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摘要：目的研究中药制剂妇科洗对临床常见细菌的体外抑菌效果。方法96孔板微量肉汤稀释法，2，3，5-氯化三苯基四氮唑（ttc）显色法分别测定妇科洗药液对金黄色葡萄球菌（sa）、大肠埃希菌、白色念珠菌的体外抑菌作用，测定3种实验菌种的最低抑菌浓度（Mic）及最低杀菌浓度（MBc）。结果妇科洗药液对实验菌株呈现不同程度的敏感，对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、白色念珠菌的Mic分别为：500 mg/ml、1000 mg/ml、31.25 mg/ml。妇科洗药液对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、白色念珠菌的MBc分别为：>500 mg/ml、>1000 mg/ml、31.25 mg/ml。结论中药制剂妇科洗对白色念珠菌具有较好的体外抑菌和杀菌活性。
关键词：妇科洗；抑菌试验；白色念珠菌
本文引用格式：吴敏,王莹,庞芹.我院中药制剂妇科洗的体外抑菌作用[J].世界最新医学信息文摘,2019,19(60):227-228.
A Study on In Vitro Bacteriostatic Effect of Fukexi,a Preparation of TCM Made by Liuzhou Hospital of Traditional Chinese Medicine
WU Min,WANG Ying,PANG Qin
(Liuzhou Hospital of Traditional Chinese Medicine,Liuzhou Guangxi 545001)
ABSTRACT：Objective To study the in vitro bacteriostatic effect on common clinical bacterium of Fukexi,a preparation of TCM(traditional Chinese medicine)made by Liuzhou Hospital of Traditional Chinese Medicine.Methods 96-well plate microdilution broth method and 2,3,5-triphenyltetrozole chloride colorimetric(TTC)method were applied to determine the in vitro bacteriostatic effects of Fukexi on staphylococcus aureus(SA),escherichia coli and candida albicans respectively.The minimum bacteriostatic concentration(MIC)and minimum bactericidal concentration(MBC)of the three experimental strains were measured.Results Fukexi showed different sensitivity degree to the experimental strains.The MIC of Fukexi for staphylococcus aureus,escherichia coli and candida albicans was 500mg/mL,1000mg/mL and 31.25mg/mL respectively.The MBC of Fukexi for staphylococcus aureus,escherichia coli and candida albicans was greater than 500mg/mL,greater than 1000 mg/mL and 31.25 mg/mL respectively.Conclusion The preparation of TCM Fukexu has better in vitro antibacterial and bactericidal activities for candida albicans.
KEY WORDS：Fukexi;Bacteriostatic test;Candida albicans
0引言
近年来，随着抗菌药物的广泛应用，使耐药细菌不断增加，其耐药性也随之增强，导致感染性疾病例数增多，严重威胁到人类的生命健康，许多天然药物具有抗病、低毒、不易产生耐药性等特点与优势[1]，开展中药抗菌的应用和研究，对于细菌性疾病的防治具有重要意义[2]。妇科洗是我院根据临床验方研制的中药制剂，主要由苦参、苦树皮、千里光、银花藤、鱼腥草、野菊花、关黄柏、蛇床子等中药组成。有抗菌、消炎的作用，具较好的临床疗效。本实验通过测定妇科洗对金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus，S.aureus）、大肠埃希菌（Escherichia col，E.coli）、白色念珠菌（Candida albicans，C.albicans）的MIC和MBC，分析妇科洗对不同菌株的最低抑菌浓度，进行抑菌效果评价，研究中药方剂对常见的阴道炎致病菌的体外抑菌活性，为临床应用提供科学依据。
1实验材料
1.1受试菌株。标准菌：金黄色葡萄球菌（ATCC25923）、大肠埃希菌（ATCC25922）、白色念珠菌，由广西柳州市中医医院微生物室分离鉴定。
