江南星蕨中化合,抗氧化活性的研究论文

SCI论文（www.lunwensci.com）:

摘要：研究从江南星蕨中分离得到的7种化合物的体外抗氧化活性。采用1,1-二苯-2-苦基阱自由基(DPPH)清除法、羟基自由基(-OH) 清除法及还原能力，以维生素C (Vc)为阳性对照，分别检测江南星蕨中7种化学成分的抗氧化活性。结果显示化合物1、2、3、4、6、7及 Vc对 DPPH 自由基的半数抑制浓度(IC50)分别为(0.006±0.000,0.005±0.000, 0.028±0.001,0.006±0.001,0.033±0.003,0.026±0.002,0.002±0.000) mg/mL,化合物1、2、3、4、7及抗坏血酸(Vc)的吸光度值分别为1.6507、1.5047、1.3347、1.4220、1.0623、1.9454₀研究表明江南星蕨中 的化学成分具有较强的DPPH自由基清除能力和还原能力，说明江南星蕨中的化学成分具有着良好的体外抗氧化活性。

0引言

          江南星蕨（Microsorium fortunei （T.Moore） Ching ）又称为大 叶骨牌草、七星剑、旋鸡尾，是水龙骨科（Polypodiaceae ）星蕨属 的植物，大多分布在长江流域及以南各省区⑴。江南星蕨全草 及根茎都可入药，具有清热解毒、利湿、利尿、凉血止血、消肿止 痛等功效，可以治疗尿路感染、白带、黄疸、痢疾、风湿关节痛、吐 血、便血、跌打损伤、毒蛇咬伤等症庭】。虽然江南星蕨具有多种 药用功效，但关于其药理活性的研究少有报道。为了更好的探 究江南星蕨的药效物质基础，对其化学成分进行系统的研究具 有十分重要的意义。
肝脏是人核重要的器官,其主要功能是代谢。研究表明肝脏 负荷过大,去氧化能力下降会导致肝脏被自由基损伤，从而导致 肝脏疾病的产生⑹，这表明去氧化药物对人体肝脏有一定的保护 作用。此外，有研究证实，氧化应激是糖尿病多种并发症不同发 病机制的共同通路，而抗氧化剂可通过保护氧化应激通路来治疗 糖尿病并发症卩-气且该疗法显现出日益重要的作用。由此可知， 抗氧化剂对于肝脏保护以及糖尿病并发症的治疗具有重要的作 用。而当前的抗氧化剂大多是人工合成，容易引起便秘、腹泻、恶 心等不良反应⑼。因此，从天然产物中筛选出安全有效,且毒性 较低的抗氧化剂成为了许多学者的研究热点。研究表明江南星 蕨的乙醇、丙酮、乙酸乙酯提取物均具有较强的抗氧化活性煦。 为了进一步研发有效的体外抗氧化活性单体成分，此次试验拟 对江南星蕨中分离得到的化合物进行体外抗氧化活性研究。本 实验前期已从江南星蕨中分离得到咖啡酸、七叶内酯和迷迭香 酸等7个化合物（见表1 *气现拟对该7个化学成分进行体外氧 化活性筛选，为该植物的后期开发利用提供参考。

1实验材料与方法

1.1材料与试剂

         本文所使用的江南星蕨采于广西省平南县（经桂林医学 院黄德青副教授鉴定为江南星蕨：Microsorum fortunei ）_o维生素C,硫酸亚铁，30%过氧化氢，无水乙醇，三氯化铁，二 甲基亚根（西陇科学股份有限公司，批号分别为170112, 20160701,170313,1709161,160906,1709101 ）；水杨酸（国 药集团化学试剂有限公司，批号20150714） ；2, 2-联苯基-1- 苦基阱（DPPH ）（上海晶纯生化科技股份有限公司，批号 E1702052 ）；铁氟化钾（北京索来宝科技有限公司，批号Lot. No.20170630）；三氯乙酸（上海阿拉丁生化科技股份有限公 司，批号A1712004）；磷酸盐缓冲盐粉剂（北京雷根生物技术 有限公司，批号1228A16 ）_o

1.2仪器与设备

        酶联免疫检测仪（美国BioTek公司）；FE28型pH计、十万 分之一电子天平（梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司）：微量 移液器（德国Eppendorf ）_o

