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摘要：目的探讨集卵孵化法联合免疫学方法的三种诊断试剂检测对血吸虫病诊断的研究。方法对1192名疫区患者，以尼龙绢集卵孵化法进行病原学检测，再同时使用酶联免疫吸附试验（ELISA）、胶体金免疫渗滤斑点法（DIGFA）、胶体染料法（DDIA）进行血吸虫循环抗原、IgG抗体及虫卵抗体检测，将结果进行比较分析。结果集卵孵化法、ELISA、DDIA和DIGFA的阳性率分别为24.2%、23.7%、71.2%和68.3%，ELISA+DDIA+DIGFA联合检测敏感性达到96.9%，集卵孵化法+ELISA+DDIA+DIGFA联合检测敏感性达到99.1%。结论集卵孵化法漏检率较高，集卵孵化法+ELISA+DDIA+DIGFA四种方法联合检测敏感性明显高于单项检测，对提高血吸虫的检出率有重有意义。
关键词：免疫学；集卵孵化法；血吸虫病
本文引用格式：周亚军.集卵孵化法与免疫学检测联合应用诊断血吸虫病的临床研究[J].世界最新医学信息文摘,2019,19(82):241,243.
1资料
1.1标本来源
2013年至2017年到我院就诊的门诊以及住院患者1192例，男752例，女440例，年龄在22-73岁之间。
1.2试剂
血吸虫循环抗原测定试剂盒（酶联免疫吸附试验ELISA）由四川迈克生物科技股份有限公司生产。血吸虫抗体（IgG）检测试剂盒（胶体染料法DDIA）由无锡赛德科技开发有限公司生产。血吸虫虫卵抗体检测试剂盒（胶体金免疫渗滤斑点法DIGFA）由岳阳迅超生物技术有限公司生产。三种免疫学诊断试剂均获国食药监械（准）字证书。
1.3器材
1.3.1需特制的锥形尼龙绢袋
取260孔/25.4mm尼龙绢剪成扇形裁片，两边以聚氨酯粘合剂粘合，上口用锦纶线缝合卷边，以8号铁丝弯成直径为8cm的带柄圆圈，穿入卷边。袋深约20cm，下口直径约1.5cm。调浆时以铁夹夹住下口。
1.3.2其它器材
250mL三角烧杯、塑料杯、竹筷、40-60孔/25.4mm铜丝筛、尼龙绢袋支架、淋水用橡皮管、水桶等。
2方法
2.1集卵孵化法
收集受检者新鲜粪便标本30g，以尼龙绢集卵孵化法进行毛蚴孵化，并配以摄相机进行24小时内不间断观察。
2.2免疫学检测
采集受检者血清，同时进行酶联免疫吸附试验（ELISA）、胶体染料法（DDIA）、胶体金免疫渗滤斑点法（DIGFA）检测血吸虫抗原、抗体。操作方法按各试剂盒说明书操作，均在有效期内使用。
3结果
3.1集卵孵化法与三种免疫学方法的检测
在1192例患者检测中，集卵孵化法的阳性率为24.2%(288/1192)，而ELISA的阳性率为23.7%（282/1192），DDIA的阳性率为71.2%(848/1192)，DIGFA的阳性率为68.3%（814/1192）。见表1。
3.2集卵孵化法与三种免疫学方法检测结果的比较
以集卵孵化法检测结果为标准，288例集卵孵化法检测的阳性中，ELISA、DDIA、DIGFA分别检出阳性者为246例、288例、282例，阳性率分别为85.4%、100%、97.9%。
以免疫学方法检测结果为标准，ELISA、DDIA、DIGFA三种方法检测结果同为阳性的220例中，集卵孵化法检出阳性144例，阳性率为65.4%；同为阴性的156例中，集卵孵化法未检出阳性。
3.3集卵孵化法和三种免疫学方法检测对不同感染者检出的分析
急性血吸虫病患者集卵孵化法、ELISA的阳性率明显高于慢性和晚期血吸虫病患者，而DDIA与DIGFA只是略高。
3.4集卵孵化法和三种免疫学方法单独及联合检测的比较
ELISA+DDIA+DIGFA联合检测与集卵孵化法+ELISA+DDIA+DIGFA联合检测均能提高检测的敏感性，而四种方法联合检测更准确，与单项检测相比差异有统计学意义（P<0.05）。见表2。
4讨论
近几年来，一些诊断血吸虫病的免疫学试剂，不仅由我国自主研发，而且还陆继获得国家注册文号，在血吸虫病临床诊断中发挥了重要作用。理想的诊断方法应具备敏感性高、特异性强、操作简单快速、便于运输和储存，且尽量无创伤性等特点[1-3]。但是每种方法在检测血吸虫方面各有利弊，因此我们采用多种方法联合检测来提高血吸虫的诊断。研究结果表明，ELISA与集卵孵化法敏感性较低，而DDIA与DIGFA均具有较高的敏感性，但特异性不如前两者，DDIA以成虫组分抗原作为诊断性抗原，DIGFA以虫卵组分抗原作为诊断性抗原[4-6]，如受检者未经病原治疗，而特异性抗体呈阳性反应，对于确定诊断意义较大，如已经病原治疗，特异性抗体阳性，并不能确定受检者体内仍有成虫寄生，因治愈后，特异性抗体在体内仍可维持较长时间。其阳性结果往往不能区分现症感染和既往感染，也不易于评价疗效，循环抗原是生活虫体排放至宿主体内的大分子微粒，主要是虫体排泄、分泌或表皮脱落物，具有抗原特性，又可被试验所检出，是一种检测急性感染和调查流行率的理想工具[7]，但是在慢性血吸虫病和晚期血吸虫病当中检出率很低，这可能与血吸虫的免疫逃避机制有关系。
参考文献
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[3]卢致民,王燕,张子扬,等.弓形虫感染间接免疫荧光检测试剂盒的检测效果评价[J].中国寄生虫学与寄生虫病杂志,2013(05):222-224.
[4]黄进,何其林,李萍,等.两种血吸虫病免疫诊断试剂的比较研究[J].国际医学寄生虫病杂志,2010,37(3):152-155.
[5]神学慧,傅忠宇,戴建荣,等.羊在日本血吸虫病传播中的作用Ⅵ:基于消除感染性羊阻断血吸虫病传播的实例[J].中国热带医学,2017(05):302-303.
[6]神学慧,孙乐平,李叶芳,等.江滩流行区中长期规划血吸虫病控制效果及其巩固对策探讨[J].中国血吸虫病防治杂志,2015(05):298-300.
[7]林丹丹,刘跃民,胡飞,等.日本血吸虫病常用诊断方法应用价值的评估ⅢKato-Katz法低估疫区人群血吸虫感染率的分析与评价[J].中国血吸虫病防治杂志,2011(06):189-190.
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