SCI论文（www.lunwensci.com）:
摘要：目的应用荧光原位杂交技术分析150例慢性淋巴细胞白血病患者的遗传学异常分析其预后并评估CLLU1基因对预后的影响。方法将150例慢性淋巴细胞白血病患者的血液或骨髓液作为实验标本，应用荧光原位杂交技术分析患者的染色体异常、评估预后，其中37例患者参与了CLLU1基因的检测并分析其与预后关系。结果发现150例患者中55%的患者存在染色体的畸变。畸变主要包括del13q14(66%)，trisomy 12(26%),del11q22(17%),del17p(5%),患者存在del11q22、del17p畸变预示着生存时间更短更需要药物治疗。高表达CLLU1基因的患者总体生存时间较短、需要药物治疗。结论对于慢性淋巴细胞白血病患者，FISH检测技术仍然是慢性淋巴细胞白血病患者评估预后的常规方法。del11q22、del17p预示着较差的预后，更需要积极的治疗。但CLLU1基因对慢性淋巴细胞白血病患者的预后影响需进一步扩大样本量并长期随访。
关键词：慢性淋巴细胞白血病；荧光原位杂交技术；CLLU1基因
本文引用格式：李明霞,王占聚.分析慢性淋巴细胞白血病患者染色体异常并探究CLLU1基因对其预后意义[J].世界最新医学信息文摘,2019,19(61):211-212.
Impact of Fluorescent In Situ Hybridization Aberrations and CLLU1 Expression on the Prognosis of Chronic Lymphocytic Leukemia
LI Ming-xia,WANG Zhan-ju*
(Affiliated Hospital of Weifang Medical College,Weifang Shandong)
ABSTRACT:Objective This study used fluorescence in situ hybridization to analyze the genetic abnormalities of 150 patients with chronic lymphocytic leukemia(CLL)and to evaluate the prognosis of CLLU1 gene.Methods Blood or bone marrow fluid from 150 patients with chronic lymphoblastic leukemia were used as experimental samples to analyze the chromosome abnormalities of the patients and evaluate the prognosis by fluorescence in situ hybridization technology.Among them,37 patients participated in the detection of CLLU1 gene and analyzed its relationship with the prognosis.Results Chromosomal aberrations were found in55%of 150 patients.Distortion mainly includes del13q14(66%),trisomy 12(26%),del11q22(17%),del17p(5%),patients with del11q22 and del17p aberration indicates a shorter overall survival and higer need for medication.Patients with higer CLLU1 gene have a shorter overall survival and more drug therapy.Conclusion FISH detection is still a routine method for assessing prognosis in patients with chronic lymphocytic leukemia.Del11q22,del17p indicate a poor prognosis and require active treatment.However,the prognostic impact of CLLU1 gene on patients with chronic lymphocytic leukemia needs to be further expanded and long-term follow-up.
KEY WORDS:Chronic lymphocytic leukemia;Cytogenetics/FISH;CLLU1
引言
慢性淋巴细胞白血病的临床表现多种多样，有的患者无症状生存数年，而有的患者则病情进展迅速[1]。随着对CLL细胞生物学及疾病本质的认识，近期研究表明，影响其预后的因素主要有细胞遗传学异常、免疫球蛋白重链可变区(IgVH)突变状态及ZAP70、CD38、LPL及CLL上调基因（CLLU1）的表达等[2]。慢性淋巴细胞白血病的染色体异常检出率为30%-50%；而应用荧光原位杂交技术，荧光率达70%-80%[3,4]。FISH检测结果表明del13q14预后较好，而del11q22、del17p提示预后不良[5,6]。不幸的是，CLL是基因异质性的。最近研究的一些新的基因组异常，如NOTCH1和SF3B1的突变以及BIRC3的中断等[7,8]，但这些异常遗传基因都不具有特异性。CLLU1被定义为CLL的第一个特异基因。然而，其与预后的相关性尚不清楚。
1资料和方法
1.1一般资料
选取就诊于潍坊市人民医院及潍坊医学院附属医院2016年6月至2019年4月150例具备完整临床资料的CLL患者，选取患者血液或骨髓液作为实验标本。入选标准：（1）所有病例均根据实验室检查、临床表现及病理学检查等符合CLL诊断标准。（2）临床资料完整。
排除标准：①合并急性感染或其他恶性肿瘤等不适合参与研究的患者。②严重肝、肾、心功能不全患者。③临床资料不完整者。
1.2实验分析方法
1.2.1间期FISH分析
FISH分析采用直接标记探针，分别是D13S319,LSI 13q14,LSI ATM,CSP12,LSI p53。荧光显微镜检测用日本Olympus公司的OlympusBX51荧光显微镜。用细胞视觉进行图像分析，每例分析300个细胞，结果定义为间期染色体异常细胞百分比超过正常的截止值。如表1：按白细胞计数、淋巴细胞绝对值、β2微球蛋白、LDH分成高低危组。FISH检测结果分为组1:del11q and del17p，组2del13q14，组3:trisomy 12，组4:normal。
1.2.2CLLU1基因表达方法
为了分析CLLU1的表达，首先分离了RNA，cDNA是用cDNA反向合成的转录试剂盒。检测CLLU1表达应用实时聚合酶链反应。测量CLLU1表达水平与正常患者细胞关系上调定义截断值以区分高表达和低表达水平[9]。
1.3随访
