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【摘要】目的 探讨循环肿瘤细胞（CTCs ）和循环肿瘤微栓（CTM ）在鼻咽癌（NPC ）中的表达， 为该疾病的诊治提供有效依据。方 法 回顾性分析 2020 年 8 月至 2021 年 8 月贵州医科大学附属肿瘤医院收治的 122 例疑似 NPC 患者的临床资料， 按病理学检查结果的不 同分为鼻咽部慢性炎症组（30 例）与 NPC 组（92 例）。两组患者均采用 CTC-Biopsy® 系统检测 CTCs 与 CTM ，采用 Diff-Quick 染色法 对细胞进行形态学鉴定。比较两组患者 CTCs 、CTM 的表达差异， NPC 组 CTCs 、CTM 阳性和阴性患者临床资料的差异， 采用 Spearman 相关系数法分析 NPC 患者 CTCs 、CTM 阳性率与肿瘤 N 分期、 EB 病毒 DNA（EBV-DNA ）的相关性。结果 NPC 患者 CTCs 阳性率为 67.39%（62/92）， CTM 阳性率为 56.52%（52/92），鼻咽部慢性炎症患者 CTCs 阳性率为 0.00%（0/30）； NPC 组患者中， CTCs 阳性患 者 N2~N3 期占比高于 CTCs 阴性， EBV-DNA 阳性患者占比高于 CTCs 阴性（均 P<0.05 ）；NPC 患者 CTCs 阳性率在性别、年龄、病理类 型、 T 分期、临床分期中， 差异均无统计学意义（均 P>0.05 ）；NPC 组患者中， CTM 阳性患者 N2~N3 期占比高于 CTCs 阴性， EBV-DNA 阳性患者占比高于 CTCs 阴性（均 P<0.05 ）；NPC 患者 CTM 阳性率在性别、年龄、病理类型、 T 分期、临床分期中， 差异均无统计学意 义（均P>0.05 ）。结论 NPC 患者外周血中 CTCs 阳性与 N 分期及 EBV-DNA 密切相关， CTM 阳性与 N 分期、 EBV-DNA 密切相关， 且 外周血中 CTM 阳性，常常可提示肿瘤恶化、复发、转移的可能性越高，可作为 NPC 的辅助评价指标。
【关键词】鼻咽癌; 循环肿瘤细胞; 循环肿瘤微栓
鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma, NPC）是指原发于 鼻咽部黏膜上皮的恶性肿瘤，多发生于鼻咽顶壁和内侧， 尤其是咽隐窝，其发生率主要与病毒感染、遗传、环境 等因素有关，是耳鼻喉科头颈肿瘤疾病中常见的恶性肿 瘤之一。多数 NPC 患者以颈部出现肿块为首发症状，由 于 NPC 早期症状不明显，多数患者确诊时已进入进展期 或晚期。目前，EB 病毒血清抗体标志物与血浆 EB 病毒 DNA（EBV-DNA）检测均可用于 NPC 的早期筛查，但其 特异度较低，且影像学检查也存在一定局限性 [1] 。循环 肿瘤细胞（CTCs）是一种新兴的肿瘤特异性生物标志物， 是指由肿瘤原发灶或转移灶脱落进入血液循环系统的肿 瘤细胞，在胃癌、乳腺癌、非小细胞肺癌等恶性肿瘤的诊 断、治疗及预后监测中逐渐被临床应用和推广 [2] 。研究指 出，部分 CTCs 可逃离机体免疫识别或药物治疗，在体内 寻找合适的微环境，形成“种子”在远端组织器官或原发组织种植生长，导致肿瘤的转移或复发 [3] 。循环肿瘤微栓 （CTM）是指多个 CTCs 同类聚集或与其他种类细胞聚集 形成的细胞团，在血液中，CTM 会减缓血流速度，可成为 血液中凝血酶形成的平台，形成血栓栓塞 [4] 。