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摘要：目的探讨常规体外受精(IVF-ET）中，3PN的出现对临床结局的影响。方法回顾性分析2015年全年在我院生殖中心行IVF治疗的3184个周期的临床数据，根据是否存在异常受精情况分为有异常受精组和无异常受精组。此外，又将有异常受精组分为A组（3PN≤25%）和B组（3PN>25%）。分析3PN的出现对IVF-ET周期临床结局的影响。结果有异常受精组与无异常受精组相比，优胚率、囊胚形成率、临床妊娠率和流产率无明显差异（P>0.05）；女方年龄、获卵率和卵裂率有明显差异（P<0.05）。有异常受精组分组比较，卵裂率无明显差异（P>0.05）；女方年龄、获卵率、优胚率、囊胚形成率、临床妊娠率和流产率见有明显差异（P<0.05）。结论IVF-ET周期中，3PN形成与女方年龄和获卵数有关，并且影响卵裂率。此外，当周期中存在异常受精且异常受精比例超过>25%时，可降低患者该周期的优胚率、囊胚形成率和临床妊娠率。因此，在进行辅助生殖技术（ART）时应综合考虑这些因素，有助于提高正常受精率，降低异常受精率，从而提高临床妊娠率。
关键词：体外受精；胚胎；3原核(3PN)
本文引用格式：吴玥,程东凯,于洪君,等.3PN对IVF-ET周期临床结局的影响[J].世界最新医学信息文摘,2019,19(96):188,190.
0引言
3原核(3PN)发生率在所有妊娠中估计约为1%~3%，而在自然流产的细胞遗传学异常病例中占15%~18%。流产通常发生在发育早期，但也有少数存活时间较长的报道[1]。3PN的形成有两种情况：一种是一个雌原核和两个雄原核的组合，另一种是一个雄原核和两个雌原核的组合。有研究表明，3PN的发生是高龄产妇或IVF周期中严重的精子异常所致[2]。换句话说，3PN的发生可能与精液正常时的卵母细胞质量有关。目前还不清楚3PN的发生率是否可以作为体外受精周期结果的一个预后指标，但可以确定的是通过减少3PN的发生率，可以使卵母细胞的利用率增加，从而提高妊娠的机会。本研究通过对3184个IVF-ET周期的病历资料进行回顾性分析，探讨异常受精与女方年龄、获卵数、卵裂率以及妊娠率等指标的关系。
1对象与方法
1.1一般资料
本研究并得到了沈阳东方菁华医院伦理审查委员会的批准。收集2015年在沈阳东方菁华医院行IVF治疗的3184个周期的临床资料，根据是否存在异常受精的情况分为异常受精组和无异常受精组。异常受精组共1316个周期，无异常受精组共1868个周期。其中根据异常受精率的高低将异常受精组再分为两组：A组(异常受精率≤25%，n=943)和B组(异常受精率>25%，n=373)。
1.2方法
促排卵：按照患者的不孕类型、年龄及卵巢功能选择适宜的促排卵方案。当>3个卵泡为18mm时，给予10000单位人绒毛膜促性腺激素(hCG)。36小时后经阴道超声引导抽吸取卵。获取的卵丘-卵母细胞复合物（OCCs）置入Falcon3001培养皿HTF-HEPEs（Irvine Scientific公司）洗涤后，转入HTF（Quinn s公司）中，置入体积分数6%CO2培养箱中行受精前培养。
1.3授精与胚胎培养
每个受精皿加入经上游处理的活动精子约12万/mL，受精后16-18h在倒置显微镜200-400×下观察受精情况，记录原核数目及其他情况。
D3评估胚胎卵裂和形态外观。形态学评分给出第三天胚胎卵裂球的数量，均匀程度的卵裂球和胞质分裂程度：一级(8-10卵裂球，甚至是齐次卵裂球<10%细胞质分裂)，二级(6-7甚至>10卵裂球均匀卵裂球没有细胞质的分裂；8-10个卵裂球，均匀的卵裂球，10%-20%胞质破碎)，III级(不均匀和非均匀的卵裂球，胞质碎片20-50%。D5D6进行囊胚评分，参照Gardner等提出的囊胚评分方法，本中心将≥4BC的囊胚定为可利用囊胚。
1.4统计学方法
采用SPSS 17.0进行统计分析。计量资料如满足正态性和方差齐，采用t检验，如不满足，采用非参数检验，计数资料采用2检验，P<0.05为差异有统计学意义。
2结果
本研究回顾性分析了3184个IVF周期，共获卵32144枚，受精23198枚，受精率72.17%。其中1868个无异常受精周期，获卵14762枚，受精10070枚，受精率68.22%，1316个有异常受精周期，获卵17382枚。
有异常受精组与无异常受精组比较：优胚率、囊胚形成率、临床妊娠率和流产率无明显差异（P>0.05），女方年龄、获卵率和卵裂率有明显差异（P<0.05）。见表1。
有异常受精组按照异常受精的比例分为A组（3PN≤25%）和B组(3PN>25%），两组比较卵裂率无明显差异（P>0.05），女方年龄、获卵率、优胚率、囊胚形成率、流产率和临床妊娠率有明显差异（P<0.05）。见表2。
3讨论