13方法

13.1样品提取与分离

        干燥的江南星蕨茎及叶，粉碎后用75%乙醇提取3次，减压 蒸傕至提取液无醇味，将蒸傕后的提取液，分别以一定体积的乙 酸乙酯和正丁醇萃取，得到乙酸乙酯和正丁醇2个萃取组分，取 乙酸乙酯组分采用硅胶柱层析进行分离，用不同比例的氯仿- 甲醇进行洗脱，得6个组分Fr.A〜F,取组分Fr.B利用MCI柱色 谱分离，用90%甲醇溶液洗脱，所得组分继续用SephadexLH- 20（甲醇）柱色谱分离，得到5个组分Fr.B-1〜B-5。取Fr.B-4 组分进一步采用中压反相硅胶柱色谱分离，以10%~100%的 甲醇溶液梯度洗脱，分离得到化合物1和2。取组分Fr.C用 MCI柱层析脱色,所得组分再经中压反相硅胶制备色谱分离，以 10%〜81%的甲醇溶液梯度洗脱，分离得到组分Fr.C-1〜C-24, 组分Fr.C-13即为化合物3,将组分Fr.C-14用制备液相色谱进 行分离得到化和物4、6、7,取正丁醇组分用硅胶柱色谱进行分 离，氯仿-甲醇洗脱,利用MCI柱色谱分离,再经甲醇溶液洗脱， 经反相硅胶柱层析以及RP-HPLC制备色谱分离，得到化合物5。 化合物1、2、3、4、5、6、7的结构见表l_o



13.2江南星蕨中化学成分的抗氧化活性测定

13.2.1自由基（DPPH •）清除能力的测定

        使用改进的DPPH法^［12'^14］对自由基清除活性进行测定: 样品用水配制成不同浓度（0.001,0.002,0.004,0.005,0.010,O.lOOmg/mL ）样液，然后配制DPPH溶液浓度为0.025mg/mL （无水乙醇溶液配制），取lOOgL新配置的DPPH原液，然后加 入lOOgL不同浓度的样品溶液，摇匀后于室温反应lOmin,在 517nm处测定吸光度值，采用Vc和蒸傕水作为阳性对照和空白 对照。DPPH自由基清除率用下式计算：清除率（%）= （1-A1/ AO） x 100_o

         A0：不含样品对照组;Al：药物组。

13.2.2对羟基自由基（-0H）清除能力的测定

        采用文献凹的方法加以修改，样品用水配制成不同浓度 （0.05,0.10,0.15,0.20,0.30,0.40mg/mL ）样液，在 96 孔板中依 次加入6mmol/L的FeS0450jiL （新制）,6mmol/L水杨酸-乙醇 溶液50卩L,再加入不同浓度样品溶液50卩L,最后加入6mmol/ LH20250卩L启动整个反应，37 Y反应30min后,510nm处测定 吸光度，采用Vc和蒸傕水作为阳性对照和空白对照。计算清除 率:清除率（%）=[1- （ Al-A2）/A0] x 100_o

      A°：不含样品对照组；A】：药物组；A?:不含也。2对照组。
13.2.3还原能力测定

          参照文献"6】的方法略加修改，将样品用磷酸盐缓冲溶液 （0.2M, pH=6.6 ）配制成不同浓度（0.01,0.03,0.05,0.10,0.30mg/ mL）样液。取2m LpH=6.6磷酸盐缓冲液（0.2M, pH=6.6 ）与 2mL待测样品溶液于试管中，混合2mL铁氟化钾溶液（1%, w/v ） 50龙孵育20min,再加入2.5mL三氯乙酸（10% , w/v ）中止反应， 3000r/min离心10min,取上清100|iL,混合100卩L的蒸傕水和 50卩L氯化铁（0.1%, w/v）,在700nm处测吸光度值，Vc作为阳 性对照。吸光度值越大，其还原能力越强。

13.2.4统计学处理

        所有实验均重复3次，应用SPSS 18.0统计软件计算半数抑 制浓度（IC50）及分析，数据以天±s表示，origin 8.5绘制抑制折 线图。

2结果与分析

2.1化合物对DPPH的清除能力

        由图1可知，随着各化合物浓度增大，对DPPH的清除能力 越强，化合物1、2、3、4、6、7对DPPH的清除能力具有明显的量 效关系;且这6种化合物对DPPH自由基的清除能力与天然抗 氧化剂抗坏血酸（Vc）非常接近，都能较快达到最大清除能力; 在浓度为O.Olmg/mL时清除率均达60%以上，接近阳性对照抗 坏血酸（Vc ）的清除能力。而化合物5对DPPH的清除能力较弱， 在浓度为0.01mg/mL时清除率为8.54%。化合物1、2、3、4、6、7 及 Vc 清除能力的 IC50 值分别为（0.006 ± 0.000,0.005 ± 0.000, 0.028 ± 0.001,0.006 ± 0.001,0.033 ± 0.003,0.026 ± 0.002, 0.002 ± 0.000 ） mg/mL。




