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【摘要】目的:观察精子DNA碎片指数(DFI)对体外受精-胚胎移植(IVF-ET)妊娠结局和胚胎质量的影响。方法:选取2021年1月至2022年1月该院收治的90例因不育行IVF-ET的男性进行前瞻性研究,均进行精子染色质扩散(SCD)检查,并按照不同DFI分为研究组(DFI<20%)和对照组(DFI≥20%)各45例,比较两组精液质量(精子活力、精子浓度和前向运动精子数)、胚胎质量(胚胎形成率、优质胚胎率和受精率)、胚胎移植成功率和妊娠成功率。结果:两组精子活力和精子浓度比较,差异均无统计学意义(>0.05);研究组前向运动精子数多于对照组,差异有统计学意义(<0.05);研究组胚胎形成率、优质胚胎率和受精率均高于对照组,差异有统计学意义(<0.05);研究组胚胎移植成功率和妊娠成功率均高于对照组,差异有统计学意义(<0.05)。结论:低DFI可增加前向运动精子数,提高胚胎质量和妊娠成功率。
【关键词】精子DNA碎片指数,体外受精-胚胎移植,妊娠,精液质量,胚胎质量
【Abstract】Objective:To observe effects of sperm DNA fragmentation index(DFI)on pregnancy outcome and embryo quality of in vitro fertilization-embryo transfer(IVF-ET).Methods:A prospective study was conducted on 90 infertile men who underwent IVF-ET in the hospital from January 2021 to January 2022.All patients underwent sperm chromatin diffusion(SCD)examination.According to different DFI,they were divided into study group(45 cases,DFI<20%)and control group(45 cases,DFI≥20%).The semen quality(sperm motility,sperm concentration and forward motile sperm count),the embryo quality(embryo formation rate,high-quality embryo rate and fertilization rate),the embryo transfer success rate,and the pregnancy success rate were compared between the two groups.Results:There were no significant differences in the sperm motility and the sperm concentration between the two groups(>0.05).The forward motile sperm count in the study group was more than that in the control group,and the difference was statistically significant(<0.05).The embryo formation rate,the high-quality embryo rate and the fertilization rate in the study group were higher than those in the control group,and the differences were statistically significant(<0.05).Further,the embryo transfer success rate and the pregnancy rate in the study group were higher than those in the control group,and the differences were statistically significant(<0.05).Conclusions:Low DFI can increase the forward motile sperm count,and improve the embryo quality and the pregnancy success rate.
【Keywords】Sperm DNA fragmentation index;In vitro fertilization-embryo transfer;Pregnancy;Semen quality;Embryo quality
不孕不育是临床常见的病理性或生理性妊娠疾病,主要指男女双方未采取避孕措施而1年内无法怀孕,其病因众多,其中男性精液质量至关重要[1-2]。目前,临床主要采用体外受精-胚胎移植(in vitro fertilization and embryo transplantation,IVF-ET)技术进行辅助受孕,借助独立体外受精,继而进行母体胚胎移植,实现人工受孕[3-4]。精子DNA碎片指数(DNA fragmentation index,DFI)是评估男性生育能力的指标,能够反映精子质量和精子DNA的完整性[5-6]。本文观察精子DFI对IVF-ET妊娠结局和胚胎质量的影响。