相比单个形 式存在的 CTCs，CTM 更易避免肿瘤细胞凋亡，且更易发 生免疫逃逸，生存力更强，放化疗耐受性更好，转移风险 更高 [5] 。目前 CTCs 与 CTM 在 NPC 患者中的临床研究报 道较少。因此，本研究旨在探讨 CTCs 与 CTM 在 NPC 中 的表达及其临床意义，现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料 回顾性分析 2020 年 8 月至 2021 年 8 月 贵州医科大学附属肿瘤医院收治的 122 例疑似 NPC 患 者的临床资料，按病理学检查结果的不同分为鼻咽部慢 性炎症组（30 例）与 NPC 组（92 例）。鼻咽部慢性炎症组患者中男性 15 例，女性 15 例；年龄 18~63 岁，平均 （46.56±5.86）岁。NPC 组患者中男性 48 例，女性 44 例； 年龄 22~75 岁，平均（48.52±7.79）岁。诊断标准：参照 《实用耳鼻咽喉头颈外科学》 [6] 中的相关诊断标准。纳入 标准：①符合上述诊断标准且经常规病理检查确诊；②未 接受相关化疗与靶向治疗等抗肿瘤治疗；③临床资料完 整。排除标准：①合并免疫疾系统疾病；②进行放化疗 和（或）生物靶向治疗；③长期使用非甾体类抗炎类药 物。本研究经贵州医科大学附属肿瘤医院医学伦理委员会 批准。
1.2 研究方法
1.2.1 病理学检测和分型 取所有患者组织样本，均使用 10% 福尔马林进行固定并石蜡包埋切片后，经病理科诊 断疾病类型，并进行病理分型。
1.2.2 外周血 CTCs 与 CTM 的检测 采用 CTC-Biopsy® 系统检测所有患者外周血 CTCs 与 CTM 情况，采集所有 患者外周静脉血约 8 mL，其中 5 mL 立即置于抗凝真空采 血管并轻柔颠倒混匀 8 次以避免凝血，采用 3 mL 0.2% 的 多聚甲醛缓冲液进行稀释，室温下静置 10 min 后经直径 为 8 μm 的圆孔膜过滤，分离并富集 CTCs，用 Diff-Quick 染色富集到的 CTCs，风干并封片。处理样本要求：血液 样本需在 2 h 内完成检测，若不能在 2 h 内进行检测，则 需竖直静置于 4 °C 冰箱保存，保存时间不能超过 24 h， 处理前至少在室温环境复温 30 min。CTCs 判定标准 [7]： 细胞核不规则，呈现杆状、分叶状、马蹄形状、肾形、 卵圆形状；核质比大于 0.8 ；核直径大于 15 μm；核仁突 出、深染且着色不均匀；核膜增厚出现凹陷或皱褶，核 膜呈锯齿状；细胞核染色质边移或巨大核仁、异常核分 裂。CTM 判定标准： 3 个及 3 个以上的 CTCs 成团 [7] 。所 有患者 CTCs、CTM 结果的判定均由 3 名资深细胞病理学 家在不了解患者临床资料和病理诊断的情况下独立评估和 判读。
1.2.3 NPC 患者 EBV 感染情况 将 1.2.2 中采集的剩余 3 mL 外周静脉血采用荧光定量聚合酶分析法检测 NPC 患 者 EBV-DNA 感染情况，以拷贝数 >500 拷贝 /mL 计为 阳性 [8]。
