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摘要：目的建立三七叶中皂苷类成分的含量测定方法，为控制三七叶质量提供检测依据。方法采用RP-HPLC梯度洗脱法测定，A、B流动相分别为乙腈、水，按拟定方法对三七叶中的三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1进行检测，检测波长206 nm。结果三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1表明回收率分别为97.72%（RSD1.98%）、98.47%（RSD1.50%）、99.12%（RSD0.64%）；结论该法专属性高、准确，可有效控制三七叶的质量。
关键词：三七叶；皂苷成分；RP-HPLC
本文引用格式：覃佩莉,林海英.RP-HPLC法测定三七叶中皂苷成分的含量[J].世界最新医学信息文摘,2019,19(69):119-120.
0引言
三七叶为五加科植物三七Panax notoginseng（Burk）F.H.Chen的干燥叶，具有止血、消肿、止痛之功效，对吐血、外伤出血、痈肿毒疮等具有很好的治疗作用。本品质量标准收载于广西壮药材质量标准第二卷（2011年版）[1]，标准未对其中的活性成分进行含量测定控制，存在不足。文献报道[2]三七叶中含有多种活性成分，包括三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1等，本实验参照药典方法[3]采用RP-HPLC法测定三七叶中的三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1成分，方法准确、可靠，可用于三七叶的质量控制。
1仪器、样品
岛津高效液相色谱仪（LC-20ATVP）；对照品：三七皂苷R1、人参皂苷Rb1、、人参皂苷Rg1，中国食品药品检定研究院提供；乙腈色谱纯；纯化水；其它试剂为分析纯；三七叶为广西靖西和云南产。
2方法与结果
2.1色谱条件、系统适用性实验。照现行版中国药典第四部通则高效液相色谱法，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相A、B分别为乙腈、水，按拟定的方法梯度浓度洗脱;检测波长为206 nm。理论板数按三七皂苷R1峰计算应不低于5000，见表1。
2.2取三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1对照品适量，精密称定，加甲酵制成每l mL各含0.2 mg的对照品混合溶液；取三七叶粉末（过四号筛）1 g，精密称定，精密加入甲酵50 mL，称定重量，超声处理（功率350 W，频率50 kHz）60 min，放冷，用甲醇补足减失重量，摇匀滤过，吸取续滤液25 mL，蒸干，蒸干后的固体物加水15 mL使溶解，用水饱和的正丁醇液提取3次，每次15 mL，合并正丁酵液，蒸干，固体物加甲醇溶解，转移于25 mL容量瓶中，用甲醇加至刻度，摇匀滤过，作为供试品溶液。分别精密吸取上述溶液及甲醇各10μl，注入液相色谱仪测定，色谱图见图1、2、3。
供试品色谱图与对照品色谱图相应的位置有相应的峰出现，各峰分离度良好且符合药典规定，空白液未干扰，方法可靠。
2.3线性关系。取三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1适量，精密称定，各加甲醇分别制成0.05 mg/mL、0.10 mg/mL、0.20 mg/mL、0.30 mg/mL、0.40 mg/mL、0.50 mg/mL、0.60 mg/mL的梯度溶液，进样，测定峰面积，分别以峰面积为横坐标，进样量（μg）为纵坐标，线性回归，三七皂苷R1回归方程：Y=8.0460×10-7X-0.1642（r=0.9998，n=7）；人参皂苷Rg1回归方程：Y=6.1732×10-7X-0.1728（r=0.9991，n=7）。人参皂苷Rb1回归方程：Y=5.2435×10-7X-0.5613（r=0.9994，n=7），结果三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1分别在0.5021-6.1642μg、0.4927-6.3516μg、0.5147-6.2055μg范围线性良好。
2.4精密度试验。精密吸取同一批三七叶供试液10μl，重复测定6次，分别记录三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1色谱图及峰面积，最终计算三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1的RSD分别为1.34%、1.21%、0.97%（n=6），该法精密度良好。
2.5重复性试验。取同一批次三七叶供试液，按拟定方法制备6份供试液，按照上述色谱条件及测定方法，精密吸取供试液和对照液各10μl，测定，记录色谱图及计算含量，三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1的RSD分别为0.75%、1.61%、1.04%（n=6），重复性良好。
2.6稳定性试验。取该供试品溶液分别于0 h、3 h、6 h、9 h、12 h、15 h、18 h测定峰面积，三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1的分别为0.51%、0.62%0.77%。供试品溶液18 h内稳定。
2.7加样回收试验。取已知含量的同一批三七叶，精密量取5 mL，依法处理、检测，计算各成分回收率，结果三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1表明回收率分别为97.72%（RSD1.98%）、98.47%（RSD1.50%）、99.12%（RSD0.64%）加样回收率符合规定。
2.8样品的含量测定。依上述方法测定6批三七叶含量，结果含三个成分合计为3.56%、4.01%、3.73%、4.25%、3.66%、3.20%。
3讨论
本对实验对三七叶中的三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1开展测定研究，结果灵敏、准确，专属性高、准确，为建立三七叶的含量控制方法提供依据。测定的16批三七叶，三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1造含量大概在3%-4%，含量略低于三七药材。
参考文献
[1]广西壮药质量标准委员会编.广西壮药质量标准第二卷(2011年版)[M].广西科学技术出版社,2011.
[2]黄积武,李创军.三七叶的化学成分及其抗氧化活性研究[J].中草药,2017,48(21):4381-4386．
[3]国家药典委员会.中国药典2015年版一部[M].北京:中国医药科技出版社,2015．
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