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摘要：目的探讨在新疆地区食管癌与宫颈组织中感染的人乳头瘤状病毒（Human papillomavirus，HPV）的亚型差异。方法用反向斑点杂交的方法分别对1200例我院门诊就诊的妇女宫颈脱落细胞和140例食管癌石蜡组织标本进行HPV亚型进行检测。结果在门诊1200例宫颈液基细胞中HPV总的感染率为8.9%（107/1200），其中高危型HPV中HPV-16的感染率为4.9%（59/1200），其次为HPV-59，感染率为0.8%（10/1200）；在140例食管癌组织中，HPV总的感染率为36.4%（51/140），其中高危型HPV中HPV-16的感染率为27.1%（38/140），其次为HPV-18，占1.4%（2/140）。结论在新疆地区宫颈组织和食管癌中主要感染的HPV亚型均为HPV16。
关键词：HPV亚型；食管癌；宫颈组织；新疆地区
本文引用格式：高丽敏,郑义,白瑞,等.新疆地区食管癌与宫颈组织感染的HPV亚型差异的研究[J].世界最新医学信息文摘,2019,19(73):366+368.
0引言
流行病学调查显示，新疆地区维吾尔族妇女宫颈癌患病率病死率和哈萨克族食管癌的标化死亡率均高于全国平均水平[1-2]。大量研究表明，宫颈癌以及食管癌的发生均与HPV的感染有密切的关系[3-4]，然而该地区宫颈组织中和食管癌组织中HPV型别分布是否有差异呢？本研究旨在通过对新疆地区宫颈组织中和食管癌组织中HPV型别分布差异状况的研究，为揭示HPV在宫颈癌以及食管癌中的分子机制提供重要的理论依据。
1材料与方法
1.1材料
1.1.1食管标本来源食管标本均为石蜡包埋的癌组织。收集2000-2018年石河子大学医学院第一附属医院以及各兵团医院病理科确诊食管癌石蜡包埋组织标本140例。
1.1.2宫颈标本来源选取2016年-2018年我院门诊就诊的妇科患者，1200例，用液基细胞学的方法收集宫颈脱落细胞[2]。
1.2方法
1.2.1DNA抽提食管癌蜡块组织NDA抽提。取10片5μm厚石蜡包埋的食管癌组织，经二甲苯脱蜡后再加入蛋白酶K（20 G/L）1 mL，55℃震荡后过夜消化，然后95℃水浴10 min灭活蛋白酶K，梯度酒精水化后，酚/氯仿/异戊醇法抽提。宫颈脱落细胞NDA抽提。将含有宫颈脱落细胞的TCT保存液，2000转/分离心，获取宫颈脱落细胞后，同食管癌石蜡包埋组织的NDA抽提方法，使用常规酚/氯仿/异戊醇法抽提[3]。
1.2.2PCR。HPV通用引物选择GP5+/6+，具体序列如下：GP5+5’-TTTGT TACTG TGGTA GATAC TAC-3’，GP6+5’-GAAAA ATAAA CTGTA AATCA TATTC3’。对抽提的宫颈脱落细胞DNA以及食管癌组织DNA进行HPV DNA扩增，用凝胶电泳的方法判断扩增结果，HPV阳性样本采用基因芯片的方法进一步分型。反应试剂均购自上海生物工程有限公司。
1.2.3HPV分型检测：采用PCR反向斑点杂交技术对HPV通用引物扩增阳性的样本进行亚型的检测，该分型检测技术可将检测对13种高危型HPV以及8种低危型HPV进行具体分型。所用试剂盒购自深圳亚能生物技术有限公司[4]。
2结果
2.1食管癌组织中感染的HPV亚型，见表1。
2.2宫颈脱落细胞感染的HPV亚型，见表2。
3讨论
本研究分别选择我院妇科门诊就诊的1200例患者的宫颈脱落细胞以及我院以及疆内各兵团医院外科术后的140例食管癌石蜡包埋组织为研究对象，抽提样本DNA后，首先采用HPV通用引物进行光谱扩增，结果阳性的样本进一步反向斑点杂交技术进行分型检测。结果显示，在1200例门诊就诊患者宫颈脱落细胞样本中，HPV-16的感染率最高，为4.9%（59/1200），其次为HPV-59，感染率为0.8%（10/1200）；在140例食管癌组织中，HPV总的感染率为36.4%（51/140），其中高危型HPV中HPV-16的感染率为27.1%（38/140），其次为HPV-18，占1.4%（2/140）[5]。
在宫颈组织中HPV感染亚型的研究方面，综合全球范围的数据[5]，在正常的人群HPV筛查中，HPV16是最为常见的亚型，但感染率占第二位的则根据不同地域以及不同民族之间有不同的报道，其中以HPV18、HPV59、HPV58等最为常见。Zheng Yi等[6]，在新疆维吾尔地区妇女人群中进行的一项HPV感染的横断面研究发现，人群中感染的HPV16以及HPV59最为常见。大量研究结果提示不论是在新疆地区，还是在全球范围内宫颈组织中感染最主要的高危型HPV均为HPV16，该结果与本研究一致。
在食管癌组织中感染HPV的研究方面，Zhang Shao-kai等[4]，在一项关于中国人HPV感染与食管癌的关系的meta分析中表明，HPV16与食管癌发病关系密切相关。刘琳等[7]，用基因芯片的方法对新疆地区内的哈萨克族食管癌感染的HPV进行基因亚型的检测分析，结果表明提示，HPV感染和食管发生具有相关性，且以HPV16感染为主。上述研究结果不但在全国范围内还是新疆哈萨克族中，均表明HPV16是食管癌中感染的主要亚型，与本研究结果一致。本研究中，食管癌和宫颈脱落细胞检测中，均以HPV16为主，与国内外研究结果一致。感染率排第二位的高危型HPV，在140食管癌组织中为HPV18，在1200例门诊患者人群样本中则为HPV59，分析差异原因主要是样本不对称有关，有望后期调整样本量以及样本来源构成进一步研究。
综上所述，在新疆地区宫颈组织和食管癌中感染的高危型HPV均为HPV16，两种组织间没有差异。高危型的HPV感染，特别是HPV16的感染可能在宫颈癌和食管癌的发生发展中起着相似的作用，为高危型HPV在宫颈癌和食管癌发生机制中的作用提供了重要的分子生物学依据。
参考文献
[1]拉莱.苏祖克,Amy E.Noffsinger,买买提.艾力,等.新疆维吾尔族妇女子宫颈癌活检组织中人类乳头瘤病毒DNA的检测[J].中华妇产科杂志,1997,32(7):405-408.
[2]侯浚,陈志峰,贺宇彤.食管癌的流行病学[J].河北职工医学院学报,2000,17:27-29.
[3]Hoste G,Vossaert K,Poppe WA.The clinical role of HPV testing in primary and secondary cervical cancer screening[J].ObstetGynecol Int,2013:610 373.
[4]Zhang SK,Guo LW,Chen Q,Zhang M,Liu SZ,Quan PL,Lu JB,Sun XB(2015)The association between human papillomavirus 16 and esophageal cancer in Chinese population:a meta-analysis.BMC Cancer 2015,15(1):99-117.
[5]吕蕙伶,叶扬,李俊洁.HPV基因分型在子宫颈癌及癌前病变中发生发展表达规律的研究[J].世界最新医学信息文摘,2017,17(77):27-28.
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