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摘要：复方铁草胶囊由铁包金、白花舌蛇草、半枝莲、玄参、等组成。具有消肿散结、驱邪扶正之功，其临床效果显著。
本文采用腹腔注射CY致免疫低下的肝癌H22荷瘤小鼠作为模型，来探讨壮药复方铁草胶囊（ZT）对肝癌小鼠NK细胞活性及细胞因子含量的影响。
来证实ZT可提高免疫低下肝癌H22荷瘤小鼠的免疫功能，但对地塞米松致免疫低下的肝癌H22荷瘤小鼠的细胞因子IL-2、TNF-β无明显作用。运用此实验为药物的临床应用提供了一定的理论依据。
关键词：复方铁草胶囊；肝癌H22；免疫功能
本文引用格式：邹静,郑作文.壮药复方铁草胶囊（ZT）对肝癌小鼠NK细胞活性及细胞因子含量的影响[J].世界最新医学信息文摘,2019,19(25):98-99.
0引言
复方铁草胶囊作为一种著名壮药，其组成成分比较复杂，具体包括铁包金、白花蛇舌草、半枝莲、玄参等。复方铁草胶囊能够起到消肿、祛瘀、驱邪等功效，具有良好的使用效果。
药方中铁包金临床上多用来消肿、散淤，同时还可以起到解毒、祛湿的作用，因此对于各种原因引起的疮疡肿胀、跌打损伤等具有良好效果；白花蛇舌草是治疗肿瘤的常用中药，具有清热解毒、软坚散结之功。研究表明,白花蛇舌草还可以起到抑制肿瘤细胞的作用。
1实验材料
1.1主要药品。壮药复方铁草胶囊浸膏（广西民族医药研究所，批号：20170521）；注射用环磷酰胺；0.9%氯化钠注射液；新生牛血清
1.2瘤株。小鼠H22肝癌细胞株，以腹水型传代保种，临用抽取H22腹水，以灭菌生理盐水稀释备用。
1.3主要仪器。洁净工作台；恒温水浴锅；CO2培养箱；80-2离心机（上海手术机械厂）；倒置显微镜；培养瓶；微量移液器；十万分之一电子天平。
1.4实验动物。昆明种小白鼠60只，其中雌雄各30只，SPF级。合格证号：桂医动字第11004号
2实验药物
壮药复方铁草胶囊药液的配制：将壮药复方铁草胶囊浸膏置于60℃水浴锅内，使结块溶解，待其温度降至室温，精密称取49.3 g，用超纯水定容至240 mL，得相当于生药浓度1 g/mL的药液，将所得药液与水按2:1体积稀释，得复方铁草高剂量药液（20 g/kg），取上述高剂量药液，加等体积水稀释，得中剂量药液（10 g/kg），以相同方法等体积稀释中剂量药液得低剂量药液（5 g/kg）。将上述药液置于4℃冰箱保存备用。
环磷酰胺的配制：取环磷酰胺注射用灭菌粉末0.0075g，加10 mL无菌生理盐水配制成0.75 mg/mL的水溶液，所得药液于1 h内使用。
3实验方法
3.1肿瘤悬液的制备与接种。无菌离心收集H22细胞，调整细胞浓度为1.0×106 cells/mL，备用。取雌性昆明小鼠10只，以0.2 mL/只接种上述H22细胞，于8-10 d后，无菌抽取腹水，第19天将上述小鼠右侧腋部皮肤消毒，以0.2 mL/只接种浓度为1.0×107 cells/mL的H22细胞。
3.2分组与给药。将事先准备好的昆明小鼠按照随机分组法分为五组，每组12只，其中雌雄各一半。分组小鼠分别是空白对照组、模型组、复方壮药铁草胶囊高、中、低剂量组，复方壮药铁草胶囊高、中、低剂量分别为20 g/kg、10 g/kg、5 g/kg。
灌胃给药，其中空白组和模型组使用生理盐水，复方壮药铁草胶囊高、中、低剂量组分别按照对应剂量实施给药。五组小鼠连续给药18天，并在灌药每三天进行称重，根据称重结果调整给药剂量。
19天时对模型组以及复方壮药铁草胶囊高、中、低剂量组小鼠实施注射，方式为腹腔注射，药物为环磷酰胺（给药剂量为0.015 g/kg,给药体积为20 mL/kg），空白组小鼠则接受生理盐水腹腔注射。针对模型组、复方壮药铁草胶囊高、中、低剂量组小鼠隔天皮下注射地塞米松（给药剂量为5 mg/kg，给药容积为10 mL/kg），此外，所有小鼠继续接受灌药10天。
3.3.1ZT对免疫抑制肝癌H22荷瘤小鼠NK细胞活性的影响实验观察指标与观察方法：对小鼠最后一次灌药后，将小鼠处死，将其放入75%的酒精中浸泡，时间为5分钟。
