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摘要：目的建立喘嗽宁片的质量标准。方法显微鉴别法定性茯苓；tlc法定性鉴别地龙、甘草；HPlc法测定黄芩苷、苦参碱含有量。结果显微特征明显；tlc斑点清晰，分离度好，阴性无干扰；黄芩苷、苦参碱分别在0.01567-0.6268μg、0.09623-1.9247μg范围内线性关系良好(r≥0.9999)、(r≥0.9999)，平均加样回收率分别为98.8%(rsd=0.7%)、98.0%(rsd=1.1%)。结论该方法简便、可靠、准确，可用于喘嗽宁片的质量控制。
关键词：喘嗽宁片；黄芩苷；苦参碱；tlc；HPlc
本文引用格式：李宪刚，季雪，刘尧，等.喘嗽宁片质量标准的研究[J].世界最新医学信息文摘,2019,19(85):20-23.
Study on Quality Standard of Chuansouning Tablets
LI Xian-gang,JI xue,LIU Yao,YU Yuan-yang,HU Jing-lian
(Dalian Inspection and Testing Certification Technology Service Center,Dalian,Liaoning)
ABSTRACT:Objective To establish the quality standard of chuansouning tablets.Methods Microidentification was used to identify poria cocos,TLC was used to identify dilong and licorice,and the contents of baicalin and matrine were determined by HPLC.Results Microscopic characteristics were obvious;TLC spots were clear,the separation degree was good,the negative was not disturbed;Bai-calin and matrine had good linear relationship in the range of 0.01567-0.6268 ug,0.09623-1.9247 ug,respectively(r≥0.9999),(r≥0.9999),the average recovery of sample addition was 98.8%(RSD=0.7%)and 98.0%(RSD=1.1%).Conclusion The method is sim-ple,reliable and accurate,and can be used for the quality control of chuansouning tablets.
KEY WORDS:Chuansouning Tablet;Baicalin;Matrine;TLC;HPLC
0引言
喘嗽宁片是由白果、苦杏仁、地龙、桑白皮、陈皮、黄芩、白前、苦参、甘草、茯苓10味药材组成的复方制剂。收载于《卫生部药品标准》中药成方制剂第十九册，具有清热平喘，止咳化痰的功效。用于支气管哮喘、喘息型支气管炎、肺气肿、肺心病早期治疗[1]。但其原质量标准仅为苦参、黄芩、陈皮的TLC定性鉴别，较为片面。因此，基于2015版《中国药典》要求[2]，本实验通过显微鉴别法鉴别茯苓，TLC法鉴别地龙、甘草，HPLC法测定黄芩苷、苦参碱含有量，为该制剂质量的全面控制提供依据[3，4]。
1材料
Waters 2695型高效液相色谱仪（配置Waters 2998 PDA检测器，美国Waters公司）；薄层扫描仪（Visualizer-192142拍照系统、Scanner-3扫描系统，瑞士CAMAG公司）；Sartorius LE244S型(0.1mg，德国赛多利斯公司)、SartoriusBP211D②型(0.01mg，德国赛多利斯公司)电子分析天平。白果、苦杏仁、地龙、桑白皮、陈皮、黄芩、白前、苦参、甘草、茯苓均购自亳州市中正中药材饮片有限公司，经大连市药品检验所胡景莲主任中药师鉴定，均为2015版《中国药典》项下规定的药材品种。