1.3 观察指标 ①比较两组患者 CTCs 阳性率与 CTM 阳 性率。②比较 NPC 组 CTCs、CTM 阳性和阴性患者的临床 特征，收集所有患者性别、年龄、病理类型、T 分期、N 分 期、临床分期、EBV-DNA，并进行分析。T 分期标准：TX 为原发肿瘤无法评价； T0 为无原发肿瘤存在证据，包含颈 部淋巴结 EBV 阳性；T1 为肿瘤局限于鼻咽部，或侵犯口 咽和（或）鼻腔；T2 为肿瘤侵犯咽旁间隙，和（或）邻近 软组织（包括翼内肌、翼外肌、椎前肌）；T3 为肿瘤侵犯颅底、颈椎、翼状结构，和（或）鼻旁窦； T4 为肿瘤颅内 侵犯，侵犯颅神经、下咽部、眼眶、腮腺和（或）翼外 肌侧缘软组织浸润。N 分期标准：NX 为区域淋巴结无法评 价；N0 无区域淋巴结转移；N1 为单侧颈部淋巴结转移，和 （或）单侧、双侧咽后淋巴结转移，转移灶最大径≤6 cm， 在环状软骨下缘以上；N2 为双侧颈部淋巴结转移，转移灶 最大径≤6 cm ，在环状软骨下缘以上；N3 为单侧或双侧颈 部淋巴结转移，转移灶最大径 >6 cm，和（或）侵犯超过 环状软骨下缘 [8]。③相关性。采用 Spearman 相关系数法 分析 NPC 患者 CTCs、CTM 阳性率与 N 分期、EBV-DNA 的相关性。
1.4 统计学方法 采用 SPSS 23.0 统计学软件分析数据， 计数资料以 [ 例 (%)] 表示，采用 χ2 检验；采用 Spearman 相关系数法分析 NPC 患者 CTCs、CTM 阳性率与 N 分 期、EBV-DNA 的相关性。以 P<0.05 为差异有统计学 意义。
2 结果
2.1 两组患者 CTCs 和 CTM 的表达差异 NPC 患者 CTCs 染色可见核型异常，胞核呈分叶状，见图 1，CTCs 阳性率 67.39%（62/92），高于鼻咽部慢性炎症组中 CTCs 阳性率为 0.00%（0/30），差异有统计学意义(χ2=41.109， P<0.05 ）。NPC 患者 CTM 染色可见存在 3 个和 3 个以 上 CTC 构成的小细胞团，见图 2，CTM 阳性率为 56.52% （ 52/92），高于鼻咽部慢性炎症组中 CTM 阳性率 0.00% （0/30），差异有统计学意义(χ2=29.553，P<0.05 ）。
2.2 NPC 组 CTCs 阳性和阴性患者临床特征分析 NPC 组患者中，CTCs 阳性患者 N2~N3 期占比高于 CTCs 阴性， EBV-DNA 阳性患者占比高于 CTCs 阴性，差异均有统计 学意义（均P<0.05）；NPC CTCs 阳性和阴性患者在性别、 年龄、病理类型、T 分期、临床分期方面比较，差异均无 统计学意义（均P>0.05），见表 1。
2.3 NPC 组 CTM 阳性和阴性患者临床特征分析 NPC 组患者中，CTM 阳性患者 N2~N3 期占比高于 CTCs 阴性， EBV-DNA 阳性患者占比高于 CTCs 阴性，差异均有统计 学意义（均P<0.05）；NPC CTM 阳性和阴性患者在性别、 年龄、病理类型、T 分期、临床分期方面比较，差异均无 统计学意义（均P>0.05），见表 2。
2.4 相关性 经 Spearman 相关性分析显示，NPC 患者 CTCs 阳性与 N 分期、EBV-DNA 阳性均呈正相关（r=0.259、 0.232 ）；NPC 患者 CTM 阳性与 N 分期、EBV-DNA 阳性均 呈正相关（ r=0.247、0.337），差异均有统计学意义（均 P<0.05），见表 3。
3 讨论
NPC 是一种对放射敏感性的肿瘤， 由于其解剖位置特 殊，早期缺乏特异性症状与有效的诊断方法，从而不易被诊断。早诊断、早治疗是降低 NPC 患者病死率、提高生存 率的关键。传统肿瘤疾病主要通过组织活检和影像学检查 结果进行诊断。影像学检查只能发现直径 >5 mm 的肿瘤， 对微小瘤体诊断的准确率较低 [9] 。在肿瘤的形成、发展过 程中，部分肿瘤细胞由原发灶或转移灶脱落进入外周血 液， 因此， 外周血 CTCs 的检测可有效用于体外早期诊断， 与传统组织病理活检相比，CTCs 检测具有无创、便捷等 优点，目前已被广泛应用于肿瘤疾病的诊断与患者的预后 评估 [10]。