3PN的结果可能来自多精子受精，也可能来自卵母细胞衍生的减数分裂失败。所有卵子的一个共同特征是它们必须与一个精子结合，而且只能与一个精子结合。引起3PN受精的原因是复杂的。一些研究者认为，IVF后3PN受精的发生是高龄产妇或严重的精子异常所致，其他研究人员认为，3PN的倾向是卵巢刺激的一种功能，如高峰E2水平、大的卵母细胞产量、高促性腺激素剂量和长时间的刺激[3]。Wolf等人指出在IVF周期中高精子浓度与多原核出现的关系，清楚地表明精子浓度的增加与多精子发生率的增加直接相关[4]。相关研究表明，当精子质量下降时，多精子的发生率较低，卵的大小对多精子发生的风险有影响[5]。
IVF受精导致的3PN的形成可能是由于多精[6]。毫无疑问，3PN的形成导致了day-3级I+II+III胚胎数量的减少。但3PN的形成是否与临床结果相关一直存在争议。如果它不会导致更糟的临床结果，预防3PN的形成似乎是不必要的Dayal等人的研究发现，小于20%的胚胎出现3PN的患者的妊娠、植入、临床妊娠和活产率明显高于20%的胚胎出现三倍体的患者。Rosen等人的研究表明，这部分患者的3PN形成是显著的种植负预测因子[7]。Li等人发现，当3PN发生率>25%时，妊娠风险降低约50%，流产风险增加3.5倍[8]。而Qin等人回顾性分析了他们的IVF-ET数据，发现IVF-ET中的3PN发生率对种植率和妊娠率没有显著影响[9]。Zeng等人认为较高的3PN率可以降低传统IVF-ET周期的妊娠率，但在他们的研究中病例数量有限[10]。
本研究回顾性分析2015年全年在我院生殖中心行IVF治疗的3184个周期的临床数据。结果发现，有异常受精组与无异常受精组相比，优胚率、囊胚形成率、临床妊娠率和流产率无明显差异。女方年龄、获卵率和卵裂率有明显差异。AB两组比较，卵裂率无明显差异。女方年龄、获卵率、优胚率、囊胚形成率、临床妊娠率和流产率有明显差异。以上结果表明女性年龄及获卵数可能与3PN的出现有很大的关系。
综上所述，我们的研究结果表明，当收集到的卵母细胞数量较高且女性年龄较高时，3PN形成的风险更高。此外，预防出现3PN的高比例受精卵似乎是必要的，因为这将减少正常受精、第3天I+II级胚胎、第3天I+II+III级胚胎和着床率。毫无疑问，需要一项前瞻性研究来进一步证实我们的发现。
参考文献
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[2]王巍,吴福敢,马海兰.常规体外受精后多精受精发生对妊娠结局的影响[J].生殖医学杂志,2013,22(10):802-805.
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[6]刘春玲,吴晓云,朱玉蓉,等.IVF周期中短时受精的安全性研究[J].中国优生与遗传杂志,2017,(5):135-137.
[7]Rosen M P,Shen S,Dobson A T,et al.Triploidy formation after intracytoplasmic sperm injection may be a surrogate marker for implantation[J].Fertility&Sterility,2006,85(2):384-390.
[8]Mingzhao L,Wanqiu Z,Xia X,et al.Three pro-nuclei(3PN)incidence factors and clinical outcomes:a retrospective study from the fresh embryo transfer of in vitro fertilization with donor sperm(IVF-D)[J].International Journal of Clinical&Experimental Medicine,2015,8(8):13997-4003.
[9]Qin X E,Zhang B,Feng G X,et al.Effects of polyspermy on the clinical outcomes of in vitro fertilization and embryo transfer[J].Chinese Journal of Birth Health&Heredity,2011.
[10]Zeng XG,Li MD,Liu YG,et al.Effects of polyspermy on the embryo development and clinical outcomes of in vitro fertilization and embryo transfer[J].J Third Mil Med Univ,2013,35:2111-2112.
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