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摘要：目的探讨电针少阴心穴对脑缺血损伤的影响及神经保护作用的影响。方法采用二次随机的方法将SD大鼠分为正常组，模型组，假手术组，肺经组和心经组，每组10只。通过颈外动脉插入法复制局灶性脑缺血模型，分别进行捆绑或捆绑+针刺处理。在造模后6、24、48、72h分别进行电针治疗，每次取相同时间—30min。结果相比与正常组和假手术，模型组血清Nogo-A含量增加（P<0.01）。心经组和肺组均小于模型组（P<0.01），心经组优于肺组（P<0.01）。结论电针对降低血清中Nogo-A表达有显著效果，对修复脑缺血后损伤的神经具有一定促进作用，且心经组效果较明显。
关键词：MCAO大鼠；电针；心经穴
本文引用格式：武娟,洒玉萍,曹宁丽,等.针心经穴对急性脑缺血大鼠血清神经生长抑制因子的影响[J].世界最新医学信息文摘,2019,19(78):112-113.
0引言
近些年来针灸被大量用于治疗脑血管疾患，尤以治疗脑梗死居多，治疗结果较为理想。研究发现[1-2]针灸通过干预脑缺血的危险因素来防止脑血管疾病的发生，针灸对患者语言、运动、神志等功能的恢复，防止并发症的发生有明显的作用[3-5]。针刺心经输穴并通电可以防止损伤后的脑血管组织细胞凋亡和炎性的损伤[6-7]，此次实验电针局灶性脑缺血模型大鼠观察大鼠神经功能缺损、血清中Nogo-A的表达。
1材料与方法
1.1动物与分组
由湖南中医药大学实验动物中心提供，动物合格证号：SCXK(湘)2011-0003，3~4月龄SPF级健康成年雄性SD大鼠50只，体重220~250g。实验前所有动物均在安静环境下饲养，其饲养笼具、垫料、饲料、饮水均按照SPF级实验动物的要求进行制备和消毒，室温22℃，相对湿度55%~70%，造模前禁食1d。动物分组采用先造模后分组的方式，将大鼠随机分为5组，每组10只。正常对照组：正常喂养，予以捆绑处理；假手术对照组：分离出血管后不插线，捆绑处理；模型对照组：造模，捆绑处理；心经组：造模＋电针心经穴；肺经组：造模＋电针肺经穴。
1.2主要试剂与仪器
主要试剂：Nogo-A酶联免疫(ELISA)试剂盒；Nogo-A兔抗鼠抗体；均由武汉博士德生物有限公司提供。
主要仪器：SDZ-II华佗电针治疗仪、华佗牌0.30mm×15mm毫针（苏州医药用品厂有限公司）；全自动酶标洗板机(汇松PW-812)；酶标仪(汇松MB-530)；电热恒温干燥箱(光都DHG-900Z-0型)。
1.3造模方法
选取大鼠大脑中动脉持久性局灶性缺血模型。参照Zea Longa和Koizumi[8-9]报道的方式，即用颈外动脉插入线栓法建立MCAO脑缺血模型。造模完成后对各组大鼠采取Zea Longa 5级4分制评分：无神经功能缺损计0分；梗死对侧前爪内收、伸直障碍计1分；向偏瘫侧转圈者计2分；行走时向偏瘫侧倾倒计3分；意识丧失、不能行走计4分。选取评分为1-3分的大鼠纳入观察。假手术组仅露出颈部正中切口，不做其他处理。实验过程中对动物的处置遵循中华人民共和国科学技术部2006年颁布的《关于善待实验动物的指导性意见》。
1.4针刺方法
根据《实验针灸学》[10]动物穴位图谱及拟人比照法定位，依次选取肢体患侧不同分段的常用穴位，作为心经、肺经的代表穴。手少阴心经选取神门、灵道、少海、极泉；手太阴肺经选取太渊、列缺、尺泽、天府。
于造模后6、24、48、72h时进行治疗，针刺肢体患侧上肢，使用15mm、36号毫针，针刺深度3-4mm，接SDZ-Ⅱ型电针治疗仪。“神门”“灵道”一组，“少海”“极泉”一组，“太渊”“列缺”一组，“尺泽”“天府”一组，阳极接近心端穴位，阴极接远心端穴位，采用连续波，以局部组织轻颤为度，时间30min。
1.5观察指标及检测方法
大鼠血清中Nogo-A含量的检测：治疗结束后，所有大鼠用10%水合氯醛（0.3mL/100g）腹腔注射麻醉，腹主动脉插管取血4-5mL，静置30min后离心(3000r/min,15min)，用移液枪抽取上清液，严格按照试剂盒的操作说明，应用ELISA法检测血清Nogo-A的浓度。以标准物的浓度为横坐标，吸光度(OD)值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度，再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
