BALF 结核杆菌检测联合 T - SPOT . TB 检测在 菌阴肺结核诊断中的效能论文

SCI论文（www.lunwensci.com）

　　【摘要】 目的：观察支气管肺泡灌洗液(BALF)结核杆菌检测联合结核感染 T 细胞斑点(T-SPOT.TB 检测)在菌阴肺结核诊断 中的效能。方法： 选取 2019 年 2 月至 2021 年 5 月该院收治的 82 例疑似肺结核患者进行前瞻性研究。所有患者均接受 BALF 结核杆菌检 测、 T-SPOT.TB 检测，以肺泡灌洗液罗氏培养和临床诊断结果为金标准，统计肺泡灌洗液罗氏培养和临床诊断结果、BALF 结核杆菌检测 和 T-SPOT.TB 检测单项及联合检测结果，比较 BALF 结核杆菌检测和 T-SPOT.TB 检测单项及联合检测诊断菌阴肺结核的效能。结果： 82 例疑似肺结核患者肺泡灌洗液罗氏培养和临床诊断结果诊断为肺结核病 59 例，检出率为 71.95%;非肺结核病 23 例，检出率为 28.05%。 BALF 结核杆菌检测联合 T-SPOT.TB 检测诊断菌阴肺结核的灵敏度、特异度、准确度、阳性预测值和阴性预测值均高于两者单项检测，差 异有统计学意义( P<0.05);BALF 结核杆菌检测与 T-SPOT.TB 检测的灵敏度、特异度、准确度、阳性预测值和阴性预测值比较，差异均 无统计学意义( P>0.05)。 结论： BALF 结核杆菌检测联合 T-SPOT.TB 检测诊断菌阴肺结核的效能高于两者单项检测。

　　(Department of Clinical Laboratory of Xuchang Central Hospital, Xuchang 461000 Henan, China)

　　【Abstract】 Objective: To observe efficacy of Mycobacterium tuberculosis detection in BALF combined with T-SPOT.TB test in diagnosis of bacteriological negative pulmonary tuberculosis. Methods: A prospective study was conducted on 82 patients with suspected pulmonary tuberculosis admitted to the hospital from February 2019 to May 2021. All patients received Mycobacterium tuberculosis detection in BALF and T-SPOT.TB test. Using the bronchoalveolar lavage fluid Roche culture and the clinical diagnosis results as the gold standard, the results of single Mycobacterium tuberculosis detection in BALF, single T-SPOT.TB test and combined detection were statistically analyzed. Then, the efficacies of single Mycobacterium tuberculosis detection in BALF, single T-SPOT.TB test and combined detection in the diagnosis of bacteriological negative pulmonary tuberculosis were compared. Results: Among 82 patients with suspected pulmonary tuberculosis, 59 cases were diagnosed as pulmonary tuberculosis by Roche culture and clinical diagnosis with a detection rate of 71.95% and 23 cases were not diagnosed as pulmonary tuberculosis with the detection rate of 28.05%. The sensitivity, specificity, accuracy, positive predictive value and negative predictive value of Mycobacterium tuberculosis detection in BALF combined with T-SPOT.TB test in the diagnosis of bacteriological negative pulmonary tuberculosis were higher than those of the two single tests, and the differences were statistically significant (P<0.05). Conclusions: The efficacy of Mycobacterium tuberculosis detection in BALF combined with T-SPOT.TB test in the diagnosis of bacteriological negative pulmonary tuberculosis is higher than those of the two single tests

　　【Key words】 Mycobacterium tuberculosis detection in BALF; T-SPOT.TB test; Bronchoalveolar lavage fluid; Mycobacterium tuberculosis; Bacteriological negative pulmonary tuberculosis; Diagnosis