地龙、甘草对照药材(批号分别120987-201508、120904-201620)，黄芩苷（批号110715-201821，95.4%）、苦参碱（批号110805-201709，98.7%）对照品均购自中国食品药品检定研究院。作为对照品溶液甲醇、乙腈为色谱纯；其他试剂均为分析纯；水为Milli-Q超纯水。喘嗽宁片吉林某药业集团股份有限公司3批（批号：180201、180901、180902）；吉林某制药集团股份有限公司3批（批号：180501、180601、180602）；吉林某药业有限公司3批（批号：20180301、20180302、20180303）；陕西某制药有限公司3批（171201、180101、180801）；山西某制药有限公司1批（批号：180501）；山西某药业有限公司1批（批号：180401）；吉林某药业有限责任公司1批（批号：180301）。
2方法与结果
2.1显微鉴别
图1为处方中茯苓的显微鉴别。处方中茯苓半量为原粉入药，参考《中国药典》2015年版一部“茯苓”药材的显微鉴别方法进行试验，显微特征明显。
2.2TLC定性鉴别[5]
2.2.1阴性对照溶液制备
以处方为根本，将各味药去除，采取一定的工艺手段将其制成所需要的阴性对照，同时根据不同的制备方法将供试品溶液制备出来。
2.2.2地龙
取本品8片，除去包衣，研细，加三氯甲烷30ml，密塞，超声处理30min，滤过，滤液浓缩至2ml，将其作为供试品溶液待用，另外，再使用0.5g的地龙药品作为对照，加三氯甲烷20ml，按照以上的方法制备出对照药材溶液。照薄层色谱法（通则0502）试验，分别将以上制备的溶液吸取吸取10μl，并将两种溶液点于同一硅胶G薄层板上，展开剂为甲苯-乙1-15样品16对照药材17阴性对照酸乙酯(9:1)，展开后将其取出并晾干，放在365nm紫外光灯下进行检视，结果见图2，由图可知，与各对照品色谱相比较，供试品色谱显示的荧光斑点的颜色与其相同，呈现出较强的特征性，阴性无干扰。
2.2.3甘草
取本品5片，除去包衣，研细，加乙醚40ml，加热回流1小时，滤过，弃去醚液，药渣加甲醇30ml，加热回流1h，滤过，滤液蒸干，残渣加水40ml使溶解，用正丁醇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，用水洗涤3次，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇5ml使溶解，作为供试品溶液。另取甘草对照药材lg，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取上述对照药材溶液1μl，供试品溶液1-5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水（13:6:2）4℃放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯（365nm）下检视。结果见图3，由图可如，供试品色谱在与各对照品色谱相应位置上显相同颜色的荧光斑点，特征性强，阴性无干扰。
2.3黄芩苷HPLC定量测定[6]
2.3.1色谱条件
Agillent TC-C18色谱柱（4.6 mm×250 mm,5μm）；以甲醇-水-磷酸（45：55：0.2）为流动相；检测波长为278nm。理论板数通过黄芩苷峰进行计算，其值应在4000及以上；体积流量1.0ml；柱温30℃；进样量5μl。
2.3.2对照品溶液制备
对照品取黄芩苷，进行精密的称定，加入甲醇将其制成溶液，其中每1ml中含有30μg的溶液，制备后待用。
2.3.3供试品溶液制备
取20片本品，将外表的包衣去掉，并进行精密的称定，之后将其研细混匀，称取出0.4g放进锥形瓶中，在里面加入50ml70%的甲醇，将重量进行称定，将溶液进行加热处理，回流1h，时间一到将其取出，并在室温下放置，再对重量进行称定，一旦有失去重量使用70%的甲醇进行补足，将溶液进行过滤处理，将续滤液进行精密量取2ml，将其放置在10ml的量瓶中，再加入70%的甲醇，摇匀后待用。
2.3.4方法学考察
