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摘要：目的研究分析不同亚型乳腺癌AKT磷酸化水平的情况。方法收集2016年1月至2016年9月在我院就诊并病理确诊的乳腺癌患者60例，采用免疫组化法对乳腺癌及癌旁组织中pAKT308、pAKT473蛋白进行定性检测，根据检测结果并结合临床病理学特征，对乳腺癌患者AKT磷酸化水平进行分析。结果60例乳腺癌标本中，pAKT308的阳性表达率为71.7%（43/60），pAKT 473的阳性表达率为63.3%（38/60），pAKT308与pAKT473的表达与乳腺癌大小无关；有淋巴结转移组的pAKT308表达率为86.5%（32/37）、pAKT473表达率为81.1%（30/37），均显著高于无淋巴结转移组pAKT308表达率39.1%（9/23）、pAKT473表达率43.5%（10/23），差异有统计学意义（P<0.05）。结论pAKT308、pAKT473在有淋巴结转移乳腺癌组织中的表达显著高于无淋巴结转移，表明磷酸化AKT具有促进乳腺癌淋巴结转移的作用。
关键词：AKT；乳腺癌；磷酸化水平；不同亚型
本文引用格式：乔雷,杨乐,马斌林.乳腺癌患者AKT磷酸化水平的临床分析[J].世界最新医学信息文摘,2019,19(81):24-25.
Clinical Analysis of AKT Phosphorylation of Breast Cancer Patients
QIAO Lei,YANG Le,MA Bin-lin(Corresponding Author)
(Department of Mammary Head and Neck Surgery,Xinjiang Medical University Affiliated Tumor Hospital,Urumqi Xinjiang 830000)
ABSTRACT：Objective to study and analyze AKT phosphorylation level of different subtypes of breast cancer.Methods collect 60 cases pathologically diagnosed breast cancer patients in our hospital from January 2016 to September 2016.Carry on qualitative detection of pAKT308 and pAKT473 proteins in breast cancer and adjacent tissues with immunohistochemical method.Analyze phosphorylation level of AKT in breast cancer patients according to detection results and clinical pathological characteristics.Results positive expression rates of pAKT308 and pAKT473 was 71.7%(43/60)and 63.3%(38/60)among 60 cases breast cancer specimens.Expressions of pAKT308 and pAKT473 was not related to size of breast cancer.Expression rate of pAKT308 and pAKT473 in lymph node metastasis group was 86.5%(32/37)and 81.1%(30/37)respectively,which were significantly higher than 39.1%(9/23)and 43.5%(10/23)of non-lymph node metastasis group,with significant difference,(P<0.05).Conclusion expression of pAKT308 and pAKT473 in breast cancer with lymph node metastasis is significantly higher than that without lymph node metastasis,indicating phosphorylated AKT can promote lymph node metastasis of breast cancer.
KEY WORDS：AKT;Breast cancer;Phosphorylation level;Different subtypes
0引言
乳腺癌是临床最常见的一种威胁女性身心健康的肿瘤，目前仍不清楚其具体的发病机制，有关研究已证实在多种恶性肿瘤中PI3K/AKT信号通路存在异常激活[1-2]，而AKT蛋白激酶是其中的枢纽，同时AKT蛋白激酶上的Thr308与Ser473是两个关键位点，可决定AKT的活化水平，因此AKT磷酸化水平可能提示相关肿瘤病情进展情况[3-4]。我院为探讨乳腺癌患者不同亚型AKT磷酸化水平与乳腺癌临床病理学特征的关系，对2016年1月至2016年9月间在我院就诊的60例乳腺癌患者的临床资料进行了回顾性分析，现报道如下。
