摘要：目的建立碳酸司维拉姆磷酸盐结合能力的离子色谱（IC）测定方法。方法采用赛默飞AS11-HC离子色谱柱（250mm×4mm），淋洗液为10mmol/L氢氧化钾溶液，检测器为电导检测，抑制电流为25mA，流速为1.0mL/min，柱温为25℃,进样体积为25μL。结果磷酸根在0.10~0.18mmol/L范围内的线性良好（r=0.9999），碳酸司维拉姆磷酸盐结合能力的测定结果为5.6mmol/g，RSD为0.8%。结论本法快速、准确、可靠，可用于碳酸司维拉姆磷酸盐结合能力的测定。
关键词：碳酸司维拉姆,磷酸盐结合能力,离子色谱法
0引言
碳酸司维拉姆（sevelamer carbonate）是一种临床上用于治疗高磷血症的非吸收性的磷酸盐结合剂，于2007年在美国获得批准上市，于2013年获准进入我国。国内外已有多个碳酸司维拉姆仿制制剂上市销售，包括片剂和口服干混悬剂等不同剂型。为此，研发适宜的检测方法以评估碳酸司维拉姆的磷酸盐结合能力，将有助于更加严格地控制产品的有效性和关键质量指标。离子色谱法作为一种液相色谱分析技术，自20世纪70年代以来得到了广泛应用，常用于无机阴离子和无机阳离子的定性和定量分析，具有灵敏度高、检测快速、操作方便、使用溶剂环保等优势。离子色谱法的分离原理主要是进行离子交换，即基于离子交换色谱柱上的离子与淋洗液中具有相同电荷的溶质离子之间进行的可逆交换；除此之外，还有形成离子对和离子排阻等其他分离机理[2-3]。
本次试验采用离子色谱法，在37℃条件下，将碳酸司维拉姆片的粉末置于约20mmol/L的磷酸盐储备液（加入一定量的氯化钠溶液和BES缓冲液）中进行结合反应，取反应后的溶液稀释100倍后注入离子色谱仪，以外标法先计算得出磷酸根浓度，再计算得出碳酸司维拉姆片的磷酸盐结合能力，以mmol/g计。
1仪器与试剂
仪器：THERMO SCIENTIFIC ICS-5000A+离子色谱仪，电导检测器，Dionex AERS 500 4mm阴离子抑制器，DIONEX ICS-5000+EG淋洗液自动发生装置，Chromeleon工作站，梅特勒XS105 DualRange天平，IKA RET control-visc加热搅拌器。
试剂：碳酸司维拉姆（编号：202201,202202,202203），BES（来源：Alfa Aesar，批号：10234640，含量：99%），氯化钠（来源：中国计量科学研究院，批号：17071，含量：99.96%），磷酸二氢钾（来源：广州化学试剂厂，批号：20220301-08，含量：99.5%），超纯水（由Milli-Q超纯机制备）。
2方法与结果
2.1色谱条件
色谱柱为Dionex IonPacTM AS11-HC离子色谱柱（250mm×4mm），淋洗液为10mmol/L氢氧化钾溶液，检测器为电导检测，抑制电流为25mA，流速为1.0mL/min，色谱柱温为25℃,进样体积为25μL[4-5]。
2.2磷酸盐储备液的制备
分别精密称取磷酸二氢钾约2.722 7 g，BE S 21.33g，氯化钠4.67g，置1000mL量瓶中，加水约900mL超声使溶解，用50%氢氧化钠溶液调节pH值至6.95，用水稀释至刻度，摇匀，即得约为20mmol/L的磷酸根离子溶液，平行制备两份。
2.3对照品溶液
精密量取2.2中磷酸盐储备液7mL，置1000mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。
2.4供试品溶液的制备
精密称取碳酸司维拉姆约0.138g，置250mL锥形瓶中，精密加入磷酸盐储备液100mL，置加热搅拌器上，设置温度37℃,加热搅拌2h后，精密量取续滤液1mL，置100mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，用0.22μm孔径滤膜滤过，取续滤液，即得。
2.5专属性试验
分别取水，BES缓冲液，氯化钠溶液，磷酸盐储备液进样，色谱图见图1。磷酸根保留时间为15.6min，无干扰，专属性良好。
2.6定量限与检出限
精密量取2.2中磷酸盐储备液7mL，置1000mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取1mL，置100mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取3mL，置50mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，注入离子色谱仪，计算定量限和检出限，经测定，磷酸根的定量限和检出限分别为6.4×10-5mmol/L和1.9×10-5mmol/L。