取出小鼠脾脏，注意操作过程保证无菌；将脾脏放入平皿中，去掉相关结缔组织，然后使用生理盐水对脾脏进行清洗。使用无菌剪子将脾脏剪碎，然后放入RPMI1640完全培养液中，进一步使用注射器芯得到单个细胞悬液，使用200目不锈钢网进行筛除；将得到的脾脏使用RPMI1640完全培养液进行清洗，并在4度无菌环境下进行离心，取出得到的上清液体。
取出靶细胞和脾细胞悬液各100 ul，将其注入培养板，设置五个小组的培养液对照；靶细胞对照孔加靶细胞以及RPMI-1640培养液各100μl，每个小组加入RPMI-1640培养液各100μl。
在此基础上在每个标本设置五个复孔，在对应环境下实施孵育，具体环境为温度控制在37度，5%的CO2培养箱。培育时间为4小时，实施离心操作，取出其中的上清液体，在每个孔内加入DMSO150μl，实施振荡，具体时间为10 min。
按照对应公式计算NK杀伤活性，具体结果以杀伤率表示。K细胞杀伤率(%)=[1－（实验孔OD值－效应细胞对照孔OD值）/靶细胞对照孔OD值]×100％
3.3.2ZT对免疫抑制H22荷瘤小鼠细胞因子的影响实验观察指标与观察方法：末次药后1 h，检测小鼠的IL-1、TNF-β的含量。
3.4统计学分析。计量资料以（±s）表示，两组间均数差异用t检验(方差不齐时采用t检验校正公式)，统计软件SPSS13.0。
4实验结果
4.1ZT对免疫抑制H22荷瘤小鼠NK细胞活性的影响。实验结果表明，与空白组比较，模型组有差异（P<0.01），提示环磷酰胺降低了肝癌H22荷瘤小鼠的NK细胞活性，使肝癌H22荷瘤小鼠的免疫功能降低。
与模型组比较，ZT高、中、低剂量组均有显著差异（P<0.01），提示ZT高、中、低剂量组能明显提高环磷酰胺致免疫低下的肝癌H22荷瘤小鼠的NK细胞活性。
4.2ZT对免疫抑制H22荷瘤小鼠细胞因子的影响。实验结果表明，与免疫抑制模型组比较，IL-2空白对照组有显著性差异（P<0.05），TNF-β空白对照组有非常显著差异（P<0.01），这一结果说明复方壮药铁草胶囊高、中、低剂量组与地米模型组之间的差异无统计学意义（P<0.05），据此可以推断，复方壮药铁草胶囊高、中、低剂量组对地塞米松所致免疫低下的荷瘤小鼠的细胞因子IL-2、TNF-β无明显作用。
5结论
ZT可提高免疫低下肝癌H22荷瘤小鼠的免疫功能，对地塞米松致免疫低下的肝癌H22荷瘤小鼠的细胞因子IL-2、TNF-β无明显作用。
6讨论
NK细胞是人体内一种特殊细胞，它能够参与到机体的非特异性免疫作用过程中来，具体包括各种抗感染以及抗肿瘤反应，在这个过程中，NK细胞能够杀伤靶细胞，也就是人体内发生感染的细胞以及肿瘤部位对应的肿瘤细胞，其中比较独特的一点在于NK细胞不需要抗原刺激，也不需要抗体或者相关补体的协助，反应迅速，作用明显。
本实验结果提示环磷酰胺降低了肝癌H22荷瘤小鼠的NK细胞活性，使肝癌H22荷瘤小鼠的免疫功能降低。提高NK杀伤能力对杀灭肿瘤细胞，维持机体稳定和防御疾病有重要意义。ZT提高NK活性的作用机制可能是通过激活NK细胞内某种潜在杀伤因子或解除某些抑制因素，增加NK细胞杀伤活性。
细胞因子(cytokine)能特异性地杀伤肿瘤细胞对多种实验移植瘤有明显的抑制作用。实验结果提示地塞米松能降低荷瘤小鼠细胞因子IL-2、TNF-β的含量，ZT高、中、低剂量组对地塞米松所致免疫低下的荷瘤小鼠的细胞因子IL-2、TNF-β无明显作用。
由于ZT为一复方制剂，其抗肿瘤作用机制较为复杂，其体内外抗肿瘤作用是毋庸置疑的，但可能不作用于细胞因子形成通路故对地塞米松所致免疫低下的荷瘤小鼠的细胞因子IL-2、TNF-β无明显作用。本实验为药物的临床应用提供了一定的理论依据。
参考文献
[1]张玲,王芸,毛海婷,等.淫羊藿苷抑制肿瘤细胞端粒酶活性及其调节机制的研究[J].中国免疫学杂志,2002,18(3):191-196.
[2]宁安红,曹蜻,黄敏,等.灵芝多糖对小鼠肿瘤的抑制作用及免疫指标的观察[J].肿瘤研究与临床,2004,06(26):247-249.
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