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摘要：目的 探究 USP7 和 MMP2、VEGF 在口腔鳞癌组织中的表达情况及其相关性，并明确三者表达与临床病理学特征之间的关联。材料与方法 选取 90 例口腔鳞癌及 20 例癌旁正常口腔黏膜组织，采用免疫组织化学技术检测 USP7 和 MMP2、VEGF 在口腔鳞癌及癌旁正常口腔黏膜组织中的表达情况。结果 （1）USP7 和 MMP2、VEGF 在口腔鳞癌组织中显示高表达，在癌旁正常口腔黏膜组织中显示低表达。（2） USP7 和 MMP2、VEGF 表达呈正相关性，且三者高表达与肿瘤分化程度、淋巴结转移等临床病理学特征密切相关。结论 USP7 和 MMP2、VEGF 的表达水平与口腔鳞癌的发生发展密切相关，可用于口腔鳞癌的临床诊断和治疗。
关键词：口腔鳞状上皮细胞癌；USP7；MMP2；VEGF
0引言
口腔鳞状上皮细胞癌 (Oral Squamous Cell Cancer, OSCC) 是头颈部常见的恶性肿瘤之一，约占全身各种恶性肿瘤的 3%。在过去5 年中，全世界约有 70 万例的口腔鳞癌，其中新发病例 30 万例 [1]。目前，虽然口腔鳞癌的诊断和治疗有所改善，但口腔鳞状细胞癌的预后仍然较差，5 年生存率约为 50％ [2-3]。因而，我们急需去探索 新的肿瘤靶点，为 OSCC 的诊断治疗和预后评估带来新的方向。
泛素特异性蛋白酶 7(Ubiquitin Specific Peptidase 7，USP7) 是一种去泛素化酶，可以通过去泛素化作用调控多种肿瘤相关 蛋白的表达，在前列腺癌、胶质瘤、肝癌、肺癌等肿瘤的侵袭转移 过程中发挥重要的作用 [4-6]。同时，大量研究证实，基质金属蛋白酶 2(Matrix Metalloproteinase-2,MMP2) 和血管内皮生长因子（VascularEndothelial Growth Factor，VEGF）与多种肿瘤的侵袭和转移密切相关 [7-9], 是常用的侵袭转移标记因子。但是目前研究USP7 和MMP2、VEGF 在口腔鳞癌组织中的表达关联的报道较少。本研究采用免疫组织化学技术检测 USP7 和 MMP2、VEGF 在口腔鳞癌组织及癌旁口腔黏膜组织中的表达情况，探讨其表达与口腔鳞癌临床病理学特征之间的关系，明确 USP7 和 MMP2、VEGF 对口腔鳞癌发生发展的影响。
1材料与方法
1.1材料
收集整理 2010 年至 2016 年间附属医院病理科 90 例确诊为OSCC 的石蜡组织，这些病例均具备完整的临床资料。其临床病理特征包括年龄、性别、肿瘤部位、组织分化程度、淋巴结转移等。 对照组选用 20 例癌旁正常口腔黏膜组织（距离肉眼可见肿瘤所在位置 5cm 以上的正常组织）。将石蜡标本切成 4m 厚度的组织切片，进行免疫组化染色。
1.2实验方法
采用免疫组织化学方法检测 USP7 和 MMP2、VEGF 在口腔鳞癌组织和癌旁正常口腔黏膜组织中的表达。多克隆抗 USP7抗 体（Abcam，ab4080，1:1000），单 克降抗 MMP2 抗 体（Abcam， ab86607，1：500），单 克 降 抗 VEGF 抗 体（Abcam，ab155288，1： 1000），组织切片置于 EDTA 抗原修复处理后，加一抗，1℃过夜，加二抗，37℃温箱育，DAB 显色，脱水，透明，封片。上述所有操作均按照说明书进行。染色评判标准：根据阳性肿瘤细胞百分比分级，阳性细胞 >50％为强阳性（+++）；阳性细胞 20-50% 为中度阳 性（++）；阳性细胞 5-20% 为弱阳性（+）；阳性细胞 <5% 为阴性（-）。将 USP7 和 MMP2、VEGF 进行高（++~+++）或低（-~+）表达分级。
1.3统计分析。
应用统计学软件 SPSS 20.0 分析实验数据。为了评估 USP7 和 MMP2、VEGF 的表达和临床病理学特征的关系，两组间比较采用卡方检验。检测 USP7 和 MMP2、VEGF 表达的相关性采用回归分析法。P<0.05 表示差异具有统计学意义。
2结果
2.1 USP7 和 MMP2、VEGF 在 OSCC 及癌旁正常组织中的表达情况 将 90 例 OSCC 蜡块和 20 例癌旁正常口腔黏膜组织进行免疫组织化学染色，检测 OSCC 和癌旁正常组织中 USP7 和 MMP2、VEGF 的表达情况。结果显示：USP7 定位于细胞核和细胞质， MMP2 和 VEGF 定位于细胞质。在正常口腔黏膜中，USP7 和MMP2、VEGF 仅分布于基底层少量细胞中，且染色弱；在癌组织中USP7 和 MMP2、VEGF 显示高表达，尤其是低分化癌中显示异常高表达（图 1）。