CTCs 在 NPC 患者疾病进展过程的各个阶段表达不 同，因此检测外周血中的 CTCs 对鼻咽癌的早期筛查与诊 断均具有积极作用 [11]。CTCs 具有不同的细胞表型， 包括上 皮细胞型 CTCs、上皮与间质细胞混合型 CTCs 和间质细胞 型 CTCs，细胞表型可有效反映肿瘤细胞的恶性程度， 其中 间质细胞型 CTCs 较其他表型 CTCs 具有更强的迁移和侵 袭能力 [12]。CTCs 以不同形态存在于外周血， 3 个及 3 个以上 CTCs 构成的细胞簇称为 CTM，在恶性肿瘤的转移中具 有重要作用， 且 CTM 比 CTC 更具侵袭性、转移潜能及对 凋亡的抵抗力 [13]。本研究结果显示， 鼻咽部慢性炎症患者 外周血液中均未检测到 CTCs 与 CTM，NPC 患者 CTCs 阳 性率为 67.39%，CTM 阳性率为 56.52%，与吴君心等 [14] 研 究结果一致。
本研究进一步对患者的临床特征资料分析，结果显 示， NPC 患者中，CTCs、CTM 阳性患者 N2~N3 期占比高 于阴性患者，EBV-DNA 阳性患者占比高于阴性患者，提 示 NPC 患者外周血中 CTCs、CTM 阳性均与患者 N 分期、 EBV-DNA 密切相关， NPC 患者中N 分期越高且EBV-DNA 阳性的患者有较高的 CTCs 和 CTM 阳性率。T、N 分期 是影响 NPC 患者治疗的重要因素，目前临床主要通过影 像学技术对 NPC 患者诊断与 T、N 分期进行判定，但影 像学的迟滞性和不稳定性导致不能对 NPC 的疗效及时评 估 [15]。CTCs 检测在 NPC 患者的诊断与临床分期中具有一 定优势，可避免组织病理学和影像学检测的局限性，同时 能反映肿瘤整体异质性的特征，尤其是对于已发生转移的 患者 [16]。
肿瘤在无淋巴结和远处转移时， 可在外周血液循 环中检测到 CTCs，因其从原发灶脱落， 通过侵袭、迁移和 入侵血管等方式进入血液循环，极易通过血液循环而转移 到全身其他器官，因而可通过检测外周血中 CTCs 了解患 者病情恶化、转移情况 [17]。
在 NPC 的发生发展中，CTCs 和 EB 病毒的活化状态 受环境因素的影响，且放化疗等抗肿瘤治疗也将影响CTCs 与 EB 病毒的相互作用。EB 病毒对 NPC 患者的诊断、复 发、转移的检测具有重要意义， 外周血中 CTCs 数量与 EB 病毒的载量呈正相关， EB 病毒的负荷越大， 外周血中检测 出的 CTCs 数量则越多 [18]。本研究中， 经 Spearman 相关性 分析显示，NPC 患者 CTCs 阳性率与 N 分期、 EBV-DNA 阳性均呈正相关（r=0.259、0.232 ）；NPC 患者 CTM 阳性率 与N 分期、EBV-DNA 阳性均呈正相关（r=0.247、0.337 ）， 说明 NPC 患者与 EB 病毒感染高度相关，外周血中 CTM 阳性，则肿瘤恶化、复发、转移的可能性较高。
综上， NPC 患者外周血 中 CTCs 阳性与 N 分期及 EBV-DNA 密切相关，CTM 阳性与 N 分期、 EBV-DNA 密 切相关，CTCs 和 CTM 可作为 NPC 早期诊断和预后的辅 助评价指标。
参考文献
[1] 周睿 , 朱婧 , 张涛 . EB 病毒 DNA 检测在鼻咽癌中的应用及研究 进展 [J]. 现代肿瘤医学 , 2019, 27(21): 3902-3905.