　　结核病具有传染性强、发病率高、隐匿性强等 特点，患者早期症状不明显，极易漏诊 [1] 。痰涂片 抗酸染色、痰培养等检测方法虽有较高的阳性率，但 若痰液中无结核分枝杆菌，则无法检出结核菌 [2-3]。 已知支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid， BALF)直接取材于病灶处，病菌检出率高 [4] 。结 核感染 T 细胞斑点试验( tuberculosis infected T cellspot test，T-SPOT.TB)为 γ 干扰素释放试验的一种， 通过酶联免疫斑点技术( enzyme-linked immunospot technique，ELISPOT) 检 测 受 试 者 体 内 是 否 存 在 结核效应 T 细胞，从而判断受试者是否感染结核 杆菌，该检测手段的灵敏度、特异度均较高 [5]。 本文观察 BALF 结核杆菌检测联合 T-SPOT.TB 检测在菌阴肺结核诊断中的效能。

　　1 资料与方法

　　1.1 一般资料 选取 2019 年 2 月至 2021 年 5 月 本院收治的 82 例疑似肺结核患者进行前瞻性研究。纳入标准： 经临床症状、影像学检查结果判断为 疑似肺结核; 痰培养阴性; 入院后接受 BALF 罗 氏培养、BALF 结核杆菌检测和 T-SPOT.TB 检测。 排除标准：既往有结核病史;合并其他肺部疾病; 结核菌素试验为强阳性;合并恶性肿瘤;合并严重 心、肺、肾等系统疾病;合并免疫系统疾病;有精 神类疾病或病史; 依从性不佳。患者对本研究内容 了解并自愿签署知情同意书，且研究经本院伦理委员 会批准(批准文号：20190123)。其中男 48 例， 女 34 例; 年龄 42~64 岁， 平均(53.00±5.12) 岁; 体质 量指数 17~24 kg/m2 ，平均(20.50±2.12)kg/m2 。

　　1.2 方法

　　1.2.1 BALF 结核杆菌检测 (1)采集标本：所有 患者均进行纤维支气管镜检查，将患者胸部 CT 结 果显示的病变支气管部位作为灌洗部位，将 20 mL 0.9% 氯化钠注射液经支气管镜(日本奥林巴斯公 司， BF260)灌入， 负压吸引 BALF 至无菌瓶。(2) 涂片制备：打开装盛 BALF 标本的无菌瓶，仔细观 察标本，使用折断的竹签茬端，挑取痰标本中干 酪样、脓样或可疑部分 0.05~0.1 mL 于玻片正面右 侧 2/3 处均匀涂抹成 10 mm×20 mm 的卵圆形痰膜。 痰膜朝上静置，自然干燥后(约 30 min)以萋 - 尼 氏抗酸染色法染色，借助油镜观察。(3)聚合酶 链式反应检查：应用荧光定量 PCR 仪(北京海富 达科技有限公司， Mini8 Cube)和结核杆菌核酸测 定试剂盒，以 PCR 荧光探针法，对 BALF 结核杆 菌 DNA 进行荧光 PCR 检查。

　　1.2.2 T-SPOT.TB 检测 选用 T-SPOT.TB 试剂盒 (上海复星医学诊断公司) ，应用肝素抗凝采血管 采集受试者 8 mL 外周静脉血，并分离外周血单个 核细胞(PBMC)， 配置成 250 万细胞 /mL 的标准 溶液，取出微量板，加入细胞培养液，作为阴性对 照组;加入植物血凝素作为阳性对照，剩余 2 孔依 次加入 50 µL 的抗原 A(含早期分泌抗原靶点 6) 、 抗原 B(含结核分枝杆菌培养滤过蛋白 10) ，每孔 加入 100 μL 含 250 万外周血单个核细胞的上述细 胞悬液，之后将微量板置于 CO2 培养箱，以 37 ℃ 持续培养 16~20 h，应用磷酸盐缓冲溶液洗脱，酶 联显色，记录斑点数。阳性结果判定标准：阴性对 照孔斑点数 <6 时，任一测量孔斑点数 - 阴性对照 孔斑点数≥ 6;或阴性对照孔斑点数≥ 6.但 <10 个时，任意一测量孔斑点数≥ 2 倍对照孔斑点数。