USP7 在癌旁正常口腔黏膜组织的阳性表达率为 0%（0/20），在 OSCC 的阳性表达率为 61.1%（54/90）；MMP2 在癌旁正常口腔黏膜组织的阳性表达率为 0%（0/20），在 OSCC 的阳性表达率为 50%（45/90）；VEGF 在癌旁正常口腔黏膜组织的阳性表达率为 0%（0/20），在 OSCC 的阳性表达率为 55.6%（50/90）（表 1）。总之在正常口腔黏膜中，USP7、MMP2 和 VEGF 低表达；在 OSCC 中 USP7、MMP2 和 VEGF 显示高表(P<0.01)。
免疫组化结果显示：USP7 和 MMP2、VEGF 表达具有相似性， USP7 低表达的 36 例病例中，MMP2 低表达 30 例，高表达 6 例，VEGF 低表达 25 例，高表达 11 例；USP7 高表达的 54 例病例中， MMP2 低表达 15 例，高表达 39 例，VEGF 低表达 15 例，高表达 39例；USP7 和 MMP2、VEGF 的表达呈正相关（
P<0.01）（表 2）。
实验检测了 USP7 和 MMP2、VEGF 的表达与临床病理学特征的关联。结果显示：在 USP7 低表达的 36 例患者中，0 例低分化癌， 36 例高 / 中分化癌；9 例淋巴结转移患者，27 例未转移。在 USP7高表达的 54 例患者中，22 例低分化癌，32 例高 / 中分化癌；25 例淋巴结转移，29 例未转移。在 MMP2 低表达的 45 例患者中，5 例低分化癌，40 例高/ 中分化癌；11 例淋巴结转移患者，34 例未转移。在 MMP2 高表达的 45 例患者中，17 例低分化癌，28 例高 / 中分化癌；23 例淋巴结转移，22 例未转移。在 VEGF 低表达的 40 例患者中，4 例低分化癌，36 例高 / 中分化癌；9 例淋巴结转移患者，31 例未转移。在 VEGF 高表达的 50 例患者中，18 例低分化癌，32 例高
/ 中分化癌；25 例淋巴结转移，25 例未转移。统计分析：USP7 和 MMP2、VEGF 的高表达均与 OSCC 患者肿瘤分化程度、淋巴结转移密切相关（P<0.01）（表 3）。
3讨论
USP7 是去泛素蛋白酶家族的一个重要成员，最初从单纯疱疹病毒蛋白 ICP0 相互作用蛋白中鉴定出来，因此又称为疱疹病毒相关的泛素特异性蛋白酶（Herpesvirus-associated Ubiquitin- specific Protease，HAUSP）。有研究表明，USP7 通过去泛素化修饰多种蛋白的表达参与细胞的生命活动，如调控 DNA 损伤修复、DNA 复制、细胞有丝分裂、病毒感染、免疫应答 [10] 等。近些年来发现在前列腺癌、胶质瘤、卵巢癌、肝癌及肺癌等肿瘤中，USP7 都呈现出高表达，与肿瘤增殖、侵袭、转移、患者预后等存在着密切 联系 [4-6]。本研究中，USP7 在癌旁正常口腔黏膜组织中低表达， 在 OSCC 组织尤其是低分化癌中显示高表达（表 1），USP7 表达与 OSCC 的分化程度相关（表 3），提示 USP7 的表达可能与 OSCC 的恶性程度密切相关。MMP2 作为基质金属蛋白酶家族中最重要的一个成员，通过降解细胞外基质和细胞基底膜中各种蛋白成分，促进多种肿瘤细胞向周围组织侵袭转移。VEGF 不仅可以促进血管细胞的生长、增殖，也可以增加血管的通透性，从而为肿瘤的侵袭转移提供养分和转移途径 [7]，是常用的侵袭转移标记因子。本研究结果显示 USP7 的表达与淋巴结转移有关（表 3），且 USP7 的表达和两种肿瘤侵袭转移标记因子 MMP2、VEGF 的表达呈正相关（表 2）。提示 USP7 的高表达可能促进了口腔鳞癌细胞侵袭转移的能力，在OSCC 发生发展过程中起重要作用。USP7 在 OSCC 中的作用机制尚不清楚，有研究发现 USP7 在非小细胞肺癌中显示高表达，且其表达与淋巴结转移相关，沉默 USP7 可上调 E- 钙粘蛋白并下调波形蛋白和 N- 钙粘蛋白，表明 USP7 可能促进肿瘤发生 EMT，从而促进非小细胞肺癌侵袭转移 [5]。此外，USP7 还可以与 PTEN 蛋白相互作用，导致 PTEN 的肿瘤抑制功能受损和核排斥，促进前列腺癌侵袭转移 [6]。但 USP7 对 OSCC 侵袭转移具体作用机制，仍需进一步探究。
综上所述，USP7 和 MMP2、VEGF 在正常口腔黏膜组织低表达，在 OSCC 组织高表达，且两者表达呈正向相关；USP7 和 MMP2、VEGF 与肿瘤分化程度、淋巴结转移等临床病理学特征密切相关。这有可能为 OSCC 的预防和治疗提供了有力帮助。
参考文献
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