2.7线性关系考察
精密量取磷酸盐储备液5mL、6mL、7mL、8mL和9mL，分别置1000mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，进行测定。以磷酸根浓度（mmol/L）为横坐标，以磷酸根峰面积作为纵坐标，绘制曲线，得线性回归方程Y=9.633X-0.0847，r=0.9999（n=5）。结果表明，磷酸根在0.1~0.2mmol/L范围内线性关系良好。
2.8精密度试验
精密量取磷酸盐储备液7mL，置1000mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为精密度试验溶液，连续进样6次，记录磷酸根峰面积，RSD（n=6）为0.4%。
2.9重复性试验
精密称取碳酸司维拉姆约0.138g，置250mL锥形瓶中，精密加入磷酸盐储备液100mL，置加热搅拌器上，设置温度37℃,加热搅拌2h后，精密量取续滤液1mL，置100mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，0.22μm滤膜滤过，取续滤液，作为供试品溶液，平行制备6份，进行测定，记录6份的磷酸根峰面积，计算磷酸盐结合能力，平均值为5.557mmol/g，RSD（n=6）为0.8%。
2.10回收率试验
精密称取碳酸司维拉姆约0.138g(已测得磷酸盐结合能力)，共9份，置250mL锥形瓶中，分别精密加入约16mmol/L的磷酸盐储备液、约20mmol/L的磷酸盐储备液、约24mmol/L的磷酸盐储备液各100mL，每个浓度平行制备3份，置加热搅拌器上，设置温度37℃,加热搅拌2h后，精密量取续滤液1mL，置100mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，0.22μm滤膜滤过，取续滤液，作为回收溶液，进行测定，计算回收率均值为100.07%，RSD（n=9）为0.3%。详见表1。
2.11样品的测定
精密称取碳酸司维拉姆约0.138g，置250mL锥形瓶中，精密加入磷酸盐储备液100mL，置加热搅拌器上，设置温度37℃,加热搅拌2h后，精密量取续滤液1mL，置100mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，0.22μm滤膜滤过，取续滤液，作为供试品溶液，平行制备6份，进行测定，记录6份的磷酸根峰面积，计算磷酸盐结合能力。三个批次的结果分别为5.41mmol/g、5.44mmol/g、5.56mmol/g。
3结果与讨论
3.1淋洗液的选择
在选择淋洗液时，实验对比了赛默飞离子色谱仪自带氢氧化钾淋洗液和手动配制的10mmol/L氢氧化钠淋洗液，结果表明，在OH-浓度相同时，磷酸根的出峰时间基本一致。故，为了方便操作，减少误差，提高重现性，本次实验采用仪器自带淋洗液装置，调节为10mmol/L氢氧化钾，进行测定。
3.2色谱条件的选择
因本次制备溶液中，除目标测定离子磷酸根外，同时存在Na+、Cl-、K+、HSO3-等离子，拟定色谱系统需将所有离子有效分离。因此，在前期实验过程中，考察三种不同淋洗液浓度，分别为10mmol/L氢氧化钾淋洗液，20mmol/L氢氧化钾淋洗液和25mmol/L氢氧化钾淋洗液，同时考察三种不同色谱柱温度，分别为25℃、30℃和35℃。结果发现，磷酸根随着淋洗液浓度的降低，在色谱柱中的保留显著变好，且各离子间的分离效果得到改善；磷酸根随着色谱柱温度的升高，出峰时间也略有增大。试验最终选择淋洗液为10mmol/L的氢氧化钾溶液，色谱柱温为25℃,作为碳酸司维拉姆磷酸盐结合能力的测定条件。
参考文献
[1]魏赫,李雪梅.碳酸司维拉姆仿制药药学研发探讨[J].中国药学杂志,2023,58(11):1045-1048.
[2]刘冰冰,刘佳,张辰凌,等.离子色谱法同时测定地下水中8种无机阴离子[J].化学分析计量,2020,29(6):28-32.
[3]国家药典委员会.中华人民共和国药典:四部[M].北京:中国医药科技出版社,2020:65.
[4]吕丽娟,姜瑛,王永福,等.离子色谱法测定碳酸司维拉姆中氯化物[J].现代药物与临床,2013,28(5):724-726.
[5]张洁,胡泽锴,陈霞.离子色谱法测定唑来膦酸中的磷酸与亚磷酸[J].华西药学杂志,2021,36(6):706-708.
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