　　1.2.3 BALF 罗氏培养和临床诊断结果

　　(1) 取3 mL BALF 标本于试管中，离心后取沉淀混合物1 mL 以 1 ∶ 2 的比例加入 4%NaOH 溶液， 振荡混 匀后静置 10~15 min， 取 0.5 mL 沉淀物接种至酸性 罗氏斜面培养基上，采用 37 ℃培养箱孵育，严格 按照实验室操作规范操作。接种后 3~7 d 观察，此 后每周观察一次菌落生长情况，有菌落生长需经 抗酸染色确认是否为分枝杆菌，若至第 8 周仍无菌 落生长为阴性结果。(2)具有发热、咳嗽、咯血、 胸闷等临床表现，血清抗结核抗体阳性，肺部组织 病理检查证实为结核病变。

　　1.3 观察指标 (1) 肺泡灌洗液罗氏培养和临 床诊断结果。(2)以肺泡灌洗液罗氏培养和临 床诊断结果为金标准， 比较 BALF 结核杆菌检测和 T-SPOT.TB 检测单项及联合检测诊断菌阴肺结核的准 确度、灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值。 1.4 统计学方法 应用 SPSS 22.0 软件进行统计学 分析，计数资料以率(%)表示，采用 χ2 检 验， 以 P<0.05 为差异有统计学意义。

　　2 结果

　　2.1 金标准诊断结果 82 例疑似肺结核患者，诊 断为肺结核 59 例， 检出率为 71.95%(59/82); 其 他疾病 23 例， 包括细菌性肺炎 8 例， 慢性阻塞性 肺疾病 6 例，支气管扩张 5 例，肺癌 4 例。

　　2.2 BALF 结核杆菌检测、T-SPOT.TB 检测单项及 联合检测诊断菌阴肺结核的效能比较 BALF 结核 杆菌检测联合 T-SPOT.TB 检测诊断菌阴肺结核的 灵敏度、特异度、准确度、阳性预测值和阴性预 测值均明显高于两者单项检测，差异有统计学意义 ( P<0.05);BALF 结核杆菌检测与 T-SPOT.TB 检 测的灵敏度、特异度、准确度、阳性预测值和阴性 预测值比较，差异均无统计学意义( P>0.05)。见 表 1、2.

　　3 讨论

　　肺结核患者常存在咳嗽、咯血等症状，严重时 会出现胸口发闷、恶心等症状 [6-8] 。目前，我国每 年新发肺结核患者中菌阴肺结核高达 70%，此类患者由于痰中含菌量较低，导致直接抗酸染色涂片不 易被检出结核分枝杆菌，漏诊率较高 [9-11]。

　　BALF 检查在病灶处直接取样， 具有局部微生 物浓度高、污染率低等特点，有助于增加结核分枝 杆菌检出率 [12-13]。但结核病灶虽于镜下有多种改 变，但改变无特异性，诊断时极易与炎症、肿瘤 等相混淆 [14] 。T-SPOT.TB 检测因其检查快速、准 确、受限小等优势而逐渐被临床推广，可对结核菌 进行快速检测 [15]，且所选择的抗原为致病性结核 分枝杆菌特有的片段，可有效避免非结核分枝杆菌 感染所造成的干扰，对于诊断菌阴肺结核有一定价 值 [16]。本研究结果显示， 82 例疑似肺结核患者肺 泡灌洗液罗氏培养和临床诊断结果诊断为肺结核病 59 例， 检出率为 71.95%。BALF 结核杆菌检测联合 T-SPOT.TB 检测诊断菌阴肺结核的灵敏度、特异 度、准确度、阳性预测值和阴性预测值均高于两者 单项检测; BALF 结核杆菌检测与 T-SPOT.TB 检测 的灵敏度、特异度、准确度、阳性预测值和阴性预 测值比较，差异均无统计学意义。分析原因为两种 检测方式联合诊断可做到优势互补，进而提高诊断 效能 [17]。因本研究纳入的样本量较少， 其结果尚需 后期加大样本量开展深入研究予以印证。

　　综上所述，BALF 结核杆菌检测联合 T-SPOT. TB 检测诊断菌阴肺结核的效能高于两者单项检测。

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