1.6统计学方法
计量资料采用均数加减标准差（±s）表示。所有资料进行正态性检验。符合正态分布者，多组计量资料采用单因素方差分析，方差齐者用LSD法和SNK法，方差不齐者用Tambane's T2或Dunnett's T3法。不符合正态分布者，采用多个独立样本比较的秩和检验。所有数据均采用SPSS 17.0统计软件进行分析，结果以P<0.05为差异有统计学意义。
2结果
2.1各组大鼠神经功能缺损评分的比较
从分析可以看出，正常组和假手术组不能引起神经功能缺陷；心经组神经功能缺损评分随时间显着下降，差异有统计学意义（P<0.05）；心组神经功能缺损程度在不同时间有所不同（P<0.01，P<0.05），有人提出，电针心经穴位对大鼠神经功能缺损的症状有改善作用。
2.2各组大鼠血清Nogo-A水平的比较
由表可知：与正常组、假手术组比较，模型组血清中Nogo-A含量均升高（P<0.01）；与模型组比较，心经组、肺经组血清中Nogo-A的含量降低（P<0.01）；与肺经组比较，心经组Nogo-A含量降低（P<0.01），说明电针的干预调节作用具有经脉的特异性，心经组作用优于于肺经组。
3讨论
中枢神经系统的修复情况决定脑缺血患者的康复状况，在脑血管新生为结构基础的前提下[11-12]，Nogo蛋白家族中的一员—Nogo-A，是由少突角质细胞合成的一种神经生长抑制因子，对抑制CNS损伤后轴突再生发挥着重要作用[13]。由大量文献我们可以了解到[14-18]，针刺“内关”“足三里”“水沟”“百会”等穴，对增加内源性神经生长因子的表达有显著作用，大鼠脑缺血后突触超微结构的改变，神经修复的促进，肢体功能的改善都有赖于生长因子的表达，以此来预防脑缺血后的损伤。与此同时有研究[19-20]表明：电针治疗可以抑制脑缺血区神经生长抑制因子Nogo-A的表达，促进神经轴突再生，减小脑梗死后的神经损害。
如《素问痿论》中所述：“心主身之血脉”，《素问六节》：“诸血者皆属于心”，故二者的关系是功能活动和物质基础的关系。中医藏象学说中，心统管脑，脑的生理和病理皆由心主管，而又分属于五脏，认为心是“五脏六腑之大主[21]”，经络内属脏腑外络肢节，经络系统的运输传导、联络调节，对人体脏腑器官的功能活动，气血津液的运行，以及脏腑之间的联系和协调得以实现，从而形成一个有机的整体[22]。本次实验我们选用心经穴进行电针，是因为心所属心经，与心有着密切的联系。手少阴心经“起于心中，联系心系、肺、咽及目系，属心络小肠，浅出腋下，循行于上肢内侧后缘，止于小指桡侧端。”其经筋“起于手小指内侧，交手太阴经筋伏行于孔头里，结于胸中，沿脑向下，联系于脐部。”
（1）在生理上：手少阴心经可以加强心与体表、及他脏之间的联系，如《灵枢海论》曰：“夫十二经脉者，内属于腑脏，外络于肢节”。
（2）从病理上：手少阴心经为病，就会表现为：口干咽燥，心口痛，口渴，喜饮，前臂的麻木酸痛等，如《灵枢经脉》曰：“益干，心痛，渴而欲饮，是为臂厥”。《灵枢本神》：“心藏脉，脉舍神，心气虚则悲，实则笑不休”。《灵枢五邪》：“邪在心，则病心痛，喜悲，时眩仆……”。
（3）治疗上：手少阴心经可以治疗与心相关疾病，如《素问刺热》：“心热病者，先不乐，数日乃热。热争则卒心痛，烦闷善喉，头痛、面赤无汗……刺手少阴、太阳”，宋王惟一《新铸铜人腧穴针灸图经》曰：“灵道治心痛悲恐”。
上述理论再次证明心与脑密不可分，正因如此历代医家在治疗与脑相关疾病时，都会用到手少阴心经的相关经穴。如王惟一《新铸铜人腧穴针灸图经》曰：“少海治寒热齿麟痛，目瞭发狂”。皇甫谨《针灸曱乙经卷七》曰：“风陵头痛，少海主之”。杨继洲《针灸大成》：“神门去心性之呆疾”。徐凤《针灸大全》：“心中惊悸，言语错乱，取少海二穴，少府二穴，心命二穴”，心性呆疾，悲泣不已，取通里二穴，后溪二穴，神门二穴，大钟二穴”。近代医家根据以上理论，取手少阴心经的相关经穴治疗与脑相关疾病如中风、癲痫、痴呆、脑萎、神经衰弱等疾病，也都取得了不错的临床疗效。
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