淋巴细胞主动免疫疗法治疗封闭抗体阴性复发性流产 患者的效果论文

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【关键词】  复发性流产；免疫疗法；封闭抗体；细胞因子；妊娠结局；不良反应 【Abstract】  Objective: To observe effects of lymphocyte active immunotherapy in patients with blocking antibody-negative recurrent abortion. Methods: 154 patients with blocking antibody-negative recurrent abortion were selected as the research objects and were divided into observation group and control group according to the random number table method, 77 cases in each. The observation group received lymphocyte active immunotherapy, while the control group received immunoglobulin passive immunotherapy. The positive rate of blocking antibody, the blocking efficiency of peripheral blood T cells (CD3+, CD4+  and CD8+) in the patients successfully converted to positive, the serum cytokine levels [γ-interferon (INF-γ), tumor necrosis factor-α (TNF-α), interleukin (IL)-4, IL- 10], the pregnancy success rate and the incidence of adverse reactions during the treatment were compared between the two groups. Results: The positive rate of blocking antibody in the observation group was 98.70% (76/77), which was higher than 80.52% (62/77) in the control group, and the difference was statistically significant (P<0.05). After the treatment, the blocking efficiency of CD3+, CD4+, and CD8+  in the patients who successfully converted to positive in the observation group were higher than those in the control group, and the differences were statistically significant (P<0.05). The levels of INF-γ and TNF-α in the patients who successfully converted to positive in the observation group were lower than those in the control group; the levels of IL-4 and IL-10 were higher than those in the control group; and the differences were statistically significant (P<0.05). The pregnancy success rate in the observation group was 94.81% (73/77), which was higher than that the control group of 77.92% (60/77), and the difference was statistically significant (P<0.05). However. there were no obvious adverse reactions in the two groups during the treatment. Conclusions: Lymphocyte active immunotherapy in the treatment of the blocking antibody-negative recurrent abortion patients can improve the blocking antibody positive rate and improve, the pregnancy success rate, and the T cell blocking efficiency and the serum cytokine levels in the patients who successfully converted to positive. Moreover, it is superior to immunoglobulin passive immunotherapy.

【Key words】  Recurrent abortion; Immunotherapy; Blocking antibody; Cytokine; Pregnancy outcome; Adverse reaction

复发性流产是指连续发生 2 次或以上的自然流 产，是妇产科常见病 [1] ，其发生与染色体异常、母 体内分泌异常、母体生殖道异常、母体免疫功能异常等因素有关，免疫治疗是当前复发性流产的重要 治疗方式，临床应用较为广泛 [2] 。已知复发性流产 的研究重点为提高患者妊娠成功率，  但对患者 T 细 胞封闭效率、血清细胞因子水平的关注较少 [3] 。本 文观察淋巴细胞主动免疫疗法治疗封闭抗体阴性复 发性流产患者的效果。


1  资料与方法

1.1   一般资料   选取 2020 年 6 月至 2021 年 5 月 本院收治的 154 例封闭抗体阴性复发性流产患者为 研究对象。纳入标准：染色体检查结果正常，丈夫 精液检查正常，封闭抗体检测阴性。排除子宫畸 形、宫腔粘连、生殖道感染、甲状腺功能异常者。 患者及其家属了解本研究内容并自愿签署知情同意 书，且研究经本院医学伦理委员会审批通过。按随 机数字表法分为观察组和对照组各 77 例。观察组： 年龄 24~36 岁，  平 均(30.9±3.1)岁；流产次数 3~7 次，  平均(4.1±0.3)次。对照组：年龄 25~35 岁，  平均(31.3±3.0) 岁；  流产次数 2~7 次，  平均  (4.0±0.5) 次。两组一般资料比较，  差异无统计 学意义( P>0.05)，有可比性。

1.2   方法   观察组采取淋巴细胞主动免疫疗法治疗。首选丈夫淋巴细胞，若丈夫不宜作为免疫原供 者(如性传播疾病、病毒性肝炎等)  ，则选择无关 健康个体的淋巴细胞用于免疫治疗。抽取免疫原供 者 30 mL 外周静脉血， 进行肝素抗凝处理， 在无菌环 境下分离淋巴细胞， 制成浓度为(4~7)×107 个 /mL 的悬液，抽取 3 mL 在患者前臂取 6~8 个点分别进 行皮下注射，注射后观察 30 min，若出现水疱、红 肿等可进行抗感染或冷敷治疗。每隔 3 周注射 1 次，3 次为 1 个疗程，治疗 1 个疗程后，于疗程结束 2 周后复查封闭抗体；若复查仍为阴性，再次治疗 2 个疗程，方法同上，无论复查封闭抗体是否阳性， 均指导受孕。对于复查封闭抗体为阳性者，应在 6 个月内考虑受孕，受孕后继续采取淋巴细胞维持免 疫治疗。

