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【摘要】目的 探讨南宁地区不同妊娠结局孕产妇亚甲基四氢叶酸还原酶( MTHFR ) C677T 位点基因多态性、血浆同型半胱氨 酸(Hcy)水平变化与意义，为减少不良妊娠结局提供一定的理论依据。方法 回顾性分析 2019 年 7 月至 2021 年 12 月于广西壮族自治区人民医院就诊且户籍为南宁地区的 846 例孕产妇的临床资料，将其中 500 例正常妊娠结局孕产妇作为对照组，将 184 例具有单 次不良妊娠结局的孕产妇作为 A 组， 将 162 例具有多次不良妊娠结局的孕产妇作为 B 组，采用实时荧光定量 PCR (FQ-PCR )方法 检测 MTHFR C677T 位点基因多态性，采用酶循环法检测血浆 Hcy 水平。统计所有孕产妇 MTHFR C677T 位点基因型分布是否符合 Hardy-Weinberg 遗传平衡( HWE )定律;对比各组孕产妇 MTHFR C677T 位点基因多态性的分布特点(基因型频率分布、等位基因频率 分布) 及血浆 Hcy 水平;对比不同 MTHFR C677T 位点基因型孕产妇血浆 Hcy 水平。 结果 本研究共计纳入 846 例研究对象， 其中 CC、 CT 、TT 基因型分别为 280 、423 、143 例， 等位基因 C 、T 分别为 983 、709 例， 基因型分布服从 HWE 定律(χ2 = 0.661.P>0.05 ); 与对 照组比， A 组孕产妇 CT 型占比与 B 组孕产妇 CC 型占比均较低， A 组孕产妇 CC 型占比较高;与 A 组比， B 组孕产妇 CC 型占比较低， CT 、TT 型占比较高;与对照组比，A 组 C 等位基因占比和 B 组 T 等位基因占比较高，A 组 T 等位基因占比和 B 组 C 等位基因占比较 低;与 A 组比， B 组 C 等位基因占比较低， T 等位基因占比较高(均 P<0.05 ); 3 组孕产妇血浆 Hcy 水平， 以及 CC 、CT 、TT 基因型孕 产妇血浆 Hcy 水平比较，差异均无统计学意义(均P>0.05 )。 结论 南宁地区 846 例孕产妇 MTHFR C677T 位点基因多态性与多次不良 妊娠结局的发生有一定关系，而血浆 Hcy 水平与不良妊娠结局的发生无明显关系。
妊娠过程中的病理妊娠及分娩期并发症都属于不良妊 娠结局，其具体包括出生缺陷、自然流产、早产、死胎、 胎儿生长受限、子痫前期等。不良妊娠结局不仅对母婴安 全造成严重影响，还会给其家庭带来沉重的精神和经济负 担。引起不良妊娠结局的原因较多，目前相关的遗传因素 逐渐成为研究热点。叶酸代谢基因多态性与不良妊娠结局 的关系得到越来越多的关注。其中亚甲基四氢叶酸还原酶 ( MTHFR)为参与叶酸代谢通路中的关键酶，该基因的多 态性尤其是 C677T 位点基因突变可导致叶酸代谢异常，影 响 DNA 甲基化，并导致同型半胱氨酸(Hcy)水平异常升 高并在体内蓄积，被认为与自然流产、出生缺陷、早产、 子痫前期等不良妊娠结局密切相关 [1-2] 。基于此，本研究应 用实时荧光定量 PCR(FQ-PCR)方法检测 MTHFR C677T 位点基因多态性， 酶循环法检测血浆 Hcy 水平，旨在分析南宁地区不同妊娠结局孕产妇 MTHFR C677T 位点基因 多态性及血浆 Hcy 水平变化与意义， 为减少不良妊娠结 局提供一定的理论依据，现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料 回顾性分析 2019 年 7 月至 2021 年 12 月于广西壮族自治区人民医院就诊且户籍为南宁地区 的 846 例孕产妇的临床资料。将其中 500 例正常妊娠结 局的孕产妇作为对照组，将 184 例具有单次不良妊娠结 局的孕产妇作为 A 组，将 162 例具有多次不良妊娠结局 的孕产妇作为 B 组。