摘要：主要研究采用尸体灌注固定技术制作的梅花鹿塑化标本对教学和科普的意义。通过对新鲜梅花鹿样本进行科学处理，在固定环节，采用灌注技术完成；脱水脱脂时，采用丙酮梯度处理，有效去除水分与脂肪；后经修复等一系列精细操作，成功制作出高质量梅花鹿生物塑化标本。该标本姿态自然，内部结构清晰呈现，为相关研究、教育教学及科普展示提供了宝贵资源，不仅助力于深入了解梅花鹿解剖学特征与生理结构，推动相关学科发展，还能增强公众对梅花鹿等野生动物的保护意识，在多领域展现出重要应用价值。
关键词：梅花鹿,灌注,塑化
0引言
梅花鹿属偶蹄目鹿科哺乳动物，属中型鹿科物种，因在脊背两旁和体侧下缘镶嵌着许多排列有序的白色斑点，状似梅花而得名。在中国，梅花鹿主要分布在小兴安岭、东北、华南、华东及长白山区等地。梅花鹿全身都是宝，鹿茸、鹿血、鹿筋等药用价值较高；皮毛可制成饰品，市场价值明显；作为野生动物，其科研价值显著；也可作为观赏动物，为旅游业带来收入[1]。生物塑化技术是德国海德堡大学哈根斯（Von Hagens）教授在1978年发明的，主要是通过利用塑化剂置换标本中的脂肪和水，以达到长期储存标本的目的。目前，在各学校显示动物标本时，主要是采用图片、幻灯片等二维方式演示解剖学的基本概念、形态结构和临床病例等。本试验主要是利用最新生物塑化技术制作梅花鹿的全身塑化标本，使得更多的人了解和接触动物标本，还可以提高动物标本的知名度和社会影响力，使得动物标本的利用更加高效和便捷。
1材料与方法
1.1材料
1.1.1试验器材与试剂
常规手术器械（手术止血钳、手术刀、手术剪、镊子）、纱布、丝线、液态硅胶、玻璃仪器、皮尺、颜料、生理盐水、福尔马林溶液、丙酮、无水乙醇。
1.1.2试验材料
试验材料来自于人工养殖，选取体格四肢强健，皮毛、外形和结构均正常的成年梅花鹿2只。
1.2方法
1.2.1标本处死
利用空气栓塞法将动物处死。
1.2.2活体标本测量
先观察成年梅花鹿的身体特征，再进行编号后，用软皮尺测量样本梅花鹿的各个部位的长度并进行详细记录。内容包括梅花鹿身体高度、长度、宽度、颈围、胸围、头颈长、四肢长、尾巴长、耳长耳宽、角长和两足间距，并在自然状态下进行多角度拍照。
1.2.3标本解剖
根据要求，对标本先进行剥皮处理，注意报护被皮和皮的完整，保留鹿角、尾巴全部皮毛；沿标本腹正中线自下颌至尾部做纵切，保留口唇、鼻、眼、耳30 cm皮肤，四肢末端20 cm，其余皮毛全部剥离，去除多余脂肪、筋膜，暴露肌肉，打开胸腔和腹腔后，去除脏器，再用生理盐水冲洗，直到冲洗干净为止。
1.2.4标本固定
先将梅花鹿侧卧于解剖台上，分离出颈静脉、颈动脉，并做纵向切口。在颈动脉切口处插入吸头，且吸头尖头朝里，并用丝线把颈动脉和吸头扎紧。在切口处注入生理盐水进行灌注冲洗，待颈静脉切口处流出无色透明液体后，停止灌注。使用同样的方法，将配备好的15%的福尔马林溶液注入颈动脉进行灌注。灌注时注意勤检查，发现问题并及时处理，灌注时应采用先快后慢的原则。等到颈静脉切口处流出甲醛液体后，迅速结扎切口，防止甲醛液体流出。对于固定液不易到达部位，如眼、耳、外周血管等处，可使用医用注射器局部注射固定。灌注结束后，将标本放在福尔马林溶液中密封保存6个月后，取出备用。
1.2.5脱水脱脂
丙酮是常用的动物脱水脱脂剂，能够替换组织中的的脂肪和水分，本试验主要采用丙酮冷冻置换脱水脱脂技术。
