摘要：目的探讨月经血结核分枝杆菌荧光定量PCR检测(fluorescent quantitative PCR,FQ-PCR)联合血清糖类抗原12-5（CA12-5）对女性生殖器结核(female genital tuberculosis，FGT)的诊断价值。方法回顾性分析2018年1月—2021年12月本院收治的160例输卵管性及不明原因不孕、复发性流产者，根据内镜下所见表现及病理检测结果，分析月经血结核分枝杆菌FQ-PCR及外周血清CA12-5含量（<35U/L）的检测效能，同时比较与血清结核分枝杆菌FQ-PCR阳性率及检测时长方面的优势。结果FQ-PCR及CA12-5联合检测对生殖器结核漏诊率为12.82%，低于月经血结核分枝杆菌FQ-PCR检测单独检测的64.10%与CA12-5的35.90%以及血清结核分枝杆菌FQ-PCR的7.18%，同时联合检测时间低于常规检查（培养及胸腔镜下检查）时间（均P<0.05）。结论无创月经血结核分枝杆菌FQ-PCR检测联合外周血清CA12-5在女性生殖器结核诊断方面较单一检测手段诊断效能高，漏诊率低，缩短检测时长，具有一定的临床实用价值。
关键词：女性生殖系统结核,月经血结核分枝杆菌,糖类抗原12-5,诊断价值,输卵管性不孕,荧光定量
0引言
生殖器结核在性成熟及生育期的女性中较为常见，且多数患者在发病时，其原发病灶已恢复。尽管如此，生殖器结核仍是发展中国家导致女性不孕的重要因素之一[1-2]。结核分枝杆菌是导致女性生殖器结核的主要原因，其中输卵管、子宫内膜和卵巢是主要的受累部位，而阴道和外阴的结核则较为罕见[3-4]。大多数患者感染结核的最初阶段并无明显临床症状，因此被忽略和误诊，但随着疾病进展，经宫腹腔镜检查可发现不可逆的严重结核性输卵管和盆腔病变从而影响生殖功能[5]。由于缺乏特异临床表现以及很难获取标本进行细菌病原学检测，在不孕妇女中诊断生殖器结核也是一项严峻的挑战[6]。目前生殖器结核多集中于有创宫腹腔镜检查，限制了其临床的应用。而间接高效的无创检查手段是早期诊断生殖器结核的重要辅助方法。既往的研究证实了结核分枝杆菌荧光定量PCR在诊断结核具有良好的诊断价值，但不同标本的阳性率差异较大，且在生殖器结核方面研究较少，同时临床工作中缺乏相对有效的血清学客观性指标辅助诊断[7]。CA12-5作为妇科肿瘤的血液学标志物已被广泛熟知，同时最新的研究结果显示了CA12-5在妇科结核患者的外周血同样存在异常表达，可辅助生殖器结核的诊断[8]。
1资料及方法
1.1一般资料
回顾性分析2018年1月—2021年12月本院收治的160例输卵管性及不明原因不孕、复发性流产者，通过内镜下表现及病理结果分为对照组（n=82）与观察组（生殖器结核，n=78）。
纳入标准：①年龄18~50周岁；②自愿接受所有检查者；③既往未接受结核相关治疗者；本院伦理委员会通过该项研究。排除标准：①孕妇及哺乳期妇女；②合并免疫系统疾病者；③肝、肾功能不全者；④合并HIV、梅毒及相关性传染病者；⑤既往诊断生殖器结核者复发者；⑥合并其他系统结核病者。
1.2方法
1.2.1月经血及血清结核分枝杆菌FQ-PCR
患者月经来潮第1~3d，置阴道窥器，用1mL注射器吸取月经血1~2mL，同时通过患者静脉获取同等量静脉血，月经血、静脉血均与10mL NH4CL溶液混匀，静置30min，2500r／min，离心10min，离心后取沉淀-20℃冷冻备用。取40uL沉淀加40uL DNA提取液，振荡吹打混匀，100℃水浴10min，室温静置1h，13000r/min离心10min，取上清液10uL加入反应体系，再按荧光定量PCR试剂盒常规操作，≥50Copy即判断为阳性。DNA提取试剂盒购于德国默克公司，荧光定量PCR试剂盒购于中山大学达安基因股份有限公司，采用美国伯乐公司生产的CFX96型荧光定量PCR仪进行检测。
1.2.2血清CA12-5检测
清晨空腹状态抽取肘正中静脉血3~5mL,室温下静置20min，3000r/min离心10min，分离上层血清置于真空管-80℃保存。两组患者血清CA12-5水平采用电化学发光免疫法检测,操作方法及步骤严格遵循仪器及试剂说明书，CA12-5正常值<35U/L。
1.3金标准的判断
常规术前检查无异常者在月经干净后3~7d住院，采用腹腔镜下生殖器及其附属结构进行检查，同时送检异常病理改变，如粟粒状结节、干酪样改变、盆腔广泛粘连钙化、输卵管增粗僵硬等，最终以镜下表现结合病理结果结合可确诊生殖器结核。内膜结核者宫腔镜下可见内膜不均匀灰白色或干酪状增生，血管丰富迂曲，严重者可见内膜瘢痕化，宫腔粘连，将异常组织送病理检查，镜下见典型结核结节即可诊断为内膜结核。根据金标准诊断结果即内镜和组织病理学检查确认生殖系统结核阳性者为观察组，阴性者为对照组。分析月经血结核分枝杆菌FQ-PCR检测联合CA12-5单独检测与联合检测对生殖器结核的漏诊率。漏诊标准：病理检查确诊者未被检出即为漏诊，联合检测指两种检测方式均未检出病理检查确诊者即为漏诊，同时计算两种方法诊断曲线下面积。