对照组接受免疫球蛋白被动免疫疗法治疗。 选取拟受孕当月月经周期第 8~10 天中的任意 1 d 静脉注射人免疫球蛋白(辽阳嘉德血液制品有限 公 司，   国 药 准 字 S20013061，2.5 g)，2.5 g/ 次， 1 次 / 月。确定妊娠后，  继续静注人免疫球蛋白， 直到孕 12 周。

1.3   观察指标    (1 )比较两组封闭抗体阳性率。(2)比较两组成功转阳患者治疗前后外周血 T 细 胞封闭效率，包括 CD3+ 、CD4+ 和 CD8+ 。(3)  比 较两组成功转阳患者治疗前后血清细胞因子水平。 采用酶联免疫吸附法检测 γ- 干扰素(INF- γ)、 肿 瘤 坏 死 因 子 - α(TNF- α) 、   白 细 胞 介 素(IL) -4、IL-10 水平。(4) 比较两组妊娠成功率。 孕龄在 5 个月以上，  B 超检查胎儿正常或成功分娩 为妊娠成功 [4]。(5)  比较两组治疗期间不良反应 发生率。

1.4   统计学方法   应用 SPSS 18.0 软件进行统计学 分析，计量资料以(  ±s )表示，采用 t 检验，计 数资料以率(%)表示，采用 χ2 检验，以 P<0.05 为差异有统计学意义。

2  结果

2.1   两组封闭抗体阳性率比较   观察组封闭抗体 阳性 76 例，封闭抗体阳性率为 98.70% (76/77)， 对照组封闭抗体阳性 62 例，封闭抗体阳性率为 80.52% (62/77)；观察组封闭抗体阳性率高于对照组，差异有统计学意义(χ2=13.670，  P=0.000)。    2.2   两组成功转阳患者治疗前后外周血 T 细胞封 闭效率比较   治疗前，两组成功转阳患者 CD3+、 CD4+ 、CD8+ 封闭效率比较，差异均无统计学意义  ( P>0.05)  ；治疗后，两组成功转阳患者 CD3+、 CD4+ 、CD8+ 封闭效率均高于治疗前，且观察组高 于对照组，  差异有统计学意义( P<0.05)  。见表 1。 

表 1  两组成功转阳患者治疗前后外周血 T 细胞封闭效率比较(%， x— ±s )
组别	CD3+		CD4+		CD8+
	治疗前	治疗后	治疗前	治疗后	治疗前	治疗后
观察组( n=76)	-1.48 ±0.45	1.92±0.54*	1.16±0.22	1.96±0.49*	0.64±0.14	1.51±0.46*
对照组( n=62)	-1.49 ±0.43	1.25±0.41*	1.19±0.25	1.41±0.42*	0.65±0.18	1.08±0.32*
t 值	0.132	8.055	0.749	6.988	0.367	6.231
P 值	0.447	0.000	0.227	0.000	0.357	0.000

注：与治疗前比较，  *P<0.05

2.3    两组成功转阳患者治疗前后血清细胞因子 水平比较   治疗前，  两组成功转阳患者 INF- γ、 TNF- α、  IL-4 和 IL-10 水平比较，差异均无统计 学意义( P>0.05)  ；  治疗后，两组 成功转阳 患者 INF- γ 、TNF- α 水平均低于治疗前，且观察组低 于对照组，两组成功转阳患者 IL-4 和 IL-10 水平 均高于治疗前，且观察组高于对照组，差异有统计 学意义( P<0.05)。见表 2。

表 2  两组成功转阳患者治疗前后血清细胞因子水平比较( x— ±s )

组别	INF- γ (μg/L)		TNF- α( μg/L)		IL-4 (pg/mL)		IL-10 (pg/mL)
	治疗前	治疗后	治疗前	治疗后	治疗前	治疗后	治疗前	治疗后
观察组( n=76)	3.64±1.02	2.42±0.80*	7.82±1.36	4.12±0.31*	10.65±3.54	12.73±3.76*	17.32±4.21	40.75±6.32*
对照组( n=62)	3.65±1.07	2.85±0.83*	7.46±1.71	5.46±0.21*	10.69±3.47	11.22±3.31*	17.29±4.15	31.01±5.44*
t 值	0.056	3.088	1.378	29.025	0.067	2.475	0.042	9.579
P 值	0.478	0.001	0.085	0.000	0.473	0.007	0.483	0.000

