不同种植产地地黄中5-羟甲基糠醛的含量测定论文

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摘要：目的测定不同种植产地地黄中5-羟甲基糠醛的含量。方法采用高效液相色谱法测定5-羟甲基糠醛的含量，色谱柱Diamonsil C18（4.6mm×250mm，5μm），流动相为乙腈-水（5:95），流速为1.0mL/min，柱温为25℃，检测波长为280nm，进样量为10ul。结果不同种植产地地黄药材中5-羟甲基糠醛的含量为1.294ug/g—4.48ug/g。各种植产地生地黄中5-HMF的含量为：山西襄汾1.2级生地黄是4.48ug/g，山西运城1.2级生地黄是1.338ug/g，山西临汾1.2级生地黄是1.294ug/g，保健药房（1）生地黄是2.396ug/g，保健药房（2）生地黄是2.172ug/g，河南赵堡镇（个子货）生地黄是2.438ug/g，河南赵堡镇一级生地黄是2.254ug/g，河南大丰镇生地黄是3.946ug/g。结论不同种植产地的生地黄药材中5-HMF含量差异较大，5-HMF含量较高的生地黄种植品种有山西襄汾1.2级生地黄和河南大丰镇生地黄。

关键词：地黄；种植产地；5-羟甲基糠醛；含量测定；HPLC

本文引用格式：石岩.不同种植产地地黄中5-羟甲基糠醛的含量测定[J].世界最新医学信息文摘,2019,19(61):204-205.

0引言

地黄为我国著名的“四大怀药”之一，是药用价值很高的滋阴补血类中药，活性作用十分广泛。对免疫、血液、内分泌、心脑血管、神经系统及抗菌、抗炎等方面均有一定的作用。2005年版《中国药典》的成方制剂中有近1/5选取用了地黄。目前在化学及药理活性的研究上，均具有一定的基础，但尚没有一种标准物质能很好的用于控制地黄、熟地黄及成方制剂的质量，直接影响地黄药材大量出口、新药的研制及大量地黄中成药进入国际市场。

地黄分布于我国的河南、山东、山西、陕西、河北、辽宁、内蒙古、江苏、浙江、湖南、湖北、四川等地，主要为栽培，也有野生于海拔500~1 100m的山坡及路旁荒地等处，以河南的温县、孟县、博爱、沁阳（即古怀庆府）作为地黄的道地产区，并将产于古怀庆府的地黄称为怀庆地黄或怀地黄。地黄分为三类，有鲜地黄、生地黄和熟地黄之分，生地黄经过蒸制后为熟地黄，生地黄性寒，味甘，以清热凉血为主；熟地黄性温，味甘，以滋阴补血为主。生地黄炮制成熟地黄后，化学成分的种类和含量发生显著改变[1-7]，其中变化最大的化学成分是5-羟甲基糠醛（5-HMF）[8-10]。

所以，本研究以不同种植产地生地黄为研究对象，采用HPLC方法测定5-HMF的含量，并对不同种植产地生地黄中5-HMF的含量进行比较，为生地黄的质量控制提供实验依据。

1实验材料与仪器

1.1仪器与试剂

CP225D万分之一天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）；ALC-110.4电子天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）；HH-4型号数显恒温水浴锅（江苏金坛荣华仪器制造公司AS5150A超声波清洗机（天津奥赛斯仪器有限公司）；U-3010紫外光谱仪（日本岛津）；高效液相色谱仪(安捷伦科技有限公司，Agilent1100)；甲醇、乙腈为色谱柱，水为重蒸水。

1.2药材与对照品

山西襄汾1.2级生地黄、山西运城1.2级生地黄、山西临汾1.2级生地黄、保健药房：（1）生地黄、保健药房；（2）生地黄、河南赵堡镇（个子货）生地黄、河南赵堡镇一级生地黄、河南大丰镇生地黄、5-羟甲基糠醛（5-HMF，宝鸡市辰光生物科技有限公司）。

2方法与结果

2.1色谱条件

色谱柱（Diamonsil C18 4.6 mm×250 mm，5m），柱温为25℃，进样量为10L，流动相为乙腈-水（5:95），流速为1.0 mL/min，检测波长为280 nm。

2.2供试品溶液的制备

将生地黄药材粉碎过二号筛，精密称定生地黄粉末2.0g，加甲醇定容至50 mL容量瓶中。超声处理45 min，放冷至室温，用甲醇补足失重，摇匀，取续滤液25 mL，70℃水浴蒸干，加5 mL甲醇溶解，以0.45m微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。

2.3对照品溶液的制备

精密称取对照品5-HMF3.42mg，加甲醇定容至50 mL容量瓶中。摇匀并精密吸取2 mL，加甲醇定容至10 mL容量瓶中，所得溶液作为对照品溶液。

2.4专属性考察

分别精密吸取对照品溶液、山西襄汾供试品溶液各10L，注入液相色谱仪，进样分析，色谱图见图1-A、B。实验证明，供试品溶液中5-HMF的分离度良好，不受其他物质的干扰。