首先，将解剖后的标本流水冲洗后控干水分，将干燥的标本放入-5℃冷藏箱内进行预冷12 h。然后，将预冷后的标本迅速放入-25℃的50%丙酮溶液中进行脱水脱脂，温度要保持在-25℃。同时，标本体积与丙酮溶液体积也一直保持在1∶10左右。14 d后将标本移入不同浓度（70%、80%、90%、95%）的丙酮溶液中，进行逐级脱水脱脂，各段脱水脱脂时间均为14 d。最后，将标本放入-25℃的100%的丙酮溶液中继续脱水脱脂2次，共持续时间约14 d，温度要保持在-25℃。
1.2.6真空渗透
真空渗透是塑化标本制作中的最关键步骤，其主要目的是把标本中的丙酮气化，并被塑化剂替换，达到最佳制作效果。
将标本从脱水溶剂中取出后，迅速放入塑化剂中，同时保证标本的每个面都要与塑化剂接触，以保证渗透效果。整个浸渍过程压力的降低是逐步进行的，最后是在负压或真空状态下，使标本中的丙酮气化。1～2个月后，需要在真空条件下观察标本约30 s，观察标本表面产生的气泡，若少于3个，表明标本中的丙酮已经被塑化剂替换。
1.2.7造型修复
经过脱水脱脂和真空渗透处理后的标本可能存在一定程度的变形，需要根据其主要特征，利用铁丝和纱布进行修复。先将标本从塑化剂中取出，清除标本表面的液态硅胶。然后根据梅花鹿活体时采集的原始数据和造型进行修复处理，保证其形态自然。
1.2.8标本硬化
把修复完成的标本放入40～55℃的固化箱中，进行加热固化15 d左右。最把标本表面的多余的硅胶去除干净，并对一些不理想或破损的地方进行修补。为使梅花鹿的姿态能完美展现出来，需要对标本进行固定组装。
2结果
利用尸体灌注固定技术制作的梅花鹿塑化标本，不仅能完美展示梅花鹿肌肉的形态、结构和特征，还能达到栩栩如生的程度，保留的部分皮毛光滑，颜色也与新鲜标本的一致，能够多方面展示梅花鹿的外部形态，最大化的保证标本的利用率，见图1。
3讨论
1992年大连医学院将生物塑化技术引入中国，为国内医学院校提供高质量的塑化标本。把生物塑化技术应用在动物标本的制作上，能长期保留动物的特征[2]，并在教学及科研领域中发挥着重要作用。生物塑化技术是现阶段国际上保存生物标本最先进的技术，也是国内外制作动物标本的一种新方法[3]。标本制作前，需通过摄影、测量记录梅花鹿五官特征及体表斑纹，避免处理后关键形态信息丢失。利用生物塑化技术制作的梅花鹿标本无味无毒，便于保存，肌肉清晰可见，同时更好地展示哺乳动物种类间的形态、结构和特征，能应用于教学、研究和科普。利用塑化标本进行教学改善了教师的工作环境，同时作为一种教学模式，弥补了传统的教具的缺点，能直观的通过标本的形式，呈现动物的形态结构。以便于动物学和动物医学相关专业进行学习、讲解和研究动物解剖学和生理学等专业知识。利用此技术制做成的标本可以使动物材料得以保存和利用，充分发挥它的资源价值。
对于小型标本标本，如家禽类，可以直接将其浸泡在福尔马林液中固定。对于需要保持特定姿势、形态的标本，通常采用灌注的方法。将福尔马林液注入血管系统，使福尔马林液体均匀分布到全身组织、器官；而利用尸体灌注固定技术做成的标本短期放置后也没有发霉腐败的现象[4]，所以此方法也可同时用于其他哺乳动物标本的制作。在梅花鹿的标本的制作中，采用动脉灌注、静脉放血的方法，可使大量的血液流出，能够让防腐剂能充分渗入组织，标本固定效果更好[5]。灌注时要注意控制灌注速度和压力，避免因压力过大导致组织损伤或变形。同时，要确保福尔马林液充分灌注到组织的各个部位，可通过观察组织的颜色变化或触摸组织的硬度来判断灌注是否充分。