1资料与方法
1.1一般资料。选取2016年1月至2016年9月在我院就诊并病理确诊的60例乳腺癌患者作为研究样本，患者的年龄分布区间为38-67岁，平均（50.3±4.4）岁，伴有淋巴结转移23例，非淋巴结转移37例。纳入标准：①于我院首次确诊并接受治疗的乳腺癌患者；②术前经粗针穿刺证实为浸润性乳腺癌的患者；③术前未行新辅助放、化疗或内分泌治疗及其他干预治疗措施。排除标准：①既往于其他医院接受任何干预治疗的患者；②术前行新辅助放、化疗或内分泌治疗及其他干预治疗措施；③非浸润性乳腺癌。
1.2方法。采用免疫组化法对60例乳腺癌患者的100例乳腺癌组织切片进行检验，定性检测乳腺癌、癌旁组织中的AKT、pAKT308以及pAKT473进行定性检测，检测流程如下。
操作流程：①将石蜡切片置于烘箱中62℃烤2 h；②石蜡切片常规二甲苯，乙醇脱蜡至水，PBS洗5 min×3；③用0.01 mol/L枸橼酸钠缓冲液pH6.0煮沸热修复（95℃20 min），室温自然冷却，PBS洗5 min×3；④滴加100μl 3％H2O2抑制内源性过氧化物酶室温孵育20 min；⑤PBS洗5 min×3；⑥10%新生胎牛血清室温孵育20 min，⑦PBS洗5 min×3；⑧加入一抗按比例稀释4℃孵育过夜，室温复温1 h；⑨PBS洗5 min×3；⑩二抗37℃孵育1 h；⑾PBS洗5 min×3；⑿DAB显色1s-10 min，本实验显色时间约8 s后放入ddH2O缸中终止实验；⒀苏木素复染30 s，用清水冲5min，盐酸酒精分化1 s，再用清水冲洗5 min；⒁脱水吹干后，树脂封片；⒂镜下观察，细胞核呈紫蓝色，阳性产物呈棕黄色或黄色。
1.3观察指标。通过特异性抗原抗体反应，使细胞质和（或）细胞核染色，阳性染色结果呈棕黄色，染色结果由两位病理科副主任医师分别独自判读，对于不一致的判读结果经商讨后得出一致结论。判定标准选用IRS（immunoreactive score）评分系统，即依据染色强度和染色范围判读结果的方法。染色强度分为0（阴性），1（弱阳性），2（中等强度），3（强阳性），染色范围评分为0（阴性），1（<10%），2（11-50%），3（51-80%），和4（>80%）。两个评分结果的乘积就是IRS值（0-12分）:0分为阴性，1-3分为弱阳性，4-6分为阳性，8-12分为强阳性。我们判定IRS值大于3分为阳性。
1.4统计学分析。以SPSS 21.0软件分析，采用χ2检验，采用率（%）表示，P<0.05表示有统计学意义
2结果
经过检测，pAKT308的阳性表达率为71.7%，pAKT 473为63.3%，pAKT308与pAKT473的表达与乳腺癌的大小无关；有淋巴结转移组的pAKT308表达率为86.5%、pAKT473表达率为81.1%，均显著高于无淋巴结转移组pAKT308表达率39.1%、pAKT473表达率43.5%（10/23），pAKT的表达与乳腺癌大小及淋巴结转移情况的关联见表1。
3讨论
AKT信号转导通路在被激活后能够对细胞的凋亡进行抑制[5]，因此肿瘤组织中的AKT活化水平可能与肿瘤细胞的增生有较大关联，而本次研究结果显示pAKT308与pAKT473在乳腺癌患者中均有较高的表达率，提示AKT的活化程度与癌细胞的增生是具有正比关系的。同时上述分析结果还显示pAKT308与pAKT473在有淋巴结转移组中的表达率均显著高于无淋巴结转移组，且差异均有统计学意义（P<0.05），表明磷酸化AKT对于乳腺癌淋巴转移有促进作用。AKT激活包含2个重要的步骤，首先是PI3K被胞膜上酪氨酸激酶受体所激活，AKT上PI3K依赖的PH结构域与细胞质3，4，5-三磷酸肌醇（PIP3）结合后使AKT转移至胞膜，其次是位于AKT蛋白激活环上的Thr308和Ser473两个关键位点，二者同时磷酸化可引起AKT完全激活；单一位点的激活只可使AKT部分激活，AKT蛋白激酶作为PI3K信号通路中重要的上游成份，其活化后可引起下游分子的异常表达，增高了人的肿瘤易感性[6]。
综上所述，乳腺癌患者肿瘤组织中的AKT磷酸化水平对于疾病进展以及是否有淋巴结转移等有着指示作用，临床应对AKT磷酸化水平与乳腺癌其他病理特征的关系及其具体机制进行进一步的研究。
参考文献
[1]张刚,李中,林晓萌,等.乳腺癌组织中PTEN、p-AKT蛋白表达变化及相关性分析[J].山东医药,2014(19):48-49.
[2]顾蕾,陈一飞,应明真,等.磷酸化AKT和HER-2蛋白在早发性乳腺癌中的表达及意义[J].医学研究杂志,2014,43(6):30-34.
[3]胡潇方.AKT磷酸化在乳腺癌淋巴管生成及转移中的作用[J].肿瘤研究与临床,2013,25(6):426-428.
[4]张国燕,李志凌,曹珅,等.AKT1负性调控乳腺癌细胞迁移的机制研究[J].中国病理生理杂志,2018,34(8):1443-1447.
[5]刘冬良,杭振宁,顾汝军.p-Akt在预测乳腺癌术后转移复发中的临床意义[J].中国现代医学杂志,2016(2):33-37.
[6]郭绍文,刘坤,胡俊艳,等.乳腺癌组织中PTEN、AKT表达及与其临床病理及预后的相关性[J].实用癌症杂志,2014(5):495-497,505.
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