按上述色谱条件测定峰面积，建立坐标系，其中横坐标为进样量，纵坐标为色谱峰面积，并绘制出标准曲线，得回归方程分别为：y=3455473x-4632 r=0.9999，结果表明，黄芩苷在0.01567-0.6268μg内呈现出良好的线性关系。精密度实验符合要求，峰面积RSD（n=6）为0.7%；方法重复性良好，含有量RSD（n=6）为0.3%；供试品溶液在24h内稳定性良好，峰面积RSD（n=6）为0.8%；平均加样回收率为98.8%，RSD（n=6）为0.7%；分别用三种不同品牌色谱柱Agillent TC-C18（4.6×250mm 5μm）、Thermo SCIENTIFIC C18（4.6×250mm 5μm）、Diamoil C18（4.6×250mm 5μm）测定，分离效果良好，耐用性符合要求；方法专属性强，图4显示阴性无干扰。
2.4苦参碱HPLC定量测定[7，8]
2.4.1色谱分析条件
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.1%磷酸溶液（用三乙胺调节pH值至7.6）（19:81）为流动相；检测波长：220 nm。色谱柱：Agilent Eclipse Plus-C18（4.6×250mm 5μm）。
2.4.2对照品溶液的制备
对照品取苦参碱，对其进行精密的称定，并加入甲醇制作溶液，保证1ml内含有60μg的溶液，制备后待用。
2.4.3供试品溶液的制备
取本品20片，除去包衣，精密称定，研细，取约0.5g，精密称定，加浓氨试液1ml、三氯甲烷25ml，进行加热处理，并回流1h，进行过滤，使用的容器及残渣都要使用少量的三氯甲烷进行多次的洗涤，并进行过滤，将所得的滤液进行合并，回收溶剂至干，在残渣内加入适量的甲醇进行溶解，之后放置到10ml的量瓶中，再加入甲醇至刻度，将其摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.4.4方法学考察
按上述色谱条件测定峰面积，建立坐标系，其中横坐标表示进样量，纵坐标表示色谱峰面积，绘制标准曲线，Y=736074x-11527 r=0.9999，结果表明，苦参碱在0.09623-1.9247μg范围内线性关系良好。精密度实验符合要求，峰面积RSD（n=6）为0.5%；方法重复性良好，含有量RSD（n=6）为0.7%；供试品溶液在24h内稳定性良好，峰面积RSD（n=6）为0.9%；平均加样回收率为98.0%，RSD（n=6）为1.1%；分别用三种不同品牌色谱柱Thermo SCIENTIF-IC C18（4.6×250mm 5μm）、Agilent Eclipse Plus-C18(4.6×150mm 5μm)、Ag i lent 5 TC-C18（4.6×250mm 5μm）测定，分离效果良好，耐用性符合要求；方法专属性强，图5显示阴性无干扰。
2.5含量测定数据
采用供试品溶液制备项下方法，对15批样品进行含量测定，因数据保密原因未提供产品批号信息，测定结果见表1。药典》2015年版一部“黄芩”药材含量测定项下，按干燥品计算，黄芩以黄芩苷计不得少于9.0%，水分按10%折算，喘嗽宁片中黄芩苷理论含量为不少于13mg/片，因吉林某药业有限责任公司对该公司喘嗽宁片品种质量标准进行提高，因此采用该标准的黄芩苷限度，每片含黄芩以黄芩苷（C21H18O11）计，不得少于8.0mg。按《中国药典》2015年版一部“苦参”药材含量测定项下，按干燥品计算，苦参以苦参碱和氧化苦参碱的总量计不得少于1.2%，喘嗽宁片中按本方法制备供试品后无氧化苦参碱成分，因此确定将苦参碱的含量作为本制剂定量指标之一，按样品实际测定结果平均值的70%制定限度，每片含苦参以苦参碱（C15H24 N2O）计，不得少于0.55mg。
3讨论
中药质量标准的规范化对于中药发展是非常关键的指标之一[9-12]，在我国的现行中成药标准中并没有多少对药味进行鉴别的，且测定指标也相对来说较少。喘嗽宁片是由10味药材组成的，属于典型的复方制剂，原标准中共有苦参、黄芩、陈皮3味药的薄层鉴别检查项目，故本实验新建了地龙、甘草的鉴别方法。
液相色谱法实验中分别应用了3根色谱柱进行多次反复的实验，3根色谱柱的厂家、粒径、长度均不相同，且出峰时间不恒定。在对黄芩苷、苦参碱进行含量测定时使用的以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，不同的生产企业使用的填料不同，因此在进行封端处理时也表现出了一定的差异性，使得一些待测成分残留在色谱柱上发生了一些变化。
参考文献
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