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摘要：目的分析claudin-4活性对人卵巢肿瘤细胞sKoV3凋亡和迁移的相关性。方法采集2017年4月至2019年4月于我院接受治疗的卵巢肿瘤患者200例，通过流式细胞仪检测与细胞划痕实验检测法，探讨claudin-4活性对人卵巢肿瘤细胞sKoV3凋亡和迁移的影响。结果通过研究发现，过表达claudin-4能够使sKoV3细胞的迁移能力得到有效增强；过表达claudin-4能够对sKoV3细胞的凋亡产生抑制作用。结论claudin-4活性与人卵巢肿瘤细胞sKoV3之间具有相关性，过表达claudin-4可对sKoV3细胞的凋亡产生抑制作用，还能够使sKoV3细胞的迁移能力得到有效增强。
关键词：claudin-4活性；人卵巢肿瘤细胞sKoV3；凋亡；迁移
本文引用格式：孙广宇.Claudin-4活性对人卵巢肿瘤细胞SKOV3凋亡和迁移的相关性分析[J].世界最新医学信息文摘,2019,19(83):75,81.
0引言
卵巢肿瘤是一种存在于女性卵巢上的肿瘤，同时也是女性生殖器中的常见肿瘤类型，可分为良性与恶性[1]。卵巢恶性肿瘤又可被称为卵巢癌，其发病率在女性生殖系统的恶性肿瘤中可达到第三位，同时该疾病所造成的死亡率最高。卵巢癌细胞本身的活性较强，同时具备较快的转移速度，该疾病位于早期阶段时的临床症状缺乏典型性，因此早期临床诊断存在较大困难[2]。Claudin-4蛋白作为多基因家族中的主要成员，本质是一种构成细胞间紧密连接的蛋白分子，能够对细胞极性与紧密连接屏障功能之间的维持起到重要作用[3]。Claudin-4对临床上多种恶性肿瘤之间存在关联性，根据相关资料显示，Claudin-4活性对人卵巢肿瘤细胞SKOV3具有紧密联系[4]。本次研究分析了Claudin-4与人卵巢肿瘤细胞SKOV3之间的关系，旨在探讨Claudin-4活性对KOV3凋亡和迁移的相关性，具体内容如下。
1材料和方法
1.1材料
本次研究所涉及的材料包括：人卵巢肿瘤细胞SKOV3，Hoechst 33342/PI双染试剂盒，pEGFP-N1质粒，pEGFP-N1-CLDN6质粒，Claudin-4羊抗人多克隆抗体，流式细胞仪。
1.2方法
通过实验后分为3组，包括Claudin-4组（转染过表达Claudin-4质粒pEGFP-N1-CLDN6的SKOV3细胞）、vector组（转染空载质粒pEGFP-N1的SKOV3细胞）、control组（不转染质粒的SKOV3细胞）。
细胞划痕法：通过细胞划痕实验对人卵巢肿瘤细胞SKOV3迁移能力进行判定，具体方法为：①使用马克笔于6孔板后划上均匀横线，以0.5~1 cm作为间隔距离，横穿过孔，确保每个孔均能够穿过至少5条线；②对3组的卵巢肿瘤细胞SKOV3进行消化计数，浓度为每孔5×105个细胞，于6孔细胞培养板内对3组细胞进行接种，使得第2天的融合率为100%；③第2天以20μL的移液吸头，使其垂直并于板后处做横线；④通过PBS对细胞洗涤，将划下细胞去除后，再添加无血清培养基；⑤添加5%的CO2后置于37℃培养箱内，以0 h、6 h、12 h、18 h、24 h作为观察的时间点，于各时间点取样，并记录好各划痕的间距。
Hoechst 33342/PI双染法：通过Hoechst 33342/PI双染法对人卵巢肿瘤细胞SKOV3凋亡水平进行判定，具体方法为：①对3组的卵巢肿瘤细胞SKOV3进行消化计数，浓度为每孔5×104个细胞，于6孔细胞培养板内对3组细胞进行接种；②待细胞生长至90%~95%时，通过胰酶进行消化处理，于离心管内做好细胞的收集，待离心后弃上清。使用0.8 mL的细胞染色缓冲液对细胞进行重悬，通过均匀吹打的方式，使细胞避免成团状；③将0.5μL的Hoechst染色液添加至各管细胞内；④将0.5μL的PI染色液添加至各管细胞内；⑤确认充分混匀后，于避光条件与冰浴条件下进行30 min的孵育；⑥于流式细胞仪上对蓝色荧光与红色荧光进行检测。