[2] ZHANG J, SHI H, JIANG T, et al. Circulating tumor cells withkaryotyping as a novel biomarker for diagnosis and treatment ofnasopharyngeal carcinoma[J]. BMC Cancer, 2018, 18(1): 1133.
[3] SI Y, LAN G, DENG Z, et al. Distribution and clinical significance of circulating tumor cells in nasopharyngeal carcinoma[J]. Jpn J ClinOncol, 2016, 46(7): 622-630.
[4] 李文卿 , 丁怡 , 姜雨 , 等 . Twist 对EMT 调控在循环肿瘤细胞监测 与抗癌药物评价中的临床意义 [J]. 中国肿瘤临床 , 2016, 43(17):770-774.
[5] 曾蕾 , 杨凯旋 . 循环肿瘤细胞的检测及其在鼻咽癌中的研究进 展 [J]. 中国全科医学 , 2021, 24(8): 1022-1027.
[6] 黄选兆 , 汪吉宝 , 孔维佳 . 实用耳鼻咽喉头颈外科学 [M]. 北京 : 人民卫生出版社 , 2008: 306, 342-346.
[7] 卞修武 , 刘东戈 , 张波 . 循环肿瘤细胞病理学图鉴与应用 [M].武 汉 : 华中科技大学出版社 , 2017: 29-44.
[8] 洪明晃 , 郭翔 . 鼻咽癌 [M]. 北京 : 中国医药科技出版社 , 2003:54-56, 174-185.
[9] 邓伟明 , 韦嘉章 , 李敏 , 等 . 循环肿瘤细胞检测在鼻咽癌诊疗中 的研究进展 [J]. 医学综述 , 2021, 27(23): 4719-4724.
[10] CHEN Z, XU L, XU X, et al. The clinical value of detecting circulating tumour cells in the peripheral blood of nasopharyngealcarcinoma patients[J]. Oncol Lett, 2018, 15(5): 6283-6290.
[11] WEN Z, LI Z, YONG P, et al. Detection and clinical significance of circulating tumor cells inpatients with nasopharyngeal carcinoma[J].Oncol Lett, 2019, 18(3): 2537-2547.
[12] 毛燕娇 , 徐剑锋 , 尹伟 . 外周血循环肿瘤细胞在49 例鼻咽癌中表 达 [J]. 肿瘤学杂志 , 2019, 25(2): 97-101.
[13] 王巧丽 , 熊伟 , 徐国强 , 等 . 循环肿瘤细胞在鼻咽癌中的临床研 究 [J]. 国际遗传学杂志 , 2021, 44(3): 175-180.
[14] 吴君心 , 贺俊彦 , 杜开新 , 等 . 鼻咽癌患者外周血循环肿瘤细 胞的检测及其与预后的相关性 [J]. 现代肿瘤医学 , 2017, 25(7):1035-1039.
[15] 欧洋 , 高德海 , 王振丹 , 等 . CTC-Biopsy 系统检测肿瘤患者外周 血CTC 临床应用可行性研究[J]. 中华肿瘤防治杂志, 2019, 26(1):56-60.
[16] FU X, SHEN C, WANG H, et al. Joint quantitative measurement of hTERT mRNA in both peripheral blood and circulating tumor cells of patients with nasopharyngeal carcinoma and its clinicalsignificance[J]. BMC Cancer, 2017, 17(1): 479.
[17] YOUR, LIU YP, LIN M, et al. Relationship of circulating tumor cells and Epstein-Barr virus DNA to progression-free survival and overall survival in metastatic nasopharyngeal carcinoma patients[J]. Int JCancer, 2019, 145(10): 2873-2883.
[18] 李琴 , 谢琼 . EB 病毒衣壳抗原抗体、早期抗原抗体、EB 病毒 DNA 检测对鼻咽癌的诊断、预后评估价值 [J]. 临床和实验医学 杂志 , 2017, 16(4): 359-363.
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