2.2化合物对羟基自由基的清除能力

           由图2所示结果可知，所测定的7个化合物对羟基自由基 （・OH）体外清除作用较弱，在相同浓度下，抗坏血酸（Vc）对 羟基自由基（・OH）的清除作用比化合物对羟基自由基（-OH） 的清除作用强，且随着浓度的逐渐增大，抗坏血酸对羟基自由 基（・OH）的清除能力逐渐增强。在最高浓度为0.4mg/mL时， 抗坏血酸的对羟基自由基（-OH ）的清除率为99.74%,其IC50 值为0.088mg/mL;而化合物1、2、3、4、5、6、7的清除率分别为 30.97%,26.32%,34.25%,32.92%.18.84%.15.91%.21.62%,此 结果表明化合物对羟基自由基没有明显的体外清除作用。


23化合物的还原能力

         对7种化合物的还原能力进行测定，并与常见的抗氧化剂 (Vc )进行比较，由图3所示结果可知，随着浓度增加，吸光度值 逐渐增大，即还原能力越来越强。在浓度为0.3mg/mL时，化合 物1、2、3、4、5、6、7及抗坏血酸(Vc )的吸光度值分别为1.6507、 1.5047、1.3347、1.4220、0.0663、0.3490、1.0623、1.9454。此结果 表明，除化合物5和6以外，其余四个化合物均具有较强的还原 能力，但在同浓度条件下，其还原能力均稍低于抗坏血酸(Vc)。




3讨论

       李培源等人已经证实江南星蕨提取物具有体外抗氧化的作 用⑰,本课题组在前期研究的基础上⑴］,进一步对江南星蕨中化 学成分的抗氧化活性进行了研究。由于体外抗氧化评价方法快 速、高效，因此，本实验分别采用DPPH自由基清除法、羟基自由 基清除法以及还原能力对江南星蕨中7种化合物的体外抗氧化 活性进行研究。
结果表明，除化合物5外的六个化合物对DPPH自由基具 有较强的清除能力，化合物3的IC50为0.028 ± 0.001mg/mL,而 Vc的IC50 * 0.002 ± 0.000mg/mL, Z1者的半数抑制浓度极其接 近，说明化合物3对DPPH的清除能力接近维生素C_o所有化合 物对羟基自由基(・OH)的清除能力都相对较弱；其次除化合物 5和6外的五个化合物均有着较强的还原能力。且在一定范围内， 随着化合物浓度的增加，其清除能力和还原能力逐渐增加，呈现 一定的量效关系。本次研究在前人研究的基础上发现了江南星 蕨有效的体外抗氧化活性单体成分，为进一步开发江南星蕨抗 氧化活性药物奠定了理论基础，以及为在后续研究中进一步开 展此植物的其他药用价值提供参考。

参考文献

［1］ 蒋太白，周曦曦，王祥培，等.民族药江南星蕨化学成分定性鉴别研究［)］• 中国民族医药杂志,2017,23(7):58-60.
［2］ 魏德胜，曾莉莉，王用平，等.江南星蕨泡子繁殖试验［J］ .中草 药,1999,30(3):224-225.
［3］ 徐艳，石雷，刘燕，刘保东，等.江南星蕨配子体形态发育的研究［)］.植 物学报,2004,21(6):660-666.
［4］ 孙翠荣，程存归.江南星蕨挥发油的提取与化学成分的GC-MS分析［)］. 林产化学与工业,2004,24(2):87-88.
［5］ 周虹云，徐润生，程存归.江南星蕨的化学成分研究［)］.中国现代应用 药学,2009(2):119-122.
［6］ 高恩怡，龚红菲，张艳群，等.黑枸杞提取物对HBV的抑制作用及抗 ■ 能力测定皿食品工业科技,2018(1):29-33.
卩］ Lovato L C. Effects of intensive glucose lowering in type 2 diabetes - NEJMQ］. Journal of Vascular Surgery,2008,48(3):770-770.
［司 Lozano R, Naghavi M, Foreman K, et al. Global and regional mortality from 235 causes of death for 20 age groups in 1990 and 2010: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2010。］. Lancet, 2012, 380 (9859):

关注SCI论文创作发表，寻求SCI论文修改润色、SCI论文代发表等服务支撑，请锁定SCI论文网！
文章出自SCI论文网转载请注明出处：https://www.lunwensci.com/yixuelunwen/5264.html