2.5方法学验证

2.5.1线性关系的考察

精密吸取对照品溶液1、2、5、10、15、20L，分别注入高效液相色谱仪，按上述条件分别测定5-HMF的吸收峰面积，以进样量为横坐标（x），以峰面积积分值为纵坐标（y），进行回归处理。结果5-HMF在0.01368―0.2736ug范围内，进样质量与峰面积之间线性关系良好，回归方程为y=6580.1x+4.7483，R=0.9999，结果见图2。


2.5.2稳定性试验

取对照品溶液在配置后0、20、40、60、80、120min分别进样10L，记录峰面积值，结果见表1，5-HMF峰面积的RSD为0.9%，结果表明5-HMF对照品在2h内稳定。




2.5.3精密度试验

精密吸取对照品溶液10L，重复进样5次，测定峰面积，结果见表2，5-HMF峰面积的RSD为0.7%，结果表明，仪器精密度良好。




2.5.4重复性试验

称取6份山西襄汾生地黄各2.0g，按供试品溶液的制备方法制备。按上述色谱条件，分别进样10L，结果见表3，RSD（%）小于5%，结果表明实验重复性符合方法学要求。


2.5.5加样回收试验

取已知5-HMF含量（4.48ug/g）的山西襄汾生地黄1.0g各6份，分别精密称定，置50 mL锥形瓶中，精密加入5-HMF对照品2 mL（浓度为2.246ug/mL）于锥形瓶中，按“2.2”项下方法制备供试品溶液，在“2.1”项条件下进样分析，结果如表4。




2.6不同种植产地生地黄中5-HMF的含量测定

分别精密吸取对照品溶液、各供试品溶液10L，在同一色谱条件下，进样分析，计算各供试品中5HMF的含量。山西襄汾1.2级生地黄（4.48ug/g），山西运城1.2级生地黄（1.338ug/g），山西临汾1.2级生地黄（1.294ug/g），保健药房（1）生地黄（2.396ug/g），保健药房（2）生地黄（2.172ug/g），河南赵堡镇（个子货）生地黄
（2.438ug/g），河南大丰镇生地黄（3.946ug/g），河南赵堡镇一级生地黄（2.254ug/g）。

3讨论

3.1在进行生地黄中5-HMF的含量测定时，曾使用了不同配比的乙腈―水为流动相，结果以乙腈―水（5:95）条件下5-HMF峰形尖锐对称，出峰时间适宜，样品色谱中5-HMF与杂质峰基分离度较好。

3.2在样品提取条件的筛选试验中，曾分别采用水，80%甲醇，甲醇，10%乙腈提取，提取液滤过，定容，作为供试品溶液，进样10μL测定5-HMF的峰面积，结果表明甲醇超声挥干，再用甲醇提取，5-HMF的提取率较高、杂质较少，故采用本法制备样品做供试品。

3.3测定结果表明，不同种植产地的生地黄药材中5-HMF含量差异较大，5-HMF含量较高的生地黄品种有山西襄汾1.2级和河南大丰镇生地黄等。上述测定结果对生地黄的种植生产提供一定的参考和帮助。

4结论

不同种植产地生地黄中5-HMF的含量有较大差异。山西襄汾生地黄中5-HMF含量最多，山西临汾生地黄的含量最低，即使同一个省份生地黄中5-HMF的含量亦有差异，这可能说明生地黄中5-HMF的含量与种植产地的气候环境有很大相关性。

参考文献

[1]Takashi Morota,Hiroshi Sasaki,Hiroaki,et al.Two Iridoid Glycosides from Rehmannia Glutinosa[J].Phytochemistry,1989,28(8):149-2153.
[2]Yukihiro Shoyama Masami Matsumoto,Itsuo Nishioka.Four Caffeyl Glycoside from Callus Tissue of Rehmannia Glutinosa[J].Phytochemistry,1986,25(7):633-1636.
[3]李更生,震,慧森.地黄化学成分与药理研究进展[J].国外医学中医中药分册,2004,26(2):74-76.
[4]于震,王军,李更生,等.地黄苷D滋阴、补血和降血糖作用的实验研究[J].辽宁中医杂志,2001,28(4):240-241.
[5]王军,于震,李更生.地黄苷A对‘阴虚'及免疫功能低下小鼠的药理作用[J].中国药学杂志,2002,37(1):20-22.
[6]刘长河,张留记,李更生,等.地黄中地黄苷A的含量测定[J].中草药,2002,33(8):706-707.
[7]李更生,王慧森.HPLC法测定地黄中地黄苷D含量[J].中草药,2003,34(8):752-754.
[8]李更生,刘明,王慧森,等.地黄药材炮制过程中环烯醚萜苷类成分动态变化的研究[J].中国中医药科技,2008,15:440-442.
[9]Xu J,Wu J,Zhu LY,et al.Simultaneous determination of iridoid glycosides,phenethylalcohol glycosides and furfural derivatives in Rehmanniae Radix by high performance liquid chromatography coupled with triple-quadrupole mass spectrometry[J].Food Chem,2012,135:2277-2286.
[10]杨培民.地黄清蒸不同时间梓醇和5-羟甲基糠醛的含量比较[J].中华中医药杂志,2010,25:1096-1098.

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