对照组孕产妇年龄 20~38 岁，平均( 31.15±3.54 )岁;孕周 6~15 周， 平均( 10.28±2.89 )周; 孕前 BMI 18.5~23.5 kg/m2 ，平均(21.72±1.35 )kg/m2.A 组 孕产妇年龄 20~37 岁， 平均(31.73±3.82)岁; 孕周 6~15周，平均(10.56±2.72 )周;孕前 BMI 18.6~23.5 kg/m2 ，平 均(21.89±1.34 )kg/m2.B 组孕产妇年龄 20~36 岁，平均 ( 31.74±3.59 )岁;孕周为 6~15 周，平均( 10.13±2.91 ) 周;孕前 BMI 18.9~23.9 kg/m2 ，平均(21.70±1.39 )kg/m2.3 组孕产妇一般资料比较，差异无统计学意义(P>0.05 )， 组间可比。纳入标准：所有孕产妇均符合《妇产科学(第8 版)》[3] 中关于妊娠的诊断标准;年龄 20~40 岁;孕前 BMI 18.5~23.9 kg/m2 ;对照组为无不良孕产史、正常妊娠 结局的孕产妇;A、B 组均发生自然流产史或有胎儿异常史 等。排除标准：孕妇或(和)丈夫有染色体异常者;合并 遗传性疾病，生殖系统畸形者;从事强辐射相关工作、艾 滋病病毒(HIV)感染及不良用药史等。研究经院内医学 伦理委员会批准实施。
1.2 研究方法
1.2.1 叶酸基因型测定 ①仪器与设备：亚甲基四氢叶 酸还原酶基因 677C/T 检测试剂盒(PCR- 荧光探针法) (深圳泰乐德医疗有限公司，规格： 24 人 / 盒)、快速实 时荧光定量 PCR 扩增仪( Life Technologies Holdings Pte Ltd. ，型号： 7500 );②测定步骤：收集所有孕产妇乙二 胺四乙酸(EDTA)抗凝外周血 2~3 mL，使用按照试剂 盒说明书提取全血基因组 DNA。采用 FQ-PCR 方法检测 MTHFR C677T 位点基因多态性。
1.2.2 血浆 Hcy 检测 抽取所有孕产妇空腹静脉全血3 mL，常规抗凝，离心(转速为 3 000r/min) 10 min，分离 血浆后，利用酶联免疫吸附法测定血浆 Hcy 浓度。
1.2.3 追踪随访 随访统计妊娠结局，包括自然流产、胚 胎停育、畸形引产、死胎、早产、正常分娩等。
1.3 观察指标 ①统计所有孕产妇 MTHFR C677T 位点 基因型分布是否符合 Hardy-Weinberg 遗传平衡(HWE ) 定律。②对比 3 组孕产妇基因型频率。③对比 3 组孕产妇 等位基因频率。④对比 3 组孕产妇血浆 Hcy 水平。⑤对 比不同基因型孕产妇血浆 Hcy 水平。
1.4 统计学方法 采用 SPSS 20.0 统计学软件处理数据， 计量资料均经 K-S 检验证实符合正态分布且方差齐，以 ( x±s) 表示，两组间比较行 t 检验，多组间比较采用重 复测量方差分析，两两比较采用 SNK-q 检验。计数资料 以 [ 例 (%)] 表示，基因频率分布应用 HWE定律检验;多 组间比较，行 χ2 趋势检验，两组间比较行 χ2 检验。以 P<0.05 为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 所有孕产妇 HWE 定律检验结果 846 例孕产妇 中 CC、CT、TT 基因型分别为 280、423、143 例，等位基 因 C、T 分别为 983、709 例，基因型分布服从 HWE 定律( χ2 = 0.661.P>0.05)，见表 1.
2.2 各组孕产妇 MTHFR C677T 位点基因分布情况 与 对照组比，A 组孕产妇 CT 型占比、B 组孕产妇 CC 型占比 均显著较低，A 组孕产妇 CC 型占比显著较高;与 A 组比， B 组孕产妇 CC 型占比显著较低，CT、TT 型占比显著较高， 差异均有统计学意义(均 P<0.05)，见表 2.
2.3 各组孕产妇 MTHFR C677T 位点等位基因分布情 况 与对照组比，A 组孕产妇 C 等位基因占比和 B 组孕产 妇 T 等位基因占比显著较高，A 组孕产妇 T 等位基因占比 和 B 组孕产妇 C等位基因占比显著较低;与 A 组比，B 组 孕产妇 C 等位基因占比显著较低，T 等位基因占比显著较 高，差异均有统计学意义(均 P<0.05)，见表 3.
2.4 各组孕产妇血浆 Hcy 水平比较 3 组孕产妇血浆 Hcy 水平经过对比，差异均无统计学意义(均 P>0.05 )， 见表 4.
2.5 不同 MTHFR C677T 位点基因型孕产妇血浆 Hcy 水 平比较 CC、CT、TT 基因型孕产妇血浆 Hcy 水平比较， 差异均无统计学意义(均 P>0.05)，见表 5.