注：与治疗前比较，  *P<0.05

2.4   两组妊娠成功率比较    观察组成功妊娠 73 例，妊娠成功率为 94.81% (73/77)；  对照组成功 妊 娠 60 例，  妊娠成功率为 77.92% (60/77)；  观 察组妊娠成功率高于对照组，差异有统计学意义  ( χ2=15.053，  P=0.000)。

2.5   两组治疗期间不良反应发生率比较   两组治 疗期间均未发生明显不良反应。

3  讨论

妊娠早期反复自然流产或胚胎停止发育的病因 较为复杂，可受年龄、疾病、生育史等多种因素影 响 [5] 。免疫学认为，妊娠产物是母体的异体同种移 植物，母体免疫系统能识别胚胎及胎儿抗原，并影 响妊娠的建立 [6-7] 。淋巴细胞免疫治疗已逐渐应用于临床，成为治疗复发性流产的重要方式，成功率 可达 90% 以上 [8-9]。

已知妊娠的维持需要母体正常免疫调节的配 合，其中封闭抗体能与母体细胞毒性淋巴细胞结 合，阻止胚胎中父系抗原的损害，以保护胎儿免受 免疫排斥 [10]。封闭抗体在妊娠早期的 3 个月内浓度 较高，之后降低，在分娩时浓度再次升高，复发性 流产患者因缺乏封闭抗体，导致胚胎遭到排斥而流 产。淋巴细胞主动免疫治疗孕前将丈夫或无关第三 者的淋巴细胞注入患者皮下，刺激母体的免疫耐受 机制，促进封闭抗体的产生，有效阻止胚胎父系抗 原被母体免疫系统杀伤，从而有效保护胚胎；在进 行反复注射刺激后，可提高免疫记忆，从而提高再 次妊娠成功率 [11]。本研究结果显示，  观察组封闭抗 体阳性率和妊娠成功率均高于对照组。分析原因为 主动免疫可形成免疫耐受机制，从而起到保护胎儿 的作用。


母体外周血中的 T 细胞是母胎免疫耐受的重要 角色，其中 CD4+ 可协助实现体液免疫和细胞免疫， 在同种异体急性排斥反应中扮演重要角色 [12] 。作为 杀伤 / 抑制性 T 细胞，  CD8+ 在免疫应答中发挥负 调节作用，可抑制 CD4+ 主导的增殖反应、迟发型 超敏反应，确保胚胎不被母体排斥 [13] 。本研究结 果同时显示，治疗后，观察组成功转阳患者 CD3+、 CD4+ 、CD8+ 封闭效率均高于对照组。分析原因为 被动免疫治疗利用人丙种球蛋白中的抗胎盘滋养层抗原的独特性抗体及抗独特性抗体，弥补患者保护 性抗体的不足，也具有一定的免疫调节效果。但淋 巴细胞主动免疫可阻断排斥应答反应，从而调节母 体免疫系统，达到免疫平衡，为胎儿形成与发育构 建较为稳定的免疫环境，可促进成功妊娠，效果更 理想 [14]。

本研究结果还显示，观察组成功转阳患者 INF- γ、TNF- α 水平均低于对照组， IL-4 和 IL-10 水 平均高于对照组。分析原因为复发性流产患者Th1/Th2 之间的平衡状态被打破，导致 INF- γ 、TNF- α 水 平增高，  IL-4 和 IL-10 水平降低。淋巴细胞主动免 疫治疗能调节母体免疫系统及 T 细胞水平，以改善 母 - 胎界面 Th2 优势，可上调母 - 胎界面 IL-4、 IL-10 的 水 平，  下 调 IFN- γ、  TNF- α 的水平 [15]。 本研究结果又显示，两组治疗期间均未发生明显不 良反应。提示采用淋巴细胞主动免疫疗法治疗的安 全性较高。

综上所述，淋巴细胞主动免疫疗法治疗封闭抗 体阴性复发性流产患者可提高封闭抗体阳性率、妊 娠成功率以及成功转阳患者 T 细胞封闭效率，  改善 成功转阳患者血清细胞因子水平，效果优于免疫球 蛋白被动免疫疗法治疗。

参考文献

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