对所有入组患者进行随访，主要通过电话或住院病历随访，在随访中主要记录患者的生存情况。随访截止时间为2019年4月31日。总生存期（overall survival,OS）定义为从诊断到任何原因死亡的时间或对于仍然存活的患者的最后一次随访的时间。
1.4统计分析
采用卡方检验确定关系临床和实验室参数(LDH和β2微球蛋白、WBC、CLLU1表达及FISH亚群异常)。
2结果
2.1临床结果
150例患者中，100例为男性。年龄范围为40岁至89岁(中位数：66岁)。共有21名患者在此期间死亡。操作系统中位数时间为98±12个月。
2.2 FISH结果
FISH分析发现82例患者(55%)存在染色体畸变。最常见的异常为del13q14(66%)，其次为12号染色体三体(26%)，del11q22(17%)和del17p13(5%)。复合染色体异常发生率最高的是del13q14和del11q22(表2)。存活时间较短的是del11q、del17p、三染色体细胞12;存活时间较长的是del13q14及正常患者中(P>0.05)。del11q22和del17p13则更需要药物治疗(P<0.05)（表3）。del11q22 and17p13的白细胞及淋巴细胞绝对值较高(P<0.05)。β2微球蛋白及LDH则无明显差异(P>0.05)（表2）。
2.3 CLLU1基因结果
高表达CLLU1基因的患者生存时间减少1倍。更需要药物处理（P<0.05）（表3）。
3讨论
慢性淋巴细胞白血病(CLL)属于淋巴系统的恶性增殖性疾病，它以小的、外表成熟的淋巴细胞在外周血、骨髓以及淋巴组织中堆积为特征，在西方国家是成人发病率最高的白血病，在我国及其它亚洲地区CLL发病率相对较低，约占白血病总数的5%，但近年来有增高之势。
常规细胞遗传学分析由于慢性淋巴细胞白血病患者在体外有丝分裂指数低而受到限制，遗传标记物分析仍是评估慢性淋巴细胞白血病的主要因素。
在慢性淋巴细胞白血病患者中染色体异常检出率约是70%-80%。在我们的研究中，FISH的异常率是55%。染色体异常主要包括del13q14(66%)，12号染色体三体(25%)，del11q22(17%)和del17p13(5%)。复合染色体异常发生率最高的是del13q14和del11q22。生存时间是del11q12和del17p13患者明显缩短。与文献资料相似，相关性显著。
慢性淋巴细胞白血病(CLL)细胞可能具有共同的转化机理或细胞起源,但一直未发现CLL疾病特异性基因。既往研究报道TP53,NOTCH,SF3B1,BIRC3突变是不良预后的原因[7,8]。最近,Buhl等通过差异显示的方法发现了位于12q23区域的新基因(CLL upregulated gene 1,CLLU1)在CLL细胞中特异性表达,研究发现CLLU1与CLL患者发病到起始治疗的时间长度及总生存期密切相关,且CLLU1表达水平与已知CLL不良预后因素有关系。在本报告中，高CLLU1表达表明较短生存时间和更高的治疗需求。类似的报道称，一些患者患有del17p13和del11q22的CLLU1水平明显较高[9,10]。高CLLU1表达表明较短生存时间和更高的治疗需求，因此，CLLU1基因是慢性淋巴细胞白血病潜在的预后因子。综上，CLLU1与CLL患者临床预后相关，有必要在临床治疗过程中进行关注。
但目前CLLU1表达要成为主要预后因子则需要更多的相关数据，由于本次研究所收集数据尚且偏少，下一步我们会继续增加样本量继续研究。
参考文献
[1]Gentile M,Mauro FR,Guarini A,FoàR.prognosis and treatment of chronic lymphocytic leukemia[J].Curr Opin Oncol,2005,17:597-604.
[2]于珍,李增军,易树华,等.慢性淋巴细胞白血病患者免疫球蛋白重链片段及其突变状态的研究[J].中华血液学杂志,August,2011,32,8.
[3]DickerF,Schnittger S,Haferlach T.Immunostimulatoryoligonucleotide-induced metaphase cytogeneticsdetect chromosomal aberrations in 80%of CLL patients[J].2006,108:3152-3160.
[4]Shanafelt TD,Geyer SM.Prognosis at diagnosis:integrating molecular biologic insights into clinical practice for patients with CLL[J].Blood,2004,103:1202-1210.
[5]Lai YY,Huang XJ.Cytogenetic characteristics of B cell chronic lymphocytic leukemia in 275 Chinese patients by fluorescence in situ hybridization:a multicenter study[J].Chin Med J(Engl),2011,124:2417-2422.
[6]Döhner H,Stilgenbauer S,Benner A,et al.Genomic aberrations and survival in chronic lymphocytic leukemia[J].N Engl J Med,2000,343:1910-1916.
[7]Puiggros A,Blanco G,Espinet B.Genetic abnormalities in chronic lymphocytic leukemia:where we are and where we go[J].Biomed Res Int,2014,2014:435983.
[8]Stilgenbauer S,Schnaiter A,Rossi M,et al.Gene mutations and treatment outcome in chronic lymphocytic leukemia:results from the CLL8 trial[J].Blood,2014,123:3247-3254.
[9]Josefsson P,Geisler CH,Leffers H,et al.CLLU1 expression analysis adds prognostic information to risk Prediction in chronic lymphocytic leukemia[J].Blood,2007,109:4973-4979.
[10]Buhl AM,Jurlander J,Geisler CH,et al.CLLU1 expression levels predict time to initiation of therapy and overall survival in chronic lymphocytic leukemia[J].Eur J Haematol,2006,76:455-464.
关注SCI论文创作发表，寻求SCI论文修改润色、SCI论文代发表等服务支撑，请锁定SCI论文网！ 文章出自SCI论文网转载请注明出处：https://www.lunwensci.com/yixuelunwen/17853.html