本文中使用的防腐剂是世界公认应用效果最广的防腐固定剂福尔马林，在动物的防腐处理上，福尔马林也是最常用的防腐固定剂，价格低廉，渗透性强，容易与蛋白质中的小分子结合，蛋白质凝固更快，所以它对组织器官的固定硬化程度较高，同时也能完整保存脂肪，达到较好的灭菌和防腐效果[6]。制作完成后的梅花鹿标本可以放置冷库中或浸泡在5%～10%甲醛溶液中，达到长时间保存的目的。注意在使用福尔马林液时，需要注意其具有一定的刺激性和毒性，操作应在通风良好的环境中进行，操作人员要佩戴好防护装备，如口罩、手套等，避免接触皮肤和吸入挥发气体，引起身体不适。
在制作标本前，充分观察梅花鹿在自然状态下的各种姿态，包括站立、奔跑、休息等，熟悉其身体结构、肌肉线条和关节活动方式，以便在标本制作中精确还原。为使制作完成的标本能够更好地修复和还原，数据采集、测量时一定要准确，后期标本修复时就要根据原始数据进行一定程度的造型修复，保证达到其原始状态。在制作前尽量挑选体型正常、无明显外伤的梅花鹿个体，确保其身体各部分比例协调，为塑造自然美观的姿态提供基础条件。在处死梅花鹿后，尽快完成解剖灌注，时间越快越好，以减少组织自溶和腐败的影响。解剖过程中要小心操作，避免损伤重要的组织和器官，保持其完整性和自然形态。使用丙酮等有机溶剂进行脱水脱脂时，要注意使用不同浓度的丙酮梯度进行处理，从低浓度到高浓度逐步进行，以避免组织因过快脱水而产生变形或损伤。在标本固定修复阶段，为保证梅花鹿的形态姿势自然，需要利用一些铁丝、细线来进行固定，比如尾巴、耳朵等容易移动的地方。对于发生变形皱缩的部位再次利用铁丝和纱布进行造型修复。标本制作完成后，将标本存放在干燥、通风、避光的环境中，避免受到损伤。
梅花鹿因其特有的价值，遭受非法捕杀，梅花鹿的数量急剧减少，已成为濒危动物之一，现已经被列入中国国家一级保护野生动物。本研究制作出来的梅花鹿塑化标本，能很好的满足教学、科研和科普教育的需要。梅花鹿塑化标本是珍贵的教学资源，学生可以直观地观察到梅花鹿的整体形态和内部结构，将抽象的知识形象化，有助于更好地理解动物的解剖学特征、生理功能以及生物进化等相关知识，提高学习效果和教学质量。在博物馆、科技馆等科普场所展示梅花鹿塑化标本，普及生物多样性保护知识，激发人们对自然科学的兴趣和热爱。能够让公众近距离观察和了解梅花鹿的身体结构和生活习性，增强公众对野生动物的保护意识。同时为其他珍稀野生动物的研究提供有用参考，也可为相关野生动物专业提供研究和教学材料，为珍稀野生动物提供标本材料、普及和宣传保护知识[7]。
参考文献
[1]陈凤芝．东北梅花鹿的药用价值养殖优势与发展方向[J]．辽宁中医药大学学报，2010，12（4）：57-58.
[2]蒋孝东，冯培勋，程明亮，等．大型哺乳动物整体塑化标本的制作[J]．解剖学研究，2015，37（6）：520-521.
[3]王明鹤，冯培勋，程明亮，等．脊椎动物皮毛塑化标本的研制[J]．解剖学研究，2017，39（4）：288-289.
[4]钟震宇，孟玉萍，刘田，等．麋鹿尸体灌注固定技术以及应用[J]．野生动物学报，2020，41（4）：1 031-1 035.
[5]崔玉发．尸体防腐：动脉灌注静脉排血法[J]．卫生职业教育，2009，27（10）：76.
[6]鲁金波．动物解剖防腐固定保存液的改进[J]．内蒙古民族大学学报，2011，17（5）：43-44.
[7]刘靖，李国营，曾满红，等．生物塑化技术在保存生物类文物方面的应用研究[J]．解剖学研究，2011，33（1）：55-58.
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