1.2药物与试剂。妇科洗制剂（柳州市中医医院制剂室，批准文号：桂药制字Z02060095，批号：20160811）；氯化三苯四氮唑（triphenyltetrazoliumchloride，TTC，中国华东师范大学化工厂，批号：20101026）；无水乙醇（成都市科龙化工试剂厂，批号：2016042801）；氯化钠注射液（浙江国镜药业有限公司，批号:C116080303）；沙氏葡萄糖琼脂培养基（广东环凯微生物科技有限公司，批号：3104864）；沙氏葡萄糖液体培养基（广东环凯微生物科技有限公司，批号：3104833）；营养琼脂（广东环凯微生物科技有限公司，批号：3103446）；营养肉汤（广东环凯微生物科技有限公司，批号：3103278）。
1.3实验仪器。DH64型电热恒温干燥箱（上海市跃进医疗器械一厂），DNP-9162BS-III型电热恒温培养箱（上海市新苗医疗器械有限公司），MJX-100B-2型霉菌培养箱（上海博迅实业有限公司医疗设备厂），JA5003N电子天平（上海精密科学仪器有限公司）。
2实验方法与结果
2.1药物的配制。取妇科洗1瓶（344 mg/mL），文火浓缩至86 mL，此时得到药液浓度为1000 mg/mL，对药液进行灭菌备用。在无菌条件下，将妇科洗药液用孔径0.22 um无菌滤头过滤除菌，用生理盐水按照倍比稀释法将药液稀释成1000 mg/mL、500 mg/mL、250 mg/mL、125 mg/mL、62.5 mg/mL、31.25 mg/mL、15.625 mg/mL、7.813 mg/mL、3.906 mg/mL、1.953 mg/mL的浓度梯度。
2.2待测菌液的制备。用接种环分别取金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、白色念珠菌菌落，用0.9%的生理盐水校正浓度至0.5麦氏比浊标准，再用营养肉汤（金葡菌、大肠菌）或沙氏葡萄糖液体培养基（白念）以1:100倍数稀释备用（含菌量约106CFU·mL-1）。
2.3MIC及MBC的测定。参考美国临床试验室标准委员会（CLSI）所公布的标准（CLSI，2007），采用微量稀释法测定各样品对不同菌株的MIC值。用微量加样器分别取各个浓度的药液50μl，依次由低到高浓度加到96孔板中并做好标记。再取50μl的各个菌液加入到96孔板中，使每孔接种菌量约5×105CFU·mL-1个菌。同时每个实验菌组设无菌对照组和无药对照组。无菌对照孔内加100μl营养肉汤，其中白色念珠菌组加沙氏葡萄糖液体培养基；无药对照孔内只加50μl营养肉汤和50μl菌液。将96孔板振荡1分钟，使孔内菌液与药液混匀后用封口胶密封好，置于35℃的恒温培养箱孵育（白色念珠菌组于25℃恒温培养箱孵育）。24小时后，每孔加入1%氯化三苯四氮唑（TTC）5μl，在恒温箱内孵育3小时后取出观察各孔颜色变化，有细菌生长孔显红色，不显红色的最低药物浓度为最低抑菌浓度（MIC）。观察药物MIC以上未见细菌生长的各孔，用移液枪移取50μl至不含药物的营养琼脂培养皿中，白色念珠菌移种至沙氏葡萄糖琼脂培养皿，分别置于35℃和25℃的培养箱内孵育。24小时后观察培养皿上有无细菌生长，计数少于5个菌落的为该药的最低杀菌浓度（MBC）[3]。
2.4MIC、MBC的测定结果。实验结果显示，妇科洗对金黄色葡萄球菌的MIC为500 mg/mL，MBC>1000 mg/mL；对大肠埃希菌的MIC为1000 mg/mL，MBC>1000 mg/mL；对白色念珠菌的MIC为31.25 mg/mL，MBC31.25 mg/mL。妇科洗对白色念珠菌的MIC和MBC均为31.25 mg/mL，没有出现MIC与MBC分离的情况，表现出较好的抗白色念珠菌活性，见表1，2。
3讨论
本实验结果表明，妇科洗药液对白色念珠菌表现出较好的抗菌活性，妇科洗从药性理论上来看，组方药材性味苦寒，归膀胱经，与肾相表里，功效抗菌、消炎。用于妇科各种炎症，即妇科洗的药效作用部位在阴道，阴道炎常见致病菌为白色念珠菌[4]，抑菌试验结果与临床辨证归经理论相一致。与西药或抗菌药物相比，中药可辨证论治，疗效稳定且较好、副作用极少，患者易接受。恢复正常的阴道微生物生态环境是治愈阴道病的根本，中药对阴道炎的治疗恰好从这个目的出发[5]。
本实验采用三种常见的菌株进行实验，菌株存在局限性，对细菌、真菌的抑制作用不全面，另妇科洗药液为中药组方，下一步将对抑菌活性成分进行分离纯化，明确抑菌的物质基础，扩大中药的临床药效价值，对开发民间中药资源的临床应用提供参考。
阴道炎是困扰女性身体健康的主要疾病之一，属祖国医学“阴痒”、“带下病”的范畴。临床西药治疗以抗菌药物、抗真菌治疗为主，随着细菌、真菌耐药情况越来越严峻，临床可选择的抗菌药物越来越少，而且存在用药周期长、肝功能损害、复发率高等弊端。抗菌中草药的研究，尤其是清热燥湿中药已成为近年来该领域的研究热点。我院妇科洗不仅对白色念珠菌、金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌具有良好的抑菌效果，对皮肤温和、无毒无刺激，且具有一定的消炎、镇痛作用，适用于妇科疾病预防及治疗，具有良好的市场应用和开发价值。
参考文献
[1]吕迪,李伟平,潘平,等.白及块茎和须根抑菌作用的研究[J].中国实验方剂学杂志,2013,19(5):212-216.
[2]王一安,陶芸仪,曲继旭,等.抗真菌中药的研究现状及成果转化分析[J].中医药导报,2017,23(5):43-46.
[3]曾春辉,杨柯,徐明光,等.广西藤茶总黄酮与β内酰胺类抗菌药物合用的体外抗菌活性研究[J].医药导报,2013,3(32):292-297.
[4]Shaaban O M,Youssef A E A,Khodry M M,et al.Vaginal douching by women with vulvovaginitis and relation to reproductive health hazards[J].BMC Women's Health,2013,100(1):1-6.
[5]段红波,宦臣臣,梁引库,等.中药治疗阴道病研究进展[J].中国实验方剂学杂志2017,23(19):227-234.
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