1.4数据统计
所有数据均使用SPSS 22.0统计学分析软件对其进行分析，计量资料采用平均数±标准差（x—±s）表示，组间计量比较采用独立样本t检验，基数资料用n表示，组间率的比较采用卡方检验，以d=0.05为检验标准，P<0.05为差异有统计学意义。采用ROC曲线法评估月经血结核分枝杆菌FQ-PCR检测、血清结核分枝杆菌FQ-PCR、CA12-5单独检测与两者联合检测对生殖器结核的诊断价值。
2结果
2.1两组患者基线资料比较
经内镜和组织病理检查结果确认，阳性患者78例，阴性患者82例，本研究结果显示，两组患者在年龄、不孕年限、体质指数、月经周期、流产次数以及不孕类型方面比较，差异无统计学意义（P>0.05）。详见表1。
2.2不同诊断方法对生殖器结核漏诊率比较
联合检测对生殖器结核的漏诊率为12.82%，低于月经血结核分枝杆菌FQ-PCR检测单独检测为64.10%，外周血结核分枝杆菌FQ-PCR70.51%与CA12-5单独检测的35.90%。详见表2。
2.3两组患者CA12-5、月经血结核分枝杆菌FQ-PCR阳性率比较
如表3所示，观察组患者CA12-5、月经血结核分枝杆菌FQ-PCR的阳性率均高于对照组（P<0.05）。
2.4 CA12-5、月经血结核分枝杆菌FQ-PCR以及两者曲线下面积及诊断价值
血清CA12-5检测的敏感性为64.10%(50/78)，特异性为69.5%(57/82)；血结核分枝杆菌FQ-PCR检测的敏感性、特异性分别为35.90%(28/78)、93.90%(77/82),两者的联合检测敏感性为94.87%(74/78)、特异性为65.85%(54/82)，敏感度高于外周血结核分枝杆菌FQ-PCR的28.20%（22/78），特异度低于外周血结核分枝杆菌FQ-PCR的87.80%（72/82）。二者联合检测对盆腔结核的诊断曲线下面积为0.947，高于其他任何一种单独检测的诊断价值（P<0.05）。而特异性的组间比较则无统计学意义（P>0.05）。详见表4。
2.5不同检测方法时长比较
本研究结果显示，外周血及月经血结核分枝杆菌FQ-PCR的检测时间小于CA12-5、常规培养及金标准检测，组间差异有统计学意义（P<0.05），见表5。
3讨论
伴随着多重耐药细菌结核分枝杆菌的产生，加之抗生素不合理应用及免疫抑制相关疾病治疗等原因，目前结核分枝杆菌相关感染疾病的发生率呈逐年升高的趋势[9-10]。正常机体自身免疫系统无法对抗感染结核分枝杆菌，而一旦干预措施无法及时应用，则会导致结核分枝杆菌大量繁殖并引起结核疾病，所有器官系统均可遭受侵犯，其中以肺结核最为常见，生殖器结核为常见的肺外结核，最新的数据显示了其占到肺外结核总数的10%以上，也是导致生育疾病的主要病因，故早期诊断生殖器结核对此类患者具有重要的临床意义[11-12]。
有效的无创筛查是早期诊断生殖器结核疾病的主要手段。近年来分子生物学检测方法广泛应用于临床，PCR技术通过扩增结核分枝杆菌DNA，已被证实可用于生殖器结核的快速诊断[13-14]，特别是荧光定量PCR技术是用荧光标记探针实现定量功能，据报道不仅具有普通PCR的高敏感性，且由于荧光探针的应用，还具有DNA杂交的高特异性和光谱技术的高精确性，克服了常规PCR的许多缺点，缩短了诊断时间，提高了诊断效率，缺点是可能存在一定假阳性率[15-17]。而本研究结果也显示月经血PCR敏感性、特异性数据与相关研究相符合，提示月经血结核分枝杆菌FQ-PCR其具有良好的诊断价值[18-20]。
生殖器结核临床症状多无特性表现，而采集月经血PCR检测技术对操作者相关技术要求较高，同时漏诊率较高，故采用联合诊断可提高临床诊断效能。CA12-5作为妇科肿瘤诊断的重要血液学标志物已广泛应用于临床诊断中[21-22]。有学者在甄别肿瘤与结核中发现，生殖器结核患者外周血中同样存在异常表达，故其可应用于临床生殖器结核的辅助诊断工作中。同时本研究结果显示了CA12-5诊断生殖器相关诊断效能，同样具有良好的实践价值，佐证了既往的研究结论[23-24]。
研究进一步分析月经血结核分枝杆菌FQ-PCR与CA12-5联合诊断生殖器结核相关效能显示，其阳性率、曲线下面积提示其具有良好的诊断价值，此外，联合诊断生殖器结核的漏诊率较低，初步提示了两者联合诊断可进一步提高临床生殖器结核的早期诊断率，减少漏诊率，既往学者也存在类似的研究结论，此外，基于PCR检测的快捷特性，月经血分枝杆菌联合CA12-5的检测时长明显低于常规检测时间，极大地提高了生殖器结核的早期诊断性[25]。
综上所述，月经血结核分枝杆菌FQ-PCR与CA12-5联合诊断应用生殖器结核领域，可减少疾病的漏诊率，提高诊断的阳性率及特异性，并缩短检测时间，可在临床辅助疾病的诊断。
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