3 讨论
不良妊娠结局的发生会给家庭和社会带来严重影响， 在不良妊娠结局诸多影响因素中，遗传因素占了大部分比 例， 而 MTHFR 基因是其中的一大部分。人类的 MTHFR 基因位于第 1 号染色体短臂( 1P36.3) ，具有多种突变类 型， 近年来， 研究最多的位点是 MTHFR C677T 突变位点。 MTHFR 基因第 677 位密码子胞嘧啶(C)被胸腺嘧啶(T) 置换，从而使编码的丙氨酸被缬氨酸替代，导致 MTHFR 热稳定性降低，使酶活性下降 [4] 。已有研究表明，相对正 常的 CC 基因型，杂合子 CT 基因型的 MTHFR 活性为正 常酶活性的 65%，纯合子 TT 基因型的 MTHFR 活性为正 常酶活性的 30% [5] 。MTHFR 作为叶酸代谢通路中的关键 酶，不可逆地催化亚甲基四氢叶酸转化成甲基四氢叶酸， 其一方面参与嘌呤和嘧啶的合成并为 DNA、RNA 及蛋白 质的甲基化提供甲基;另一方面作为甲基供体，使血液中 Hcy 再甲基化，从而维持血浆 Hcy 的正常水平 [6] 。Hcy 是 蛋氨酸的代谢产物，其水平升高，损害血管内皮细胞，使 血液处于高凝状态，增加妊高症、自然流产等发生风险， 且高 Hcy 水平可导致 DNA 甲基化和合成出现异常，影响 神经细胞的增殖或迁移，阻碍神经管闭合，也可造成染色 体不分离，从而增加各种出生缺陷风险，易导致不良妊娠 结局 [7]。
目前，国内外很多研究均发现 MTHFR C677T 位点基 因突变的多态性与流产、唐氏综合征、神经管缺陷、唇腭 裂儿及先天性心脏病等不良妊娠结局具有相关性 [8-9]。但国 内的杨晓黎等 [10] 报道了西藏昌都市藏族育龄妇女的叶酸 基因代谢多态性与总不良妊娠结局无相关性;李孝琼等 [11]
研究也认为荆州地区孕妇 MTHFR C677T 位点基因多态性 与不良孕产史无明显关联。造成不同结论的原因可能是， MTHFR C677T 位点基因多态性与地域、种族差异性分布 有关。本研究所纳入南宁地区 846 例孕产妇的基因型分布 服从 HWE 定律，说明本研究所选样本具有一定的区域群 体代表性，但本研究未进行 A、B 组总体不良妊娠结局与 MTHFRC 677T 位点基因多态性的关系研究，因此仍需临 床进一步开展深入研究。
值得注意的是，本研究将不良妊娠结局的发生次数进 行具体划分， 观察各组孕产妇MTHFR C677T 位点基因型和 等位基因分布情况，结果发现，与对照组比，A 组孕产妇 CT 型和 T 等位基因占比， 以及 B 组孕产妇 CC 型和 C 等位 基因占比均较低， A 组孕产妇 CC 型和 C 等位基因占比， 以 及B 组孕产妇T 等位基因占比较高， 说明MTHFR C677T 位 点 T 等位基因及 CT、TT 型基因突变的孕产妇发生不良妊 娠结局的风险增加。因此， 女性妊娠前应行 MTHFR C677T 位点基因多态性检测，临床可对不同基因型女性进行不同用 药剂量设计及药物治疗效果的监测，以降低不良妊娠结局的 发生率。此外，与 A 组比， B 组孕产妇 CC 型和 C 等位基 因占比较低， CT、TT 型及 T 等位基因占比较高， 进一步说 明，发生单次不良妊娠结局组具有不良妊娠结局事件的偶然 性， 而发生多次不良妊娠结局组育龄妇女与 MTHFR C677T 位点基因多态性具有明显相关性。
本研究中通过检测所有孕产妇的 Hcy 值得出，3 组研 究对象， 以及 CC、CT、TT 基因型孕妇 Hcy 水平比较， 差 异均无统计学意义， 说明 Hcy 值水平与不良妊娠结局的发 生无关联性。其原因可能与本研究纳入样本量较少及未对 不同基因女性进行叶酸补充疗效监测有关。而近年来，韩 红敬等 [12] 研究表明， MTHFR C677T 位点多态性与复发性 流产有关，且 MTHFR 基因 TT 型与高 Hcy 血症有关，并 通过随访证实叶酸可用于治疗高 Hcy 血症且有助于改善下 次妊娠结局。孕早期高 Hcy 血症可抑制绒毛膜的形成， 减 少绒毛血管的数量，影响胚胎的血流灌注，进而导致胚胎 着床不良，易出现不良的妊娠结局。针对上述研究结果， 后续实验会对 Hcy 在不良妊娠结局的影响进行探究， 通过 增加样本量、考虑多因素及对不对基因女性进行叶酸补充 治疗等措施加以探究 Hcy 与妊娠结局的关系， 以提高研究 结果的准确度及可靠性。
综上，南宁地区 846 例孕产妇 MTHFR C677T 位点基 因多态性与多次不良妊娠结局的发生有一定关系，而血浆 Hcy 水平与不良妊娠结局无明显关系。因此，女性妊娠前 应行MTHFR C677T 位点基因多态性检测， 临床可依据女性 基因型的不同，在其妊娠前、妊娠期采取精准个体化叶酸 补充措施，以降低反复多次的不良妊娠结局的发生，在保障母胎安全的同时，尽可能地减轻多次不良妊娠结局对孕 产妇所造成的心理阴影及精神创伤，提高产前筛选和孕期 管理。
参 考 文 献
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