1资料与方法
1.1一般资料选取2021年1月至2022年1月本院收治的90例因不育行IVF-ET的男性进行前瞻性研究。纳入标准:男女双方未采取避孕措施,1年内无法怀孕;男方输精管、阴茎、睾丸等生殖器官和第二性征正常,女方子宫、输卵管、卵巢等生殖器官和第二性征正常,且双方均可耐受常规检查及治疗;首次接受IVF-ET,且男方常规精液分析正常。排除标准:有其他严重基础疾病;严重脏器病变;因不育进行过临床治疗;正在参加其他临床试验;男女任何一方具有严重的遗传性或精神类疾病、泌尿生殖系统感染、性传播疾病,近期接受致畸量的放射线、毒品、药品。根据精子染色质扩散试验(SCD)检查结果分为研究组(DFI<20%)和对照组(DFI≥20%)各45例。对照组年龄23~29岁,平均(25.90±1.10)岁;不育年限0.9~1.4年,平均(1.26±0.31)年;体质量指数(BMI)20~24 kg/m2,平均(22.81±2.26)kg/m2;致病因素:不良生活习惯9例,生殖系统或性功能障碍等6例,医源性因素9例,不明原因21例。研究组年龄25~30岁,平均(26.10±1.30)岁;不育年限1.1~1.6年,平均(1.31±0.29)年;BMI 20~23 kg/m2,平均(21.99±2.31)kg/m2;致病因素:不良生活习惯10例,生殖系统或性功能障碍等6例,医源性因素10例,不明原因19例。两组一般资料比较,差异无统计学意义(>0.05),有可比性。
1.2方法两组均进行SCD检查,测定DFI,并开展IVF-ET。(1)精液采集。提醒男方禁欲1周,取样当日,通过手淫采集精液,放置在恒温平台上,待精液液化后,取部分样本使用精液分析仪器辅助软件检查精子活力、精子浓度、前向运动精子数。(2)SCD和DFI检查。取剩余精液先进行密度梯度离心处理,随后针对活性强精子的培养液进行SCD检测DFI,使用仪器为精子DNA碎片染色试剂盒(武汉保科锐生物科技有限公司,鄂汉械备20210933号),检查时维持室温28℃,试剂盒先在室温下平衡45 min,同时取低熔点琼脂糖溶液进行90℃水浴,至琼脂糖凝胶完全溶解,待降至室温后加入60μL精液培养液,混匀后取20μL上层悬浮液样本,放入2℃冰箱冷藏5 min,取出后迅速放入变性液中8 min,取出后再浸入蒸馏水5 s,取出浸入裂解液反应15 min,反应结束,取出浸入洗涤液4 min,待裂解液清洗完毕后依次浸入70%乙醇、90%乙醇和无水乙醇溶液中脱水3 min,取出自然晾干,染色,随后使用蒸馏水冲洗15 s,观察DFI。(3)实施IVF-ET。受精12 h后观察胚胎形成及受精情况,以2原核(PN)为正常受精胚胎,0、1或3 PN及其他均为异常受精胚胎,受精完成后24 h,观察胚胎发育情况和质量,其中优质胚胎细胞筛选条件:卵裂球6~8个,细胞大小均匀,无空泡,碎片≤20%。筛选出优质胚胎后,根据男女双方需求选取并进行胚胎移植,2周后检测血清人绒膜促性腺激素(HCG)水平确定是否移植成功,移植后4周检查到女方体内出现宫内妊娠囊即为妊娠成功。
1.3观察指标(1)比较两组精液质量,包括精子活力、精子浓度和前向运动精子数。(2)比较两组胚胎质量,包括胚胎形成率、优质胚胎率和受精率。(3)比较两组胚胎移植成功率和妊娠成功率。
1.4统计学方法应用SPSS 22.0软件进行统计学分析,计量资料以(±s)表示,采用t检验,计数资料以率(%)表示,采用χ2检验,以<0.05为差异有统计学意义。
2结果
2.1两组精液质量比较两组精子活力和精子浓度比较,差异均无统计学意义(>0.05);研究组前向运动精子数多于对照组,差异有统计学意义(<0.05)。见表1。
2.2两组胚胎质量比较研究组胚胎形成率、优质胚胎率和受精率均高于对照组,差异有统计学意义(<0.05)。见表2。
2.3两组胚胎移植成功率和妊娠成功率比较研究组胚胎移植成功率和妊娠成功率均高于对照组,差异有统计学意义(<0.05)。见表33讨论
已知全球育龄夫妇约15%存在不孕不育问题,其中男性不育多与精子发生、成熟、排出、获能或受精等表现不佳有关[7-8]。精子DNA完整性不仅严重影响精子的受精能力,还可能导致流产、胎儿先天畸形或某种遗传性疾病[9-10]。现下临床多采用IVF-ET辅助生殖技术进行治疗,男女双方及其家属更易接受,但对男性精液质量要求较高[11-12]。
本研究结果显示,两组精子活力和精子浓度比较,差异均无统计学意义;研究组前向运动精子数多于对照组。提示DFI与男性前向运动精子数密切相关,并呈负相关变化趋势,可能因为前向运动精子数减少,会导致男性精液质量下降,女性自然受孕和IVF-ET妊娠成功率降低[13-14]。本研究结果同时显示,研究组胚胎形成率、优质胚胎率、受精率、胚胎移植成功率和妊娠成功率均高于对照组。这一结果与文献报道相符[15-16]。分析原因为精子遗传物质受到破坏后,可影响相应蛋白的转录和合成,进而影响顶体酶原生成,或由于无法合成某种酶原激活物质,使顶体酶无法被激活,最终表现为顶体酶活性降低,从而影响受精[17-18]。高DFI代表精子DNA受损程度较重,染色体功能严重受损,影响受精过程,从而影响胚胎质量和妊娠结局。因本研究纳入的样本量较少,其结果尚需后续扩大样本量,开展深入研究予以印证。
综上所述,低DFI可增加前向运动精子数,增高胚胎质量和妊娠成功率。
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