1.3统计学分析
数据纳入SPSS 23.0软件中分析，计量资料比较采用t检验，并以（±s）表示，P<0.05为差异显著，有统计学意义。
2结果
2.1细胞划痕实验对SKOV3各组细胞迁移能力的检测情况
经过对比后发现，Claudin-4组、vector组、control组之间的迁移距离差异大且有统计学意义（P<0.05）；通过LSD-t对比后显示，Claudin-4组、vector组、control组之间差异大且有统计学意义（P<0.05），vector组与control组之间差异小且无统计学意义（P=0.429），如表1。
2.2双染法流式细胞术对SKOV3各组细胞凋亡的检测情况
经过对比后发现，Claudin-4组、vector组、control组之间的凋亡率差异大且有统计学意义（P<0.05）；通过LSD-t对比后显示，Claudin-4组、vector组、control组之间差异大且有统计学意义（P<0.05），vector组与control组之间差异小且无统计学意义（P=0.121），如表2。
3讨论
Claudin作为一种构成紧密连接的重要骨架结构，可进一步构成细胞屏障，对上皮细胞间细胞膜的流动情况进行有效控制。根据研究发现，Claudin于卵巢肿瘤细胞内未出现明显失控情况，但于恶性肿瘤中，一部分Claudin蛋白的表达存在显著升高的情况。根据相关资料显示，Claudin蛋白的异常表达对卵巢恶性肿瘤的移植、入侵及转归具有重要意义，能够代表肿瘤发生途径，经过研究后可能会成为卵巢癌的诊断与治疗的靶点，可作为其新的标志物。
肿瘤细胞存在无法控制的生长、侵袭与转移，受到肿瘤细胞异变基因与蛋白表达的影响后，相较于正常细胞而言存活率更高。当肿瘤细胞之间的连接结构出现改变后，会对原细胞框架结构造成直接影响，进而导致肿瘤发生迁移与转移，使得细胞增殖能力得到显著增强。
本次研究通过细胞划痕法对Claudin-4组、vector组、control组的迁移能力进行检测，经过对比后发现，相较于vector组与control组，Claudin-4组的迁移距离更长，肿瘤切口愈合能力得到有效增强，表现为明显的迁移散播特性。通过Hoechst 33342/PI双染法与流式细胞仪的检测后发现，Claudin-4与SKOV3的细胞凋亡之间具有相关性，能够对SKOV3细胞的凋亡具有显著抑制作用。
综上所述，Claudin-4活性与人卵巢肿瘤细胞SKOV3之间具有相关性，过表达Claudin-4可对SKOV3细胞的凋亡产生抑制作用，还能够使SKOV3细胞的迁移能力得到有效增强。
参考文献
[1]刘健,吴会芳,赵亚伟,等.NEDD8共价修饰抑制因子MLN4924对人卵巢癌细胞株SKOV3增殖和凋亡的影响[J].中国免疫学杂志,2018,34(3):340-343.
[2]赵迪,黄馨禾,车建华,等.干扰HOTTIP对卵巢癌细胞SKOV3细胞侵袭、迁移能力及凋亡的影响[J].国际遗传学杂志,2018,41(2):73-78.
[3]蒋绍艳,常宏,邓少洁,等.细胞外基质金属蛋白酶诱导因子对人卵巢癌SKOV3细胞凋亡和迁移侵袭的影响[J].中国临床药理学杂志,2018,34(7):845-847.
[4]申丽媛,徐冬梅,刘潇涵,等.长春瑞滨诱导人上皮性卵巢癌细胞系SKOV3凋亡及降低端粒酶活性[J].基础医学与临床,2018,38(1):87-90.
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