理液标本加入到50 mL离心管中，震荡混匀15-20秒，在37℃温箱中静止10分钟左右，在这期间进行一次漩涡震荡，然后加入当日配制的pH值6.8无菌磷酸盐缓冲液约45 mL，颠倒混匀数次，设置离心力三千克离心二十分钟，弃去上清，向沉淀物加入无菌磷酸盐缓冲约2 mL并用振荡器震荡混匀，将一部分样本接种到液体培养管内置Bacte cmGIT960快速分枝杆菌培养仪中进行培养，将另一部分标本用蒸馏水洗涤1-2遍，取沉淀物涂片染色。痰标本在前处理过程中进行震荡混匀后置于37℃水域箱中，目的是加速标本中各类有机物的液化速度，同时也可提高消除杀灭杂菌效能。如果胸水、脑脊液、腹水等无菌体液标本能在采集后两小时内进行接种，可用蒸馏水洗涤三遍，然后按照痰标本流程处理接种。否则因其含有大量有机成分如某些蛋白等，这些成分会与体液中的各类细胞相互作用形成凝块，包裹隔离致病性病原微生物，对致病性微生物培养的检出率、检出时间长短、污染率高低均有影响。
Bacte cmGIT960快速分枝杆菌培养鉴定药敏仪结果的判定和鉴别将Bacte cmGIT960快速分枝杆菌培养鉴定药敏仪中显示已报阳的标本取出，先将沉淀物进行抗酸涂片染色检查如为阳性同时TB-DNA检测阳性或者抗酸涂片染色检查为阳性，但是TB-DNA检测阴性而将培养物外送检测到非结核分枝杆菌则依然判断为阳性；培养至少6周未生长者，且进行抗酸涂片染色检查为阴性和TB-DNA检测阴性或外送的培养物未检测到分枝杆菌判断为阴性；如果发现仪器阳性报警且涂片中可以看到抗酸染色为红色短杆杆状，长短不一，圆点状，串珠状等形态细菌但是经过TB-DNA检测及外送分枝杆菌核酸检测为阴性则称为假阳性，假阳性标本中出现的抗酸成分多数是源于实验操作不规范等，只是非抗酸成分染成红色，如某写有机物染成非菌体样抗酸阳性物质或某些细菌，例如棒杆菌属、链霉菌属、纤维菌属等污染菌因脱色不良导致抗酸涂片阳性[5]。
2结果
在应用Bacte cmGIT960快速分枝杆菌培养鉴定药敏仪对分支杆菌进行培养时，常规标本处理方法和改良标本处理方法培养结果阳性率分别是26.61%，33.14%，表明两种方法对阳性标本检测的灵敏度都较高，而传统标本处理方法和改良处理方法培养结果阳性符合率分别是，77.49%，96.51%说明传统标本处理方法培养结果的灵敏度明显低于改良标本处理方法培养结果，采用配对资料的χ2检验分析两种处理方法对培养结果的影响，统计学分析显示，该差异有统计学意义（χ2=704.32，P<0.05）。
3讨论
该研究对保存的标本进行复活培养，利用质谱分析技术和分子生物学技术对复活后的培养物进行分类，发现有结核分枝杆菌、堪萨斯分枝杆菌、海分枝杆菌、瘰疬分枝杆菌、鸟-胞内分枝杆菌、偶发分枝杆菌、龟分枝杆菌、溃疡分枝杆菌、楚布分枝杆菌等共计11类，将不同种类分枝杆菌感染患者的实验室血液常规检查项目的各项数据进行回顾性分析并利用统计学方法进行相互分析比较，同事也和健康人的实验室检查的同类实验项目进行统计学分析比较，发现血常规、血沉、血液生物化学检测、抗结核抗体等实验结果对分枝杆菌感染诊断的特异性较低，临床诊断意义不大。
另外，通过分析研究微生物常规实验包括抗酸杆菌涂片检查、分枝杆菌传统培养以及应用BACTE cmGIT960全自动快速分枝杆菌培养鉴定药敏仪进行的分枝杆菌快速培养实验。发现上述各实验除对分枝杆菌感染具有特异性诊断价值外，对指导分枝杆菌感染的治疗有很重要意义，研究还发现BACTE cmGIT960全自动快速分枝杆菌培养鉴定药敏仪是目前在分枝杆菌感染诊治中意义最大的分枝杆菌培养药敏试验。该研究将应用BACTEC MGIT960全自动快速分枝杆菌培养鉴定药敏仪培养分枝杆菌的实验同分枝杆菌分子诊断实验分析比较发现，分子诊断在药敏方面不如BACTEC MGIT960全自动快速分枝杆菌培养鉴定药敏仪；本研究又将分枝杆菌快速培养实验同T-SPOT、质谱分析技术等实验进行分子比较均发现应用BACTEC MGIT960全自动快速分枝杆菌培养鉴定药敏仪进行分枝杆菌培养药敏实验是目前耗时最少，最精准，临床诊疗意义最大，最完善的分枝杆菌培养药敏实验。
参考文献
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[2]安月善,吴英子.应用BACTECMGIT960分枝杆菌检测系统对301例患者的分析[J].中国伤残医学,2013,21(11):302-303.
[3]吕纯芳,张涛,卢留珠,等.MGIT960分枝杆菌液体快速培养前处理方式的临床评价[J].临床肺科杂志,2017.22(03):520-523.
[4]廖东宁,刘庆华,石晓婷,等.金胺O荧光染色LED镜检结核分枝杆菌的假阳性研究[J].社区医学杂志.2017.17(05):29-31.
[5]钱雪琴,曹宇硕,曹竹君,等,沈芳.BACTECMGIT960系统培养分枝杆菌时污染菌的分析[J].中国卫生检验杂志.2014.24